目的 建立成年兔視網膜Muuml;ller細胞體外原代培養方法。方法 運用組織塊培養法。分離出成年兔視網膜神經感覺層，剪成1 mmtimes;1 mm大小組織塊，置于含有20%胎牛血清的Dulbecco改良Eagle培養液/F12培養，采用倒置相差顯微鏡、透射電子顯微鏡觀察及熒光免疫組織化學染色的方法進行培養細胞的鑒定。結果 培養的細胞塊3 d后可見部分細胞突起長出，7 d后整個組織塊周圍放射狀長出較多細胞。倒置相差顯微鏡下，培養細胞呈一端細胞體豐富膨大，另一端有一長突起，細胞核橢圓形，常有2個或2個以上核仁；透射電子顯微鏡下，細胞胞體大，細胞漿豐富，內含豐富的8～10 nm的微絲。熒光免疫組織化學法顯示細胞呈神經膠質纖維酸性蛋白和胞內視黃醛結合蛋白陽性，陽性率達95%以上。結論 運用組織塊培養法可培養出兔視網膜Muuml;ller細胞。
目的 研究甲潑尼龍對視網膜激光損傷后Müller細胞膠質纖維酸性蛋白（glial fibrillary acidic protein，GFAP）和增生細胞核抗原（proliferating cell nuclear antigen，PCNA）的影響。 方法 40只Sprague-Danley(SD)大鼠隨機分為治療組和對照組，治療組大鼠在視網膜激光光凝損傷后連續3 d腹腔注射劑量為30 mg/kg的甲潑尼龍，對照組大鼠腹腔注射等量生理鹽水；分別于激光光凝術后3、7、14、28 d各處死5只動物，取出眼球，用AFA固定液進行組織固定后做石蠟包埋、切片，用免疫組織化學方法測定GFAP和PCNA的表達。 結果 激光光凝損傷后3d ，治療組和對照組視網膜Müller細胞均表達PCNA，治療組PCNA表達明顯較對照組弱，3 d 后PCNA表達消失；激光光凝損傷后3 d ，治療組和對照組視網膜Müller細胞均表達GFAP，在各時間點治療組GFAP表達明顯較對照組弱。 結論 甲潑尼龍可減輕Müller細胞激光損傷后PCNA和GFAP的表達，最終影響視網膜激光光凝損傷的瘢痕修復，這為研究視網膜激光損傷和防護的機制提供了實驗證據。 (中華眼底病雜志, 2002, 18: 299-301)
目的 評估單純距舟關節融合術治療 Müller-Weiss 病的早期療效。 方法 2013 年 5 月—2015 年 2 月，采用單純距舟關節融合術治療 Müller-Weiss 病 13 例。其中男 2 例，女 11 例；年齡 42～67 歲，平均 59 歲。病程 8～20 年，平均 13 年。根據 Maceira 分期：Ⅲ期 7 例，Ⅳ期 6 例。術前患足負重位 X 線片測量足弓高度為（43.1±1.8）mm；側位 X 線片測量 Meary 角為（–2.8±2.3）°，距跟角為（5.8±2.4）°；Saltzman 位 X 線片測量跟骨外翻角為（–2.0±0.7）°。術前美國矯形足踝協會（AOFAS）中足評分為（43.5±12.4）分，疼痛視覺模擬評分（VAS）為（7.3±1.5）分。 結果 患者均獲隨訪，隨訪時間 14～39 個月，平均 20 個月。患足疼痛及間歇性跛行等癥狀均消失，距舟關節均骨性融合，融合時間 12～16 周，平均 13 周。術后無切口感染、皮膚壞死、內固定物斷裂等并發癥發生。末次隨訪時，足弓高度、Meary 角、距跟角和跟骨外翻角分別為（52.5±2.2）mm、（1.3±2.2）°、（16.5±3.7）°、（0.4±0.7）°，AOFAS 中足評分為（83.8±9.1）分，VAS 評分為（1.0±0.4）分，均較術前顯著改善，差異有統計學意義（P<0.05）。 結論 對于保守治療無效的 Müller-Weiss 病患者，如距下關節和跟骰關節受累較少，單純距舟關節融合術是一種可靠、有效的治療方法。
目的觀察叔丁基對苯二酚（tBHQ）對高糖環境下視網膜Müller細胞中核因子E2相關因子2（Nrf2）、血紅素氧合酶1（HO-1）、磷脂酰肌醇-3激酶（PI3K）的表達影響；初步探討tBHQ的抗氧化及抗凋亡作用。方法大鼠視網膜Müller細胞分為正常糖組（5.5 mmol/L）（N組）、高糖組（45.0 mmol/L）（HG組）、tBHQ干預組（HG+tBHQ組）。HG+tBHQ組Müller細胞培養48 h后，加入tBHQ 20 μmol/L預處理劑誘導Nrf2和HO-1的表達。免疫熒光染色法鑒定Müller細胞；蛋白免疫印跡法和實時熒光定量聚合酶鏈反應檢測各組Müller細胞中Nrf2、HO-1、PI3K、B淋巴細胞瘤-2（Bcl-2）、Bax蛋白和基因的表達；流式細胞儀檢測各組Müller細胞的凋亡。結果培養的Müller細胞細胞體大，細胞漿豐富；細胞核呈圓形或卵圓形，邊界清晰。HG組Müller細胞中Nrf2（t=4.114）、HO-1（t=9.275）蛋白表達較N組升高，差異有統計學意義（P=0.006、0.000）。HG+tBHQ組Müller細胞中Nrf2（t=7.847）、HO-1（t=7.947）、PI3K（t=5.397）、Bcl-2（t=6.825）蛋白表達較HG組升高，差異有統計學意義（P=0.000、0.000、0.002、0.000）；Bax蛋白表達較HG組降低，差異有統計學意義（t=14.998、P=0.000）。HG組Müller細胞中Nrf2（t=7.292）、HO-1（t=15.014）mRNA較N組升高，差異有統計學意義（P=0.000、0.000）。HG+tBHQ組Müller細胞中Nrf2（t=18.046）、HO-1（t=39.458）、PI3K（t=4.979）、Bcl-2（t=9.535）mRNA較HG組升高，差異有統計學意義（P=0.000、0.000、0.003、0.000）；Bax mRNA較HG組降低，差異有統計學意義（t=16.520、P=0.000）。HG組Müller細胞凋亡率較N組增高，差異有統計學意義（t=39.905、P=0.000）；HG+tBHQ組Müller細胞凋亡率較HG組降低，差異有統計學意義（t=21.083、P=0.000）。結論tBHQ通過上調視網膜Müller細胞中Nrf2、HO-1、PI3K的表達，抑制Müller細胞的凋亡。
目的觀察丁基苯酞（NBP）對過氧化氫（H2O2）誘導下視網膜Müller細胞凋亡的保護作用。方法體外培養的人視網膜Müller細胞分為正常對照組、模型組（H2O2組）、實驗組（H2O2+NBP組）。H2O2組、H2O2+NBP組細胞培養液中加入200 μmol/L H2O2刺激2 h后，H2O2組更換為完全培養基，H2O2+NBP組更換為含1 μmol/L NBP的完全培養基。正常對照組為常規培養細胞。蘇木精-伊紅（HE）染色觀察各組細胞形態改變；噻唑藍（MTT）比色法檢測NBP作用24、48 h后各組細胞活性；Hoechst33258染色觀察各組細胞凋亡情況；LIVE/DEAD®細胞活性/細胞毒性試劑盒檢測各組細胞生存力；二氯熒光素二乙酸酯（DCFH-DA）+內質網（ER）紅色熒光探針（ER-Tracker Red）雙染色觀察各組細胞ER中活性氧（ROS）的表達水平。單因素方差分析聯合Dunnett統計學方法進行數據分析。結果HE染色結果顯示，H2O2+NBP組細胞數量較H2O2組增加。MTT比色法檢測結果發現，NBP作用24、48 h后，正常對照組與H2O2組、H2O2組與H2O2+NBP組細胞生存力比較，差異均有統計學意義（t=28.96、3.658、47.58、20.33，P＜0.001、0.022）。Hoechst33258結果顯示，H2O2+NBP組細胞少數細胞核邊集呈新月狀且細胞核碎裂減少，其余細胞藍色熒光均勻。LIVE/DEAD®細胞活性/細胞毒性試劑盒檢測結果顯示，H2O2組中呈紅色熒光的死亡細胞明顯增多，呈綠色熒光的活細胞數量顯著減少；H2O2+NBP組呈綠色熒光的活細胞數量增多，呈紅色熒光的死亡細胞減少。DCFH-DA+ER-Tracker Red雙染色結果顯示，H2O2組細胞中綠色熒光強度明顯增強；H2O2+NBP組細胞中綠色熒光強度較H2O2組明顯降低。結論NBP通過抑制ROS的產生緩解H2O2誘導的人視網膜Müller細胞凋亡。
目的探討距舟關節融合聯合跟骨截骨治療 Müller-Weiss 病的早期療效。 方法2015 年 6 月—2017 年 2 月，對 14 例（14 足）保守治療無效的 Müller-Weiss 病患者行距舟關節融合聯合跟骨截骨治療。男 3 例，女 11 例；年齡 35～56 歲，平均 46.2 歲。左足 6 例，右足 8 例。Maceira 分期：Ⅲ期 5 例，Ⅳ期 9 例。病程 4～12 年，平均 7 年。術前攝 X 線片測量 Saltzman 位后足力線為（9.8±2.8）°，側位跟骨傾斜角（calcaneal pitch angle，CPA）為（14.7±5.1）°，側位距骨第 1 跖骨角（Meary 角）為（4.8±2.8）°，正位距骨第 1 跖骨角（talar 1 meta-tarsal angle，T1MA）為（25.0±7.3）°；無鄰近關節骨關節炎。術前疼痛視覺模擬評分（VAS）為（5.9±1.5）分，美國矯形外科足踝協會踝與后足評分（AOFAS）為（58.8±17.6）分。 結果患者均獲隨訪，隨訪時間 14～27 個月，平均 22.3 個月。術后 2 例出現足內側麻木感，2 例切口感染；其余患者無明顯不適。末次隨訪時，VAS 評分為（1.6±1.3）分，AOFAS 評分為（90.6±2.7）分，均較術前明顯改善（t=8.18，P=0.00；t=–6.95，P=0.00）。X 線片復查示，患者距舟關節及跟骨截骨均達骨性愈合；測量 Saltzman 位后足力線為（–2.5±2.7）°，側位 CPA 為（25.0±5.2）°、Meary 角為（2.6±2.1）°，正位 T1MA 為（8.1±3.8）°；除 Meary 角與術前比較差異無統計學意義（t=1.53，P=0.15）外，Saltzman 位后足力線、CPA、T1MA 與術前比較差異均有統計學意義（t=11.93，P=0.00；t=–8.89，P=0.00；t=8.05，P=0.00）。 結論對于保守治療無效且無鄰近關節骨關節炎的 Müller-Weiss 病患者，采用距舟關節融合聯合跟骨截骨治療可獲得較好的早期療效。
目的高表達多聚嘧啶序列結合蛋白相關剪接因子（PSF）對糖基化終產物（AGEs）誘導下視網膜Müller細胞凋亡的影響。方法實驗研究。體外培養的人Müller細胞分為正常細胞組（N組）、空白對照組（N+AGEs組）、空載體對照組（Vec+AGEs組）及PSF高表達組（PSF+AGEs組）。N組為常規培養的Müller細胞；N+AGEs組僅做轉染處理并聯合AGEs誘導；Vec+AGEs組、PSF+AGEs組利用轉染試劑脂質體2000分別將增強型綠色熒光蛋白（pEGFP）空載體、pEGFP-PSF真核表達質粒導入Müller細胞并聯合AGEs誘導。細胞轉染24 h后應用AGEs（150 μg/ml）誘導72 h，采用HE、Hoechst 33258染色觀察各組細胞形態；分別采用MTT比色法、ELISA細胞凋亡試劑盒及2’,7’-二氯熒光素二乙酸酯法檢測N+AGEs組、Vec+AGEs組、PSF+AGEs組細胞生存力、細胞凋亡值及細胞內ROS水平。結果N組細胞形態飽滿，胞漿染色均一；N+AGEs組、Vec+AGEs組細胞體積縮小，胞質致密濃縮、嗜酸性染色增強；PSF+AGEs組細胞形態尚飽滿，胞漿染色較均勻，胞核染色均一。N+AGEs組、Vec+AGEs組、PSF+AGEs組細胞生存力分別為0.42±0.11、0.35±0.12、0.68±0.12；細胞凋亡值分別為1.08±0.16、0.96±0.20、0.44±0.08；細胞內ROS水平分別為28 833.67±3 550.06、28 356.67±4 854.81、18 616.00±3 382.54。與N+AGEs組、Vec+AGEs組比較，PSF+AGEs組細胞生存力明顯提高（F=20.65，P=0.000），細胞凋亡值（F=43.43，P=0.000）及細胞內ROS水平（F=18.86，P=0.000）明顯降低，差異均有統計學意義。結論高表達PSF通過抑制ROS產生來緩解AGEs誘導下人Müller細胞凋亡，從而發揮對Müller細胞的保護作用。
目的觀察普羅布考對高糖環境下人視網膜Müller細胞中特化蛋白1（SP1）/細胞骨架相關蛋白（Keap1）/核因子E2相關因子2（Nrf2）/半胱氨酸連接酶催化亞基（GCLC）表達的影響；初步探討普羅布考的抗氧化作用。方法體外培養的人Müller細胞分為正常糖組（5.5 mmol/L）、高糖組（25.0 mmol/L）、正常糖+普羅布考組、高糖+普羅布考組；后兩組中加入100 μmol/L普羅布考。免疫熒光染色法鑒定Müller細胞；免疫熒光染色法和實時RP-PCR（qRT-PCR）檢測各組Müller細胞中SP1、Keap1、Nrf2、GCLC蛋白、mRNA的表達。兩組間數據比較采用獨立樣本t檢驗。結果體外培養的人Müller細胞谷氨酰胺合成酶染色陽性率＞95%。免疫熒光染色結果顯示，Müller細胞中SP1、Keap1、Nrf2、GCLC蛋白均呈陽性表達。qRT-PCR結果顯示，與正常糖組比較，高糖組Müller細胞中SP1（t=28.30，P＜0.000）、Keap1（t=5.369，P=0.006）、Nrf2（t=10.59，P=0.001）mRNA表達顯著上調，GCLC顯著下調（t=4.633，P=0.010），差異均有統計學意義。與高糖組比較，高糖+普羅布考組Müller細胞中SP1（t=12.60，P=0.000）、Keap1（t=4.076，P=0.015）mRNA表達顯著下調，Nrf2（t=12.90，P=0.000）、GCLC（t=15.96，P＜0.000）mRNA表達顯著上調，差異均有統計學意義。結論普羅布考通過抑制高糖誘導Müller細胞中SP1、Keap1的表達，上調Müller細胞中Nrf2、GCLC的表達，發揮抗氧化作用。
神經干細胞（NSC）是一類能向神經細胞和膠質細胞分化的特殊干細胞。Müller細胞作為視網膜主要內源性NSC，具有在視網膜損傷后進入細胞周期增生并分化為神經細胞的能力。在脊椎動物中，視網膜Müller細胞的內源性NSC自發再生有著很高的效率，而哺乳動物這一能力幾乎完全消失。深入研究發現，Ascl1、Sox2、Lin28、Atoh7等部分轉錄因子具有促進Müller細胞增生并分化為神經細胞的功能。而Ascl1聯合組蛋白脫乙酰酶抑制劑更能使小鼠Müller細胞分化的神經細胞整合進入已有的視網膜并能對光做出反應，從而可能挽救視力。但與斑馬魚相比，哺乳動物Müller細胞增生再生能力依然十分有限。尋找更多能增強Müller細胞分化能力的新因子將成為亟待解決的重要問題。
缺血性視網膜病變會導致微血管損傷、炎癥進展和新生血管出現，是造成視力損傷的重要原因。在這些病理過程中，視網膜膠質細胞的作用不容忽視，它們用途廣泛，與各類細胞相互作用，共同維持視網膜內環境穩定并限制疾病進展。因此，膠質細胞的活化和增生幾乎是所有視網膜疾病中普遍存在的反應。其中，小膠質細胞和Müller細胞作為兩種主要的內源性視網膜膠質細胞，彼此影響、共同作用甚至相互依存，能夠通過不同反應發生形態及功能轉換，決定視網膜的損傷程度。這些反應不僅關乎疾病進展程度，也對維持神經元及光感受器存活至關重要。了解缺血性視網膜病變中小膠質細胞與Müller細胞間可能存在的交互作用，有望為尋找更具有針對性的早期治療靶點提供思路。