腺相關病毒載體（AAV）是目前最重要的病毒工具，已在基因治療領域得到廣泛應用；因其具有體積小、無包膜、無致病性等特點，故而是治療遺傳性視網膜疾病的主要手段之一。目前針對原癌基因酪氨酸激酶基因治療視網膜色素變性、ND4基因治療Leber遺傳性視神經病變以及Rab伴隨蛋白-1基因治療無脈絡膜癥的臨床試驗均發現約一半的患者視力改善。針對AAV基因治療Leber先天性黑矇、X連鎖視網膜劈裂癥、全色盲以及老年性黃斑變性的臨床試驗也正在開展。而關于Stargardt病、Usher 綜合征、真性小眼球的AAV基因治療尚在動物實驗或理論階段。目前AAV基因治療主要用于隱性遺傳性視網膜疾病，對于顯性遺傳性視網膜疾病需采用成簇規律間隔的短回文重復序列及其相關蛋白9技術等來干預。對于遺傳性視網膜疾病的治療，這將是一個重要且復雜的系統性工程，需投入更多人力物力共同參與和研究，期待在不久的將來能有大的突破。
目的觀察不同濃度氯喹對N-甲基-D-天冬氨酸（NMDA）損傷模型小鼠RGC的保護作用及可能調控機制。方法健康雄性C57/BL6小鼠54只，隨機分為氯喹低濃度組、氯喹高濃度組、PBS對照組，每組均為18只。氯喹低濃度組、氯喹高濃度組小鼠分別按體重10、100 mg/kg劑量腹腔注射氯喹；PBS組小鼠腹腔注射等體積PBS。腹腔注射1次/d，連續2 d后，氯喹低濃度組、氯喹高濃度組小鼠左眼玻璃體腔注射5 nmol/L NMDA，對側眼注射等體積PBS。建模后7 d，視網膜鋪片RGC染色，計數RGC存活數目；建模后9、10 d，分別行視動反應和ERG檢查；建模后11 d，行視網膜免疫熒光染色檢測各組小鼠視網膜膠質纖維酸性蛋白（GFAP）熒光表達和實時熒光定量PCR（RT-PCR）檢測各組小鼠視網膜GFAP、TNF-α、IL-6 mRNA表達。各組間RGC密度、視敏度、光負性反應（PhNR）波振幅比較采用單因素方差分析。結果建模后7 d，與PBS對照組小鼠RGC密度比較，氯喹低濃度組顯著升高，差異有統計學意義（F=54.41，P＜0.01）；氯喹高濃度組降低，但差異無統計學意義（F=1.18，P＞0.05）。氯喹低濃度組小鼠視敏度、PhNR波振幅均高于PBS對照組，差異有統計學意義（F=9.10、17.60，P＜0.05、＜0.01）。氯喹低濃度組小鼠視網膜GFAP綠色熒光表達明顯少于PBS對照組、氯喹高濃度組，差異有統計學意義（F=23.66，P＜0.05）。低濃度氯喹組小鼠視網膜GFAP（F=110.20）、IL-6（F=167.60）、TNF-α（F=17.78）mRNA表達較高濃度氯喹組、PBS對照組顯著下降，差異有統計學意義（P＜0.010、＜0.001、＜0.010）。結論低濃度氯喹對NMDA損傷所致RGC丟失有保護作用，其作用機制可能與抑制膠質細胞活化與炎癥反應有關；高濃度氯喹會加重RGC凋亡。
目的探討新型光遺傳學工具Channelrhodopsin-XXM2.0（XXM2.0）、Channelrhodopsin-PsCatCh2.0（PsCatCh2.0）的光敏感性及動力學特征，分析其是否可用于光遺傳學視覺功能的恢復。方法通過分子生物學技術將XXM2.0和PsCatCh2.0的基因片段連接到包含抗氨芐青霉素篩選基因和報告基因的載體pCIG（c）-msFoxn3上，形成新質粒pCIG（c）-msFoxn3-XXM2.0、pCIG（c）-msFoxn3-PsCatCh2.0。將構建的新質粒轉染到HEK 293T細胞上，用HEKA膜片鉗系統行全細胞模式記錄對光反應。在2.7×1016、4.7×1015、6.4×1014 photons/（cm2·s）的光強下記錄電流大小；在2.7×1016 photons/（cm2·s）光強下刺激XXM2.0、PsCatCh2.0并讓其充分恢復，在Clampfit 10.6軟件中分析開放和關閉時間常數；在相同光強下，設置2～32 Hz的光脈沖刺激，記錄XXM2.0、PsCatCh2.0的響應情況，并在重復光刺激后間隔4000 ms和200 ms來分析電流衰減情況。組間比較均采用獨立樣本t檢驗。結果在XXM2.0、PsCatCh2.0序列兩端引入限制性內切酶位點EcoRⅠ和EcoRⅤ，酶切后通過T4 DNA連接酶成功構建新質粒pCIG（c）-msFoxn3-XXM2.0和pCIG（c）-msFoxn3-PsCatCh2.0，并轉染表達在HEK 293T細胞上。XXM2.0和PsCatCh2.0均表現出光強依賴性，光強越大電流越大。在視網膜安全閾值內的光強6.4×1014 photons/（cm2·s）刺激下，XXM2.0和PsCatCh2.0仍產生較大電流，分別為（92.8±142.0）、（13.9±5.6）pA；兩者比較，差異無統計學意義（t=1.24、1.24，P=0.28、0.29）。XXM2.0、PsCatCh2.0的開放時間常數分別為（23.9±6.7）、（2.4±0.8）ms，關閉時間常數分別為（5 803.0±568.2）、（219.9±25.6）ms；兩者比較，XXM2.0開放時間常數、關閉時間常數均較PsCatCh2.0大，差異均有統計學意義（t=7.10、31.60，P=0.00、0.00）。在響應頻率方面，XXM2.0和PsCatCh2.0均能很好地響應32 Hz的高頻率脈沖光刺激，并在較長時間（4000 ms）和較短時間（200 ms）間隔的重復光刺激后均保持較小的電流衰減率。結論XXM2.0和PsCatCh2.0均可在對視網膜安全的光強條件下被激活，并都能以較低的電流衰減來響應高頻率（至少32 Hz）的脈沖光刺激，均滿足利用光遺傳學來恢復視覺功能所需的光敏蛋白特性。
視網膜退行性病變是由于視網膜色素上皮細胞及光感受器細胞功能改變所致的致盲性眼病。干細胞移植、基因治療、視網膜假體植入等新生物學技術在視網膜退行性病變患者視覺功能恢復上已經取得巨大的進步，但目前仍然面臨許多困難。光遺傳學是一種將光學、生理學和遺傳學結合的交叉學科的新技術，可將光敏蛋白表達在視網膜退行性病變的視網膜神經元上，利用光刺激表達光敏蛋白的細胞，通過產生去極化或超極化反應，使其重獲感光能力。相較于干細胞移植治療的免疫排斥、基因治療的個體化差異及視網膜假體植入的創傷性大等局限，光遺傳學技術具有顯著優勢，同時也亟待解決時空分辨率低和光敏感性不足的問題。隨著光遺傳學技術的逐步發展，其必然和其他領域形成更深層次地交叉、融合，從而有助于視網膜退行性病變患者視覺功能的恢復。
X連鎖視網膜劈裂癥（XLRS）是一種X染色體隱性遺傳視網膜疾病，以雙側視網膜受累多見。患者常表現為視力損害、內層視網膜劈裂所致黃斑區輪輻狀囊樣改變以及視網膜電圖b波相對于a波不成比例的下降。目前針對此病尚無有效的治療方法，通常以并發癥的治療為主。近年來隨著人們對XLRS認識的不斷加深，腺相關病毒（AAV）介導的基因治療成為了干預該病潛在的新途徑。目前有兩項XLRS基因治療臨床試驗正在開展。這兩項臨床試驗評估了重組AAV-RS1載體的眼部安全性和耐受性，同時探索了其在XLRS患者中使用的安全劑量，但XLRS患者視網膜結構和功能的恢復情況并不理想。相信隨著各項研究的深入和臨床試驗的進展，未來有望為XLRS患者提供更精準有效的治療。
無脈絡膜癥（CHM）是一種X連鎖隱性遺傳性視網膜疾病，表現為光感受器、視網膜色素上皮和脈絡膜的進行性退化。臨床表現為緩慢進行性夜盲及視野缺損，目前尚無有效治療方法。眼底檢查技術的發展為臨床提供了更多輔助診斷和隨訪觀察的指標，二代測序技術的出現進一步提高了遺傳性視網膜疾病的診斷率，逐漸加深了對CHM發病機制及自然病程的認識。CHM基因治療的多項臨床試驗在十年內已經取得一定效果，在基因治療的載體優化、治療時間窗選擇及試驗不良事件的處理等方面均有重要進展。未來需要加深對CHM自然病程的認識，針對治療時間窗采取個性化的治療及終點評價指標。通過評估疾病嚴重程度的差異，針對不同階段采取個性化治療方案更有益于預后。
光遺傳學技術是一種將光學和遺傳學技術相結合的新興技術。其主要原理是應用遺傳學方法將特異的視蛋白導入目標神經元, 再用相應波長或頻率的光刺激視蛋白, 使神經元興奮或抑制, 進而控制特定神經環路的活動, 最終起到調控實驗動物生理活動和行為的作用。在視網膜色素變性、老年性黃斑變性等視網膜變性性疾病中, 應用光遺傳學技術玻璃體腔或視網膜下注射視蛋白基因, 由外界給予相應的光照激活視蛋白, 模擬并代替視網膜光感受器功能, 可在一定程度上恢復患者視力。但其存在病毒轉染有潛在風險、目標細胞的準確選擇難以把握、治療后視力分辨率能否恢復正常尚不確定等局限性。隨著光敏感度更高、更易被激發的新型視蛋白和具有更高轉染效率的病毒載體不斷研發, 相信光遺傳學技術將會應用在更多眼科領域。
眼科影像學檢查是眼部疾病早期篩查、評估和診斷的主要依據。近年隨著計算機數據分析能力的提高、新算法研究的深入和互聯網大數據平臺的普及，人工智能（AI）發展迅猛，成為醫學領域輔助診斷的前沿研究熱點。AI準確、高效的顯著優勢在處理圖像相關資料中具有極大的應用價值。AI在眼科領域的應用，不僅有助于推動眼科AI研究的發展，也能助力眼科診斷新型醫療服務模式建立，推進防盲治盲的進程。未來眼科AI的研究應綜合應用多模態的成像數據，對復雜性眼病進行綜合性的輔助診斷；整合標準化、高質量數據資源，提高算法性能。
目的觀察新型光敏蛋白PsCatCh2.0轉染至視網膜色素變性模型rd1小鼠視網膜1年后視網膜神經節細胞（RGC）對光反應、視網膜炎癥及細胞凋亡情況。 方法雄性rd1小鼠24只隨機均分為rd1實驗組、rd1對照組，各12只。rd1實驗組小鼠鼻側角鞏膜緣下1 mm處玻璃體腔注射重組腺相關病毒（rAAV）2/2-巨細胞病毒啟動子（CMV）-PsCatCh2.0-增強型綠色熒光蛋白（EGFP）1.5 μl，2周后顳側角鞏膜緣下1 mm處再次注射相同劑量的重組病毒。注射后1年，用膜片鉗技術記錄表達PsCatCh2.0的RGC對光反應；行免疫熒光染色評估PsCatCh2.0在視網膜中的表達情況；行視網膜鋪片染色評估重組病毒的轉染效率，并計數RGC；使用蘇木精-伊紅染色評估內層視網膜厚度；采用蛋白免疫印跡法檢測視網膜中核因子（NF）-κB p65的蛋白表達；采用實時熒光定量聚合酶鏈反應檢測各組小鼠視網膜中腫瘤壞死因子（TNF）-α、白細胞介素（IL）-6、B淋巴細胞瘤-2相關X蛋白（Bax）mRNA相對表達量；采用原位末端標記法觀察各組小鼠視網膜細胞凋亡情況。組間比較采用單因素方差分析。 結果注射重組病毒后1年，表達PsCatCh2.0的RGC產生的電流約為30 pA。PsCatCh2.0-EGFP與RGC呈共定位表達；少量與無長突細胞共定位，幾乎不與水平細胞、雙極細胞共定位。rd1實驗組、rd1對照組小鼠RGC密度、內層視網膜厚度比較，差異均無統計學意義（F=14.35、0.05，P＞0.05）。rd1實驗組小鼠視網膜NF-κB p65蛋白表達量以及TNF-α、IL-6 mRNA表達均低于rd1對照組，差異均有統計學意義（F=4.61、5.91、5.78，P＜0.05）。rd1實驗組小鼠視網膜中呈紅色熒光的凋亡細胞數量少于rd1對照組， Bax mRNA表達低于rd1對照組，差異有統計學意義（F=7.52，P＜0.01）。結論玻璃體腔注射rAAV2/2-CMV-PsCatCh2.0-EGFP后1年，表達PsCatCh2.0的RGC仍可產生光電流；長期轉染表達PsCatCh2.0對RGC無明顯細胞毒性作用，也不增加視網膜的炎性反應。
目的觀察并分析象限性視網膜色素變性（sector RP）的致病基因及臨床表型。方法回顧性臨床研究。2021年4月于武漢大學人民醫院眼科就診的sector RP一家系的1例患者（先證者）及其父母納入研究。詳細詢問病史并行最佳矯正視力（BCVA）、眼底彩色照相、自身熒光（AF）、視野、光相干斷層掃描（OCT）、視網膜電圖（ERG）、熒光素眼底血管造影（FFA）、吲哚青綠血管造影（ICGA）檢查。采集先證者及其父母的外周靜脈血3 ml，提取全基因組DNA。全外顯子測序，采用Sanger測序及實時定量聚合酶鏈反應對變異位點進行驗證，并進行生物信息學分析和共分離分析。結果 先證者男，17歲。雙眼視力漸進性下降2年。雙眼BCVA均為0.4；視網膜血管變細，黃斑區營養不良，無明顯色素沉著；眼底AF檢查，鼻下象限視網膜變性呈斑駁影，黃斑呈“花瓣狀”強AF；視野檢查，雙眼對稱性顳上方視野缺失；OCT檢查，中心凹區域以外光感受器層消失；ERG檢查，暗適應波幅降低、明適應呈熄滅狀態；FFA和ICGA檢查，視盤周圍及下方視網膜色素上皮層萎縮。其父母眼部表型正常。基因檢測結果顯示，先證者SPATA7基因第10號外顯子存在一錯義突變c.1112T>C（p.Ile371Thr），導致編碼的SPATA7蛋白第371號氨基酸由異亮氨酸變成蘇氨酸；其母親攜帶c.1112T>C雜合突變。根據美國醫學遺傳學和基因組學學院（ACMG）遺傳變異分類標準與指南，該變異為意義不明確變異。同源染色體存在一來源于父親的拷貝數變異，導致SPATA7基因第10號外顯子缺失。根據ACMG指南，該變異為可能致病變異。結論sector RP可累及黃斑，導致黃斑營養不良；SPATA7基因c.1112T>C（p.Ile371Thr）錯義突變可能是本家系的致病原因。