目的 探討聯合使用DNA甲基化酶抑制劑（DNA methyltransferase inhibitor, DNMTi）和組蛋白脫乙酰化酶抑制劑（histone deacetylase inhibitor, HDACi）干預膽管癌細胞后，對E-cadherin 基因的表達和細胞侵襲力的影響。方法 根據給予膽管癌細胞不同的處理方法分為4組： 空白對照組、肼屈嗪組、丙戊酸組和肼屈嗪+丙戊酸組，用RT-PCR、Western blot檢測E-cadherin基因和蛋白的表達，用Transwell法檢測細胞體外侵襲、轉移力。結果 空白對照組和丙戊酸組E-cadherin 基因和蛋白均無表達，肼屈嗪+丙戊酸組E-cadherin基因和蛋白表達量均明顯高于肼屈嗪組（ P ＜ 0.01）； 同時肼屈嗪+丙戊酸組細胞的侵襲、轉移力較空白對照組、丙戊酸組和肼屈嗪組明顯下降（ P ＜ 0.01）。結論 DNMTi與HDACi協同恢復E-cadherin基因的表達，降低細胞侵襲、轉移力，對于膽管癌的治療有著重要的作用
目的 探討COPD 大鼠肺泡Ⅱ型上皮細胞( AECⅡ) 炎癥因子表達是否與組蛋白修飾有關。方法 熏煙法建立大鼠COPD 模型。取大鼠肺組織進行病理觀察, 提取AECⅡ 進行堿性磷酸酶染色鑒定和電鏡鑒定; 實時定量PCR 檢測AECⅡ 三種趨化因子: 單核細胞趨化蛋白1( MCP-1) 、IL-8及巨噬細胞炎性蛋白2α( MIP-2α) 的mRNA 表達; Western blot 檢測組蛋白去乙酰化酶2( HDAC2) 蛋白表達; 染色質免疫共沉淀( ChIP) 檢測趨化因子啟動子區組蛋白H3、H4 乙酰化和H4K9甲基化修飾情況。結果 COPD 組IL-8、MCP-1、MIP-2αmRNA 表達較正常對照組分別增加4. 48 倍、3. 14 倍、2. 83 倍; COPD組AECⅡ細胞HDAC2 蛋白表達較正常對照組降低( 0. 25 ±0. 15 比0. 66 ±0. 15,P lt;0. 05) , 且HDAC2 的下降程度與IL-8、MCP-1、MIP-2αmRNA 表達增高程度呈負相關( r 值分別為- 0. 960、- 0. 914、- 0. 928, P 均lt;0. 05) 。COPD 組趨化因子基因啟動子區H3、H4 乙酰化水平較正常對照組均升高, H4K9 甲基化水平則降低( P 均lt; 0. 05) 。結論 COPD 模型大鼠AECⅡ的IL-8、MCP-1、MIP-2α三種趨化因子基因表達增加, HDAC2 介導的組蛋白修飾在COPD炎癥反應中發揮重要作用。
目的 明確哮喘大鼠肺T淋巴細胞中的組蛋白去乙酰基酶1( HDAC1) 蛋白表達水平及組蛋白整體乙酰化和甲基化水平, 探討其在哮喘發病機制中的作用。方法 16 只Wistar 大鼠隨機分為對照組和哮喘組( 每組8 只) , 用卵白蛋白( OVA) 致敏并激發建立哮喘大鼠模型。通過哮喘臨床表現、氣道高反應性測定、肺組織HE 染色、血清和BALF中細胞因子IL-4、γ干擾素( IFN-γ) 及IgEELISA 測定, 判斷哮喘大鼠模型是否成功。分離肺T 細胞并進行純度鑒定。Western blot 檢測肺T細胞HDAC1 蛋白表達水平, 組蛋白H3、H4 整體乙酰化, 以及H3k9 整體二甲基化水平。結果 與對照組比較, 哮喘組HDAC1 蛋白表達水平低于對照組( P lt; 0. 05) , 組蛋白H3、H4 整體乙酰化水平和H3k9 整體二甲基化水平差異均無統計學意義。結論 肺T 細胞HDAC1 可能參與了支氣管哮喘的發病環節, 組蛋白整體乙酰化和甲基化水平與哮喘發病無明顯相關性, HDAC1 對組蛋白修飾作用可能是一個基因轉錄特異性事件。
目的探討選擇性組蛋白脫乙酰酶抑制劑MS-275對癲癇所致腦損傷的保護作用及可能機制。 方法將75只Sprague-Dawley大鼠隨機分為5組:對照組、匹魯卡品組、治療Ⅰ組(致癇后7d連續腹腔注射MS-275,20 mg/kg,1次/d)、治療Ⅱ組(致癇后7 d連續腹腔注射MS-275,40 mg/kg,1次/d)、MS-275預處理組。通過氯化鋰-匹魯卡品誘導大鼠癲癇發作。觀察各組大鼠行為學差異;致癇后72 h Nissl染色觀察各組大鼠海馬區的病理學改變并計數海馬CA1及CA3區的神經元存活數,免疫組織化學法測定大鼠海馬CA1及CA3區組蛋白乙酰化水平;致癇后11 d,Morris水迷宮測定大鼠的認知功能。 結果與匹魯卡品組相比,MS-275預處理組大鼠出現癲癇持續狀態的潛伏期可延長且致癇大鼠死亡率降低(P<0.05)。與匹魯卡品組相比,治療Ⅰ組及治療Ⅱ組大鼠海馬CA1、CA3區神經元變性的程度降低,治療Ⅰ組及治療Ⅱ組大鼠海馬CA1及CA3區的組蛋白乙酰化水平比匹魯卡品組高(P<0.05)。與對照組、MS-275預處理組、治療Ⅰ、Ⅱ組比較,匹魯卡品組的逃避潛伏期均出現明顯延長(P<0.05)。 結論MS-275對氯化鋰-匹魯卡品致癇后大鼠海馬的神經元損傷、組蛋白脫乙酰化程度以及大鼠的認知功能下降有改善作用,對大鼠癲癇所致腦損傷有一定的保護作用,其作用機制可能與其抗炎作用相關。
表觀遺傳學對骨髓間充質干細胞的調控作用已經成為醫學領域的研究熱點。本文主要綜述了DNA甲基化、組蛋白乙酰化、小干擾RNA(siRNA)誘導基因沉默以及微小RNA(miRNA)四個方面對骨髓間充質干細胞調控作用的進展。結果表明, 表觀遺傳學對骨髓間充質干細胞的調控作用在骨修復、神經修復和心肌修復等方面的應用具有重要的意義。
本研究目的為構建攜帶針對大鼠環磷酸腺苷反應元件結合因子的結合蛋白(CBP)基因的siRNA重組慢病毒,感染原代海馬神經元并檢測其對乙酰化組蛋白表達的抑制作用。本文構建了4種siCBP,并檢測其對神經元中CBP表達的抑制作用,選擇效果最好的一種檢測神經元中HAT活性及乙酰化組蛋白Ac-H3、Ac-H4的表達。酶切及測序鑒定證實siCBP正確克隆至慢病毒質粒中,4種siCBP感染原代海馬神經元后CBP mRNA和蛋白表達有不同程度降低,效果最佳的GR806對神經元的HAT活性及Ac-H3、Ac-H4表達均有顯著抑制作用。本研究為后續應用siCBP闡明CBP依賴的組蛋白乙酰化對海馬區學習記憶功能調節的相關分子機制提供了實驗工具。
目的 探討煙草煙霧暴露對肺腺癌患者外周血組蛋白去乙酰化酶2(HDAC2)、白細胞介素8(IL-8)、腫瘤壞死因子α(TNF-α)表達的影響及其相互關系。 方法 收集廣西醫科大學第一附屬醫院和附屬腫瘤醫院2014年4月至2015年3月術后病理確診為肺腺癌的病例73例,術前均行肺功能檢查;收集同期無煙草煙霧暴露無慢性阻塞性肺疾病(簡稱慢阻肺)的健康志愿者14例。根據有無煙草煙霧暴露及肺功能分為正常對照組(A組,14例)、無煙草煙霧暴露無慢阻肺肺腺癌組(B組, 19例)、煙草煙霧暴露無慢阻肺肺腺癌組(C組,33例)、煙草煙霧暴露合并慢阻肺肺腺癌組(D組,21例)。實時熒光PCR檢測各組外周血單核細胞(PBMCs)中HDAC2 mRNA、IL-8 mRNA、TNF-α mRNA的表達,ELISA檢測各組外周靜脈血清中IL-8、TNF-α的含量。 結果 與A組比較,B組PBMCs中HDAC2 mRNA的表達差異無統計學意義(P＞0.05),C組、D組PBMCs中HDAC2 mRNA的表達均下調(P＜0.05),其中D組下調最明顯。與A組比較,各肺腺癌組PBMCs中IL-8 mRNA、TNF-α mRNA的表達以及外周靜脈血清中IL-8、TNF-α的濃度均顯著上調(P＜0.05),且D組上調最明顯。肺腺癌患者PBMCs中HDAC2 mRNA的表達在性別、年齡、TNM分期方面的差異均無統計學意義(P＞0.05);PBMCs中IL-8 mRNA、TNF-α mRNA的表達以及血清IL-8、TNF-α的含量在性別、年齡方面的差異無統計學意義(P＞0.05),在Ⅲ期患者PBMCs中的表達及血清中含量均較Ⅰ、Ⅱ期高(P＜0.05),Ⅰ期與Ⅱ期比較差異無統計學意義(P＞0.05)。 結論 煙草煙霧暴露導致肺腺癌患者外周血HDAC2表達下調,IL-8、TNF-α表達上調,加重炎癥反應,在合并慢阻肺者表現更明顯,可能與肺腺癌的預后有關。
目的 總結去乙酰化酶 1（ SIRT1）分子在消化道惡性腫瘤發生和發展過程中所起的重要作用。 方法 查閱近年來國內外關于消化道腫瘤發生發展過程中 SIRT1 分子作用的文獻并作綜述。 結果 SIRT1 分子通過與中長鏈非編碼 RNA（LncRNA）、微小 RNA（microRNA）和自噬相關聯，在食管癌、胃癌、結直腸癌、肝癌和胰腺癌中高表達，影響消化道腫瘤的發生和發展。 結論 SIRT1 分子的異常表達與消化道腫瘤的發生和發展密切相關。
目的研究組蛋白去乙酰化酶 2（HDAC2）在良性氣管狹窄動物模型中的表達，并探討 HDAC2 在氣管狹窄發生中的作用機制，為治療良性氣管狹窄尋求新靶標。方法將 18 只家兔完全隨機分成空白對照組、模型組和紅霉素組，每組各 6 只。模型組和紅霉素組家兔行氣管切開并用尼龍刷來回刷 20 余次損傷氣管內壁制作良性氣管狹窄的動物模型。術前 7 d 至術后 9 d 模型組給予生理鹽水灌胃，紅霉素組給予小劑量紅霉素 15 mg·kg–1·d–1灌胃，空白對照組不做任何處理。術后第 10 d 處死各組家兔，切取狹窄段氣管，測量氣管狹窄度，并取狹窄段肉芽組織提取 RNA 和蛋白質。用實時熒光定量 PCR 檢測肉芽組織中 HDAC2、白細胞介素-6（IL-6）、IL-8 的 mRNA 相對表達量，用蛋白免疫印跡檢測肉芽中 HDAC2 蛋白的相對表達量。結果模型組與空白對照組比較，氣管狹窄明顯［（84.60±1.14）% 比（27.00±6.44）%］，HDAC2 mRNA 和蛋白表達下調（0.29±0.07 比 1.00±0.00，0.20±0.02 比 0.49±0.04），IL-6、IL-8 mRNA 表達上調（4.22±0.67 比 1.00±0.00，162.72±23.23 比 1.00±0.00）。紅霉素組與模型組比較，氣管狹窄度減輕［（64.00±12.25）% 比（84.60±1.14）%］，HDAC2 mRNA 和蛋白表達上調（0.42±0.14 比 0.29±0.07，0.43±0.01 比 0.20±0.02），IL-6、IL-8 mRNA 表達下調（0.72±0.24 比 4.22±0.67，130.22±7.93 比 162.72±23.23），差異均具有統計學意義（均 P<0.05）。氣管狹窄度與 HDAC2 mRNA 相對表達量呈負相關（Pearson 相關系數r=–0.96，P<0.05）。結論良性氣管狹窄動物模型中 HDAC2 表達下調與氣管狹窄的發生發展有關。小劑量紅霉素具有治療良性氣管狹窄的作用，可能是小劑量紅霉素上調 HDAC2 的表達，進而抑制氣管損傷修復時的炎癥失調有關。
表觀遺傳學的研究進展表明，多種表觀遺傳學修飾包括乙酰化、甲基化和微 RNA（microRNA，miRNA）參與急性腎損傷（acute kidney injury，AKI）的發病機制。近期研究發現，通過藥物抑制組蛋白去乙酰化酶增強組蛋白乙酰化導致更嚴重的腎小管損傷，并加重和延緩腎臟結構和功能的恢復。缺血/再灌注損傷腎臟發生 DNA 啟動子甲基化的變化。MiRNA 的表達也與 AKI 后腎小管損傷和再生調節有關。針對表觀遺傳學調節過程將可能有助于 AKI 患者的臨床靶向治療。該文對 AKI 表觀遺傳調控的最新進展進行了總結，并闡述了乙酰化、甲基化及 miRNA 在 AKI 的發生發展過程中的作用機制。