目的 構建人microRNA-210（miR-210）慢病毒重組載體并轉染人臍靜脈內皮細胞株（human umbilical vein endothelial cells 12，HUVE-12），探討其過表達對HUVE-12 成血管的影響，為研究血管再生機制提供實驗模型。方法 構建pGCSIL-GFP-pre-miR-210 重組質粒表達載體并轉染HUVE-12，熒光顯微鏡觀察GFP 陽性表達細胞數及實時熒光定量PCR 法檢測miR-210 表達變化；細胞分為空病毒對照組（LV-GFP 對照組）和miR-210 轉染組（LV-miR-210-GFP 組），流式細胞儀檢測各組細胞ephrinA3 表達變化；ELISA 檢測細胞培養上清中VEGF 含量；將兩組細胞分別接種于Matrigel 觀察血管形成能力。 結果 重組載體經酶切、測序鑒定正確，GFP 表達強度在轉染后48 ～ 72 h 達峰值；實時熒光定量PCR 檢測結果顯示：LV-miR-210-GFP 組miR-210 表達水平較LV-GFP 對照組增加9.72 倍（t= —11.10，P=0.00）。流式細胞儀檢測結果顯示LV-miR-210-GFP 組ephrinA3 陽性細胞率為12.52% ± 0.67%，明顯較LV-GFP 對照組（73.22% ± 1.45%）降低（t= —66.12，P=0.00）；ELISA 檢測結果顯示LV-miR-210-GFP 組細胞上清中VEGF 含量顯著高于LV--GFP 對照組（[ 305.29 ± 16.52）pg/mL vs.（42.52 ± 3.11）pg/mL]（t= —27.06，P=0.00）；血管形成能力實驗顯示LV-miR-210-GFP 組毛細血管管腔數為17.33 ± 6.33，較LV-GFP 對照組（6.33 ± 2.33）顯著增加（t= —2.83，P=0.04）。 結論 成功構建miR-210 慢病毒重組載體，并能在HUVE-12 中穩定表達，過表達miR-210 能明顯增強HUVE-12 血管形成能力，為進一步研究miR-210 調控血管新生的分子機制奠定了實驗基礎。
目的 檢測胰腺導管腺癌組織中微小 RNA（microRNA，miR）-196b、miR-217 與轉化生長因子 β 受體 1（transforming growth factor β receptor 1，TGFβR1）蛋白的表達水平，并探討其臨床意義。 方法 前瞻性收集 2014 年 3 月到 2017 年 3 月期間在重慶醫科大學附屬第二醫院行胰腺癌根治術的 30 例胰腺導管腺癌患者的組織標本（包括胰腺導管腺癌組織及其癌旁組織），利用實時熒光定量聚合酶鏈反應法檢測 miR-196b 和 miR-217 的表達水平，采用 Western blotting 法檢測 TGFβR1 蛋白的表達水平。 結果 胰腺導管腺癌組織中 miR-196b 和 TGFβR1 蛋白的表達水平均高于癌旁組織（P<0.001），而 miR-217 的表達水平低于癌旁組織（P=0.001）。胰腺導管腺癌組織中 miR-196b 的表達水平與 TGFβR1 蛋白的表達水平呈正相關（r=0.803，P<0.001），而 miR-217 的表達水平與 TGFβR1 蛋白的表達水平呈負相關（r=–0.839，P<0.001）。 結論 胰腺導管腺癌組織中 TGFβR1 蛋白的表達可能同時受 miR-196b 和 miR-217 的雙向調控，這種雙向調控機制可能是制約胰腺導管腺癌發生和發展的重要機制之一，也可能是治療胰腺導管腺癌的潛在靶點。
目的 探索胰腺癌患者和胰腺癌大鼠血清中 microRNA（miRNA）-21 和 miRNA-155 的表達水平及其用于胰腺癌診斷的價值。 方法 前瞻性收集 2016 年 1 月至 2016 年 12 月期間福建醫科大學附屬協和醫院收治的 18 例胰腺癌患者（胰腺癌組）及同期收治的 12 例胰腺良性疾病（胰腺良性疾病組）患者的臨床資料和血清樣本，采用實時熒光定量法檢測血清中 miRNA-21 和 miRNA-155 的表達水平。同時建立 20 只由 7, 12-二甲基苯并蒽（DMBA）誘導的胰腺癌大鼠模型，并設置對照（10 只空白對照組大鼠行假手術），采集胰腺癌大鼠組（建模成功的胰腺癌大鼠）和空白對照組大鼠的血清，同法檢測血清中 miRNA-21 和 miRNA-155 的表達水平。 結果 胰腺癌組患者血清中 miRNA-21 和 miRNA-155 的中位表達水平分別為 1.99（1.43～5.30）和 7.06（4.98～21.48），胰腺良性疾病組患者分別為 1.28（0.58～2.01）和 2.20（1.76～3.02），胰腺癌組患者的血清 miRNA-21 和 miRNA-155 表達水平均較高（Z=–2.621，P=0.009；Z =–3.430，P=0.001）。動物實驗中，實驗組建模成功并存活大鼠 11 只，空白對照組存活大鼠 9 只。胰腺癌大鼠組血清中 miRNA-21 和 miRNA-155 的中位表達水平分別為 2.12（1.33～2.72）和 16.45（7.18～25.40），空白對照組大鼠分別為 1.00（0.45～1.60）和 1.49（1.25～1.97），胰腺癌大鼠組血清中 miRNA-21和 miRNA-155 的表達水平均較高（Z =–2.621，P=0.009；Z=–3.609，P<0.001）。在區分胰腺癌和胰腺良性疾病方面，血清 miRNA-21 表達水平的最佳臨界值為 4.21，此時其靈敏度和特異度分別為 75.0% 和 61.1%；血清 miRNA-155 表達水平的最佳臨界值為 4.67，此時其靈敏度和特異度均為 83.3%。 結論 胰腺癌患者及大鼠血清中 miRNA-21 和 miRNA-155 的表達水平均異常升高，血清 miRNA-155 水平在一定程度上有助于區分胰腺癌與胰腺良性疾病。
目的測定microRNA-21（miRNA-21）在不同分期胃癌中的表達量并探討其臨床價值。 方法采用實時定量PCR技術，檢測2015年1月至2016年1月期間于上海交通大學醫學院附屬新華醫院及崇明分院普外科行手術治療且經病理證實的50例胃癌患者的癌組織、癌旁正常胃組織和血清以及50例非胃癌患者血清中miRNA-21的相對表達量。 結果胃癌組織中miRNA-21的相對表達量明顯高于癌旁正常胃組織（P＜0.05），且其在TNM分期為Ⅰ期、Ⅱ期、Ⅲ期的胃癌患者癌組織中的相對表達量分別為2.17（1.48～2.90）、4.08（2.30～4.86）、8.64（5.82～18.20），3期間的相對表達量比較差異有統計學意義（P＜0.05）。胃癌患者血清中miRNA-21的相對表達量明顯高于非胃癌患者血清中的相對表達量（P＜0.05），其在Ⅰ期、Ⅱ期、Ⅲ期的胃癌患者血清中的相對表達量分別為31.00（24.60～37.15）、39.10（28.90～39.80）、44.15（38.95～56.68），3期間的相對表達量比較差異有統計學意義（P＜0.05）。胃癌患者血清和胃癌組織中miRNA-21的相對表達量呈正相關（r=0.86，P＜0.05）。 結論胃癌患者的血清和胃癌組織中miRNA-21高表達與其TNM分期有著潛在的聯系，其可能成為術前預測胃癌TNM分期的潛在指標。
目的 探討腺癌、鱗癌、黏液性囊腺瘤、慢性胰腺炎和正常胰腺組織中胰腺癌相關基因的表達。 方法 回顧性收集 2012 年 1 月至 2017 年 4 月期間于湖北醫藥學院附屬東風醫院肝膽胰外科住院行手術治療的 40 例胰腺疾病患者的術中標本，其中腺癌、鱗癌、黏液性囊腺瘤、慢性胰腺炎和正常胰腺組織各 8 例。采用實時熒光定量 PCR 和基因芯片法檢測 5 組組織中 Beclin-1 mRNA 和 microRNA（miR）-216a 的表達。對以上組織行原代細胞培養，分為空白對照組和 PD98095 組（加入 PD98095 抑制劑），采用 Western blot 法檢測細胞中血管內皮生長因子（VEGR）與磷酸化細胞外調節蛋白激酶 1/2（p-ERK1/2）的表達。 結果 與正常對照組比較，腺癌組和鱗癌組組織中 Beclin-1 mRNA 和 miR-216a 的表達水平較低（P<0.05），腺癌組、鱗癌組、黏液性囊腺瘤組和慢性胰腺炎組組織中 Beclin-1 mRNA 和 miR-216a 的表達水平比較差異無統計學意義（P>0.05）。與同類組織的空白對照組比較，腺癌組和鱗癌組加入 PD98095 后，細胞中 p-ERK1/2 和 VEGF 蛋白的表達水平下調（P<0.05），但黏液性囊腺瘤組、慢性胰腺炎組和正常對照組加入 PD98095 前后細胞中 p-ERK1/2 及 VEGF 蛋白的表達水平變化不大（P>0.05）。 結論 Beclin-1 mRNA、miR-216a 和 VEGF 蛋白的表達與胰腺癌的發生發展可能有關。
目的探究膽管癌患者膽汁外泌體中微小RNA（microRNA，miRNA）-21的表達水平及它對膽管癌的臨床診斷價值。方法回顧性收集2019年8月至2021年12月期間就診于國藥東風總醫院并符合納入標準的45例膽管癌患者，同時選取同期就診的膽管良性疾病（膽總管結石或膽管良性狹窄）患者35例作為對照。利用超速離心法提取膽汁外泌體并用多種方法進行鑒定，通過試劑盒提取膽汁外泌體中的miRNA，用實時熒光定量PCR檢測miRNA-21的表達水平，通過受試者操作特征曲線來分析膽汁外泌體中miRNA-21對膽管癌的診斷價值。結果分離出的膽汁外泌體符合公認的外泌體特征且濃度較高。膽管癌患者的膽汁外泌體中miRNA-21平均相對表達量高于膽管良性疾病患者（59.45比25.41，t=3.445，P<0.001）。膽汁外泌體中miRNA-21診斷膽管癌的受試者操作特征曲線下面積為0.715 ［95%CI（0.602，0.827），P=0.001］，診斷敏感度為75.6%，特異度為62.9%。結論從本研究結果看，膽管癌患者的膽汁外泌體中miRNA-21表達水平較高，它有望作為膽管癌患者的潛在早期診斷標志物。
目的 探究長鏈非編碼RNA H19（long non-coding RNA H19，lncRNA H19）對慢性心力衰竭（chronic heart failure，CHF）大鼠的影響及可能的作用機制。方法 選擇SD雄性大鼠，體重（300±10）g，10周齡，采用腹主動脈縮窄術建立CHF大鼠模型，將成功造模的84只大鼠隨機分為模型組、si-NC組［轉染lncRNA H19小干擾RNA（small interfering RNA，siRNA）陰性對照］、si-H19組（轉染lncRNA H19 siRNA）、si-miR-NC組［轉染微小RNA-214（microRNA-214，miR-214）siRNA陰性對照］、si-miR-214組（轉染miR-214 siRNA）、si-H19+si-miR-NC組（lncRNA H19 siRNA和miR-214 siRNA陰性對照共轉染）、si-H19+si-miR-214組（lncRNA H19 siRNA和miR-214 siRNA共轉染），每組12只。另設假手術組12只（大鼠只穿線不結扎，其余操作同模型組）。干預4周后，比較各組大鼠的心功能、血清心肌損傷標志物、心力衰竭標志物、炎性相關因子、凋亡相關因子水平、心肌組織病理學改變等指標，并采用實時熒光定量PCR法檢測心肌組織中lncRNA H19、miR-214表達，雙熒光素酶報告基因檢測lncRNA H19與miR-214的靶向關系。結果 與假手術組相比，模型組大鼠心肌嚴重受損，大量炎性細胞浸潤，心肌組織lncRNA H19、心功能指標（左心室收縮末期內徑、左心室舒張末期內徑）、血清心肌損傷標志物（肌酸激酶同工酶、心肌肌鈣蛋白I）、心力衰竭標志物（B型腦鈉肽、N末端B型鈉尿肽前體）、炎性相關因子（白細胞介素-1β、白細胞介素-18、腫瘤壞死因子-α、白細胞介素-6）、心肌細胞凋亡率、凋亡相關蛋白［B淋巴細胞瘤-2（B lymphocytoma-2，Bcl-2）、Bcl-2相關X蛋白（Bcl-2 related X protein，Bax）、半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶-1（cysteinyl aspartate specific proteinase-1，Caspase-1）］水平明顯升高（P＜0.05）；心肌組織miR-214、心功能指標（左心室射血分數、左心室短軸縮短率）、Bcl-2/Bax比值水平明顯降低（P＜0.05）。與模型組相比，沉默lncRNA H19可明顯改善CHF大鼠心功能和上述指標變化，減輕心肌損傷（P＜0.05）；而下調miR-214能明顯逆轉si-H19對CHF大鼠心肌損傷的保護作用（P＜0.05）。結論 沉默lncRNA H19可通過靶向上調miR-214的表達，抑制Caspase-1的表達，并抑制心肌細胞凋亡和炎癥反應，減輕CHF大鼠的心肌損傷。