目的 觀察肽聚糖（PGN）對樹突細胞（DCs）分泌促炎性細胞因子的影響以及對實驗性自身免疫性葡萄膜炎（EAU）輔助性T細胞（Th）17（Th17細胞）反應的調控。方法 利用粒細胞-巨噬細胞集落刺激因子、白細胞介素（IL）-4（IL-4）定向誘導健康小鼠骨髓細胞向DCs分化。誘導分化的第6天將DCs分為對照組與實驗組，實驗組加入PGN干預，對照組加入等量無菌磷酸緩沖鹽溶液，培養24 h后利用實時熒光逆轉錄聚合酶鏈反應（RT-PCR）技術，檢測2組培養細胞中Th17細胞分化相關的細胞因子IL23、腫瘤壞死因子-alpha;（TNF-alpha;）、IL-6、IL-1beta; mRNA相對表達量。采用光感受器間維生素A類結合蛋白（IRBP）1-20多肽片段（IRBP1-20）和弗氏不完全佐劑及結核分枝桿菌H37RA免疫C57BL/6小鼠。免疫后13 d分離EAU模型鼠脾臟和淋巴結的IRBP1-20特異的T細胞與經PGN干預或未干預的DCs共培養。收集共培養后2 d的細胞，實時熒光RT-PCR檢測維甲酸相關孤兒受體gamma;t（RORgamma;t）、IL-17、T-bet、gamma;干擾素（IFN-gamma;） mRNA相對表達量；此外，收集共培養后2、5、7 d的細胞分別進行流式細胞儀分析，觀察Th17、Th1細胞的變化。結果 實時熒光RT-PCR檢測結果顯示，實驗組DCs經PGN干預后IL-23、IL-1beta;、IL-6、TNF-alpha; mRNA相對表達量較對照組顯著升高，差異有統計學意義（t=-14.363、-5.627、-3.85、-28.151；P＜0.05）；實驗組RORgamma;t、IL-17 mRNA相對表達量較對照組顯著升高（t=-5.601、-19.76；P＜0.05），而T-bet、IFN-gamma; mRNA相對表達量較對照組顯著降低（t=4.717、11.207；P＜0.05）。流式細胞儀檢測結果顯示，與對照組相比，實驗組的DCs與T細胞共培養后2、5、7 d，IL-17+細胞的百分比升高（t=-2.944、-3.03、-4.81；P＜0.05），而IFN-gamma;+細胞的比例變化不大（t=-1.25、-0.18、-2.16；P＞0.05）。結論 PGN能夠刺激DCs分泌IL-23、TNF-alpha;、IL-6及IL-1beta;等Th17細胞分化相關的細胞因子，促進EAU中Th17細胞的分化和增生。
目的 觀察烏司他丁對重癥膿毒癥患者Treg/Th17 平衡狀態及細胞免疫狀態的影響。方法 選擇2011 年10 月至2012 年7 月入住聊城市人民醫院綜合重癥加強治療病房( ICU) 的重癥膿毒癥患者80 例, 隨機分為常規治療組( 40 例, 給予常規集束化治療) 及烏司他丁組( 40 例, 在常規集束化治療基礎上加用烏司他丁30 萬U靜脈滴注, 每日3 次) 。入ICU當日和治療5 d 后抽取患者外周血, 檢測Treg、Th17 及CD14 單核細胞HLA-DR 的表達情況, 并比較兩組患者28 d 死亡率。同時選取20 名健康體檢者作為對照組。結果 重癥膿毒癥患者Treg、Th17 的表達均較對照組明顯升高 ( P lt;0. 01) , Treg/Th17 升高( P lt;0. 01) , HLA-DR 表達降低( P lt;0. 01) , 提示重癥膿毒癥患者抗炎反應更強烈, 體內出現免疫麻痹。重癥膿毒癥患者中, 烏司他丁組與常規治療組治療前各指標無明顯差異 ( P gt;0. 05) , 治療后烏司他丁組Treg 和Th17 的表達顯著降低( P lt; 0. 01) , Treg/Th17 比值降低趨于正常化( P lt;0. 01) , HLA-DR 的表達顯著升高( P lt; 0. 01) , 28 d 死亡率有下降趨勢。結論 重癥膿毒癥患者中Treg 及Th17 表達異常升高, Treg/Th17 失衡, HLA-DR 表達降低, 提示患者體內存在免疫麻痹。烏司他丁可降低重癥膿毒癥患者Treg 及Th17 表達, 逆轉Treg/Th17 失衡, 提高HLA-DR 表達, 改善細胞免疫, 有望改善重癥膿毒癥患者預后。
目的 觀察輔助性T淋巴細胞17( Th17) 在呼吸道合胞病毒( RSV) 感染小鼠肺部炎癥中的變化, 探討其在RSV 感染后宿主免疫機制中的作用。方法 30 只3 ～5 周齡雌性BALB/ c 小鼠隨機分為實驗組( 18 只) 和對照組( 12 只) 。實驗組每只小鼠鼻腔滴入0.1 mL滴度為107.5 TCID 50 /mL 的病毒液, 對照組鼻腔滴入0. 1 mL 的2. 5%滅活雞血清的DMEM維持液。在處理后的第1、4、8 d 分別處死小鼠, 并留取肺臟和肺門淋巴結。用HE 染色觀察RSV 感染后肺組織病理變化; 實時定量聚合酶鏈反應( RT-PCR) 檢測肺組織中RSV-F、IL-17A、IL-17F和IL-23p19 mRNA 表達水平; 流式細胞術檢測小鼠肺門淋巴結中Th17 細胞水平。結果 在RSV 感染后第4 d 小鼠肺組織出現典型間質性肺炎表現, 第8 d 炎性細胞明顯減少; 肺組織中RSV 病毒的相對表達量在第4 d 為9.208 ±0.548, 較第 1 d顯著增多( P lt;0.01) , 到第8 d 則較第4 d 顯著減少( P lt;0.01) ; 肺組織中IL-23p19 和IL-17A 等細胞因子的表達在RSV 感染后也呈現增高的趨勢, 并在第4 d 達到高峰, 但IL-17F mRNA 表達在RSV 感染后不同時間點與對照組比較無顯著變化( P gt;0.05) ; RSV 感染后第4 d 和第8 d 小鼠肺門淋巴結 Th17 亞群比例分別為( 0.370 ±0.043) % 和( 0.853 ±0.048) % , 均明顯高于相應的對照組( P lt; 0.05) , 而且第8 d 的Th17 比例也顯著高于第4 d( P lt;0.01) 。結論 在RSV 感染小鼠導致的肺部炎癥反應過程中, 出現肺組織中IL-17A 的表達增加和肺門淋巴結Th17 細胞水平增高, 說明Th17 細胞可能參與宿主的抗病毒免疫過程。
目的 研究不同時期結節病患者外周血淋巴細胞亞群Th17 細胞的表達變化, 并探討其臨床意義。方法 選取結節病患者38 例, 其中初診并伴有咳嗽、乏力、消瘦、發熱等明顯臨床癥狀的活動期結節病患者18 例, 復診的穩定期結節病患者20 例。另選取15 例健康志愿者為對照組。流式細胞術檢測所有入選者外周血Th17 細胞表達, 紫外分光光度法檢測所有結節病患者血管緊張素轉化酶( SACE) 水平。所有初診結節病患者行支氣管肺泡灌洗液細胞分類及CD4 + /CD8 + 比例檢查。結果 活動期結節病患者外周血Th17/CD3 + T細胞百分比較穩定期結節病患者及健康對照組明顯增高[ ( 1. 59 ±0. 44) % 比( 0. 56 ±0. 32) % 和( 0. 49 ±0. 23) % , P 均lt;0. 05] , 而穩定期結節病患者外周血Th17/CD3 + T細胞百分比與健康對照組無明顯差異( P gt;0. 05) 。活動期結節病患者SACE 水平較穩定期結節病患者SACE 水平明顯增高[ ( 56. 6 ±14. 6) IU/L 比( 35. 8 ±18. 3) IU/L, P lt;0. 05] , 結節病患者外周血Th17 細胞表達與SACE 水平無明顯相關性( P gt;0. 05) ; 活動期結節病外周血Th17 細胞表達與BALF 中淋巴細胞百分比無明顯相關性( P gt;0. 05) , 但與CD4 + /CD8 + 呈明顯正相關( r = 0. 63,P lt;0. 05) 。結論 活動期結節病患者外周血Th17 細胞表達增高, 結節病患者外周血Th17 細胞表達增高可能與結節病的病情活動有關。
目的探討吸煙因素在穩定期慢性阻塞性肺疾病(簡稱慢阻肺)患者Th17/Treg T細胞免疫系統及全身炎癥反應中的作用。 方法2012年2月至2013年6月在新疆醫科大學附屬中醫醫院國家中醫臨床研究基地慢阻肺研究室門診收集穩定期慢阻肺患者60例(吸煙組40例, 非吸煙組20例)及正常志愿者15例。采用流式細胞術檢測患者外周血Th17/Treg T淋巴細胞, 采用流式液相多重蛋白定量技術檢測血清中轉化生長因子β(TGF-β)、腫瘤壞死因子α(TNF-α)、白細胞介素10(IL-10)、IL-17A、γ干擾素(IFN-γ)等炎性因子的變化情況。 結果吸煙組與非吸煙組患者在年齡、病程、肺功能、病情等相關資料的基線一致(P>0.05), 具有可比性。吸煙組外周血Th17/Treg T淋巴細胞較正常組增高(P<0.05), 且正常組、非吸煙組和吸煙組外周血Th17/Treg呈增長趨勢。吸煙組和非吸煙組IL-2表達較正常組低, 非吸煙組與正常組比較差異有統計學意義(P<0.05)。吸煙組和非吸煙組TNF-α表達較正常組顯著降低(P<0.05)。 結論慢阻肺患者全身炎癥反應長期持續性存在, 即使在穩定期仍有部分高表達, 且吸煙因素可部分增強炎癥表達反應。而Th17/Treg T淋巴細胞相關因子的調節在慢阻肺穩定期已逐漸趨于平衡, 且相關炎性因子恢復速度不一致, 提示吸煙可能在穩定平衡的恢復中起一定作用。
目的觀察白細胞介素(IL)-17、白細胞介素(IL)-4及γ干擾素(IFN-γ)在實驗性自身免疫性葡萄膜炎(EAU)中的表達。 方法采用健康雌性C57BL/6小鼠建立EAU模型。建模前及建模后7、14、21、28 d, 取小鼠眼球作石蠟病理切片, 光學顯微鏡觀察小鼠視網膜結構變化; 采用酶聯免疫吸附試驗檢測小鼠血清中IL-17、IL-4、IFN-γ含量; 采用實時熒光定量聚合酶鏈反應檢測小鼠視網膜組織中IL-17、IL-4、IFN-γ的mRNA表達; 采用蛋白質免疫印跡法檢測小鼠視網膜組織中IL-17、IL-4、IFN-γ的蛋白表達。 結果建模后14 d, 光學顯微鏡觀察發現, 葡萄膜組織結構破壞, 大量炎癥細胞浸潤。小鼠血清中IFN-γ含量, 脾及視網膜組織中IFN-γ mRNA和蛋白表達均于建模后7 d達到高峰; 小鼠血清中IL-4、IL-17含量, 脾及視網膜組織中IL-4、IL-17 mRNA和蛋白表達均于建模后14 d達到高峰。小鼠血清中IL-17含量, 脾及視網膜組織中IL-17 mRNA和蛋白表達升高程度均較IFN-γ、IL-4更為顯著。建模前與建模后7、14、21 d小鼠血清中IL-17、IL-4、IFN-γ含量比較, 差異均有統計學意義(F=1 817.346、268.600、164.621, P<0.05);建模前與建模后28 d小鼠血清中IL-17、IL-4、IFN-γ含量比較, 差異無統計學意義(P>0.05)。建模前與建模后7、14、21 d小鼠脾(F=312.67、114.250、216.220)及視網膜(F=271.504、85.370、80.722)組織中IL-17、IL-4、IFN-γ蛋白表達比較, 差異有統計學意義(P<0.05);建模前與建模后28 d小鼠脾及視網膜組織中IL-17、IL-4、IFN-γ蛋白表達比較, 差異無統計學意義(P>0.05)。 結論IL-17、IL-4、IFN-γ在EAU中均明顯表達, 共同參與了EAU疾病的過程。
目的觀察乙酰輔酶 A 羧化酶（ACC）對 Th17 細胞分化的調控在急性哮喘小鼠模型發病機制中的作用。方法將 24 只雌性 C57BL/6 小鼠隨機分為正常對照組、哮喘組、DMSO 對照組和 ACC 抑制劑組，每組 6 只。哮喘組、DMSO 對照組和 ACC 抑制劑組予以卵清蛋白（OVA）致敏、激發建立急性哮喘模型，正常對照組對應給予等體積的磷酸鹽緩沖液（PBS）處理。其中 ACC 抑制劑組每周 2 次給予腹腔注射 ACC 特異性抑制劑 TOFA 溶液（先溶于 DMSO，后以 PBS 稀釋）處理，DMSO 對照組對應給予等濃度 DMSO 溶液處理。24 d 后處死小鼠，收集肺組織和血清樣本。肺組織 HE 染色觀察小鼠肺組織炎性細胞浸潤情況，ELISA 法檢測血清總 IgE 濃度，流式細胞術檢測肺組織 Th17 細胞在 CD4+ T 細胞中所占的百分率。結果哮喘組、DMSO 對照組、ACC 抑制劑組小鼠肺組織炎性細胞浸潤均較正常對照組顯著增加（3.50±0.14、3.47±0.08、2.07±0.20 比 0.50±0.17，均P<0.001），DMSO 對照組與哮喘組差異無統計學意義（P>0.05），ACC 抑制劑組較哮喘組顯著下降（P<0.001）。哮喘組、DMSO 對照組、ACC 抑制劑組小鼠血清總 IgE 濃度均較正常對照組顯著升高 [（5 680.40±831.40）ng/ml、（5 624.79±365.50）ng/ml、（2 028.95±134.60）ng/ml 比（400.52±57.13）ng/ml，均P<0.008]，且 DMSO 對照組與哮喘組差異無統計學意義（P>0.05），ACC 抑制劑組顯著低于哮喘組（P<0.008）。哮喘組、DMSO 對照組、ACC 抑制劑組小鼠肺組織 Th17 細胞在 CD4+ T 細胞中所占百分率均較正常對照組明顯增高 [（2.01±0.12）%、（1.95±0.16）%、（0.82±0.04）% 比（0.59±0.03）%，均P<0.008]，DMSO 對照組與哮喘組差異無統計學意義（P>0.05），ACC 抑制劑組較哮喘組顯著降低（P<0.008）。結論抑制 ACC 后，OVA 誘導的哮喘小鼠氣道炎癥顯著減輕，同時肺組織中 Th17 細胞減少，血清總 IgE 濃度下降，提示 ACC 可通過促進 Th17 細胞分化參與哮喘的發病。
目的觀察實驗性自身免疫性葡萄膜炎（EAU）模型大鼠CD4+T細胞中miR-142- 5p及叉頭轉錄蛋白O亞族3（FOXO3）的表達，初步探討兩者靶向關系以及對EAU的影響。方法健康雄性Lewis大鼠10只隨機分為模型組、對照組。模型組大鼠以過繼免疫方式誘導EAU動物模型。免疫后20 d，取對照組、模型組大鼠眼球和引流淋巴結提取CD4+T細胞，并分為對照組、模型組、mimic-陰性對照（NC）組、miR-142-5p-mimic組、小干擾（si）-NC組、si-FOXO3組進行體外實驗。miR-142-5p-mimic組、si-FOXO3組分別轉染miR-142-5p-mimic、si-FOXO3。健康雄性Lewis大鼠25只隨機分為模型組、轉染mimic-NC組、轉染miR-142-5p-mimic組、轉染si-NC組、轉染si-FOXO3組，分別注射上述體外實驗組細胞。免疫后4、8、12、16、20 d行裂隙燈顯微鏡檢查并進行EAU評分；免疫后20 d，蘇木精-伊紅染色行組織病理學分級。實時熒光定量聚合酶鏈反應檢測各組大鼠CD4+T細胞和眼組織中miR-142-5p、FOXO3 mRNA相對表達量及細胞培養上清液中輔助性T細胞17（Th17）標志物白細胞介素（IL）-17、IL-22、維甲酸相關孤兒受體γ（RORγ）mRNA相對表達量。生物信息學網站及雙熒光素酶預測miR-142-5p與FOXO3的靶向關系。組間比較采用單因素方差分析或t檢驗。結果模型組大鼠均出現不同程度EAU癥狀，隨時間延長，其癥狀加重。與對照組比較，模型組大鼠CD4+T細胞中miR-142-5p mRNA相對表達量升高，FOXO3 mRNA相對表達量下降，差異均有統計學意義（t=7.374、10.423，P=0.002、0.001）。與mimic-NC組比較，miR-142-5p-mimic組大鼠CD4+T細胞中miR-142-5p mRNA相對表達量上升，差異有統計學意義（t=6.540，P=0.003）。與模型組、mimic-NC組、si-NC組比較，miR-142-5p-mimic組、si-FOXO3組大鼠CD4+T細胞培養上清液中IL-17、IL-22、RORγ mRNA相對表達量均顯著增加，差異有統計學意義（F=26.110、6.292、5.269、55.660、10.490、11.430，P＜0.05）。與轉染mimic-NC組比較，轉染miR-142-5p-mimic組大鼠眼組織中miR-142-5p mRNA相對表達量顯著上升，差異有統計學意義（t=6.690，P＜0.05）；與轉染si-NC組比較，轉染si-FOXO3組大鼠眼組織中FOXO3 mRNA相對表達量顯著下降，差異有統計學意義（t=17.751，P＜0.05）。轉染mimic-NC組、轉染miR-142-5p-mimic組、轉染si-NC組、轉染si-FOXO3組大鼠免疫后隨時間延長，EAU評分均呈上升趨勢。轉染miR-142-5p-mimic組大鼠EAU評分與組織病理學分級均較轉染mimic-NC組升高，差異有統計學意義（t=5.633、6.286，P＜0.05）。轉染si-FOXO3組大鼠EAU評分與組織病理學分級均較轉染si-NC組升高，差異有統計學意義（t=6.852、6.635，P＜0.05）。FOXO3與miR-142-5p具有靶向關系。結論EAU大鼠CD4+T細胞中，miR-142- 5p表達上調，FOXO3表達下調；miR-142-5p靶向調控FOXO3表達促進Th17細胞相關炎性因子發展。
目的研究麥冬皂苷 D（OP-D）對脂多糖誘導小鼠急性肺損傷的保護作用及機制。方法將 50 只 SPF 級 C57BL/6 小鼠隨機分為對照組、假手術組、模型組、OP-D 組（10 mg·kg–1·d–1），地塞米松組（2 mg·kg–1·d–1），每組 10 只。OP-D 及地塞米松組于造模前 1 d 給予相應藥物灌胃，模型組、OP-D 組，地塞米松組小鼠通過氣管滴入脂多糖（2 mg/kg，30 μL）制作急性肺損傷模型，假手術組滴入等體積生理鹽水，正常組不做處理。于術后 6 h 稱重后處死小鼠取外周血及肺組織。通過測定小鼠肺組織重量，評估肺水腫程度；通過蘇木素伊紅染色觀察肺組織病理變化；通過熒光定量聚合酶鏈式反應檢測肺組織中白細胞介素（IL）-6、IL-10、IL-17 的 mRNA 表達；通過流式細胞術檢測外周血中 Th17 及 Treg 細胞占比變化。結果與模型組比較，OP-D 組肺水腫程度顯著下降（P<0.05），肺組織損傷減輕，肺組織中 IL-6、IL-17 mRNA 表達量及外周血中 Th17 細胞占比顯著下降（均 P<0.05），Treg 細胞占比和 IL-10 的表達顯著升高（P<0.05）。結論OP-D 可能通過調節 Th17/Treg 細胞平衡而對脂多糖所致急性肺損傷小鼠具有保護作用。
目的 初步探討白細胞介素（IL）-23受體（IL-23R）過表達對實驗性自身免疫性葡萄膜炎（EAU）模型小鼠輔助性T細胞17（Th17細胞）/調節性T細胞（Treg細胞）平衡的影響。方法8周齡雌性C57BL/6J小鼠12只，隨機分為LV-Ctrl組、LV-IL-23R組，每組各6只。兩組小鼠經尾靜脈分別注射 LV-Ctrl、LV-IL-23R慢病毒；注射后7 d采用光感受器間維生素A類結合蛋白1-20主動免疫構建EAU小鼠模型。免疫后13 d開始，每2天使用間接檢眼鏡觀察小鼠眼底并進行臨床評分。免疫后30 d，蘇木精-伊紅染色觀察小鼠視網膜組織病理學改變。酶聯免疫吸附測定檢測兩組小鼠血清中IL-17水平；流式細胞儀檢測Th17細胞和Treg細胞比例；實時熒光定量聚合酶鏈反應檢測IL-23R、IL-17、維甲酸相關孤兒受體γt（RORγt）、IL-10和叉頭狀轉錄因子p3（Foxp3） mRNA相對表達量。組間比較采用重復測量方差分析、獨立樣本Mann-Whitney U檢驗和獨立樣本t檢驗。結果 與LV-Ctrl組比較，LV-IL-23R組小鼠視網膜炎癥反應更重。免疫后13 d，LV-IL-23R組、LV-Ctrl組小鼠眼底炎癥評分差異無統計學意義（t=－2.001，P=0.058）；免疫后15～29 d，LV-IL-23R組小鼠眼底炎癥評分均高于LV-Ctrl組，差異有統計學意義（t=－4.429、－6.578、－7.768、－10.183、－6.325、－7.304、－4.841、－6.872，P＜0.001）。組織病理學檢查顯示，與LV-Ctrl組比較，LV-IL-23R組眼底炎性細胞浸潤增多，視網膜結構破壞更為嚴重，組織病理學評分顯著升高，差異有統計學意義（t=－4.339，P=0.001）。與LV-Ctrl組比較、LV-IL-23R組小鼠脾臟中IL-23R mRNA相對表達量顯著升高，差異有統計學意義（Z=2.087，P=0.037）；T細胞中IL-17、RORγt mRNA相對表達量增加，IL-10、Foxp3 mRNA相對表達量降低，差異均有統計學意義（t=－6.313、－5.922、4.844、7.572，P=0.003、0.004、0.008、0.002）。與LV-Ctrl組比較、LV-IL-23R組小鼠血清中IL-17水平明顯升高，差異有統計學意義（t=－5.423，P=0.002）；脾臟和淋巴結中Th17細胞比例明顯升高，Treg細胞比例顯著降低，差異有統計學意義（t=－4.290、3.700，P=0.002、0.006）。結論 IL-23R過表達可促使EAU小鼠的Th17/Treg失衡，加重EAU臨床及病理表現。