目的 探討AKT/FOXOs /Atrogin-1/MuRF1 信號通路在慢性阻塞性肺疾病( COPD) 大鼠骨骼肌萎縮中的作用。方法 采用單純熏香煙法復制COPD 大鼠動物模型。采用逆轉錄-聚合酶鏈式反應( RT-PCR) 和Western blot 技術檢測COPD 大鼠伸趾長肌內E3 連接酶的兩個肌肉萎縮特異性指標Atrogin-1 和MuRF1, 以及其上游FOXOs 轉錄因子的基因與蛋白表達的變化; 對伸趾長肌中磷酸化AKT( p-AKT) 的蛋白表達及其與總AKT( t-AKT) 的蛋白表達比率進行測定。結果 RT-PCR 分析結果顯示, COPD 大鼠伸趾長肌組織中的Atrogin-1 的mRNA 表達明顯上調( Plt;0.01) ; MuRF1 和 FOXO-1 的mRNA 表達與對照組比較差異有統計學意義( Plt;0.05) 。Western blot 分析結果顯示, 伸趾長肌組織中Atrogin-1的蛋白相對表達量COPD 組較對照組明顯增加( Plt; 0.01) ; MuRF1 的蛋白表達COPD組較對照組增加( Plt;0.05) ; FOXO-1 的蛋白表達兩組比較無明顯差異( Pgt;0.05) 。COPD 組大鼠伸趾長肌中p-AKT的蛋白表達較對照組增加( Plt;0.05) , p-AKT/t-AKT COPD 組明顯高于對照組( Plt;0.01) 。結論 AKT/FOXOs /Atrogin-1 /MuRF1 信號通路參與COPD 骨骼肌萎縮機制并發揮重要作用。
目的研究PI3K/AKT/mTOR信號通路在慢性阻塞性肺疾病(簡稱慢阻肺)大鼠骨骼肌萎縮中的作用。 方法采用單純熏香煙法復制慢阻肺大鼠動物模型。采用Western blot技術檢測慢阻肺大鼠趾長伸肌中PI3K/AKT/mTOR信號通路中PI3K、總的及磷酸化的mTOR (t-mTOR, p-mTOR)、總的及磷酸化的GSK-3β(t-GSK-3β, p-GSK-3β)、總的及磷酸化的4E-BP1(t-4E-BP1, p-4E-BP1)、總的及磷酸化的p70S6K1(t-p70S6K1, p-p70S6K1)蛋白表達變化。 結果Western blot分析結果顯示, 大鼠趾長伸肌組織中PI3K的蛋白表達在兩組間差異不顯著(P > 0.05);t-mTOR、p-mTOR、t-GSK-3β和p-GSK-3β的蛋白表達慢阻肺組顯著高于對照組(P < 0.05, 其中p-GSK-3β兩組對照P < 0.01);t-4E-BP1和t-p70S6K1的蛋白表達在兩組間差異不顯著(P > 0.05), p-4E-BP1和p-p70S6K1的蛋白表達慢阻肺組顯著高于對照組(P < 0.05)。 結論慢阻肺大鼠趾長伸肌組織內PI3K/AKT/mTOR信號通路被激活, 可能是骨骼肌萎縮的代償機制之一。
目的研究急性梗阻性膽管炎（AOC）大鼠模型中外周血單個核細胞（PBMCs）中磷脂酰肌醇-3-羥激酶（PI3K）/AKT 通路和鞘氨醇-1-磷酸受體2（S1PR2）的激活情況以及其對大鼠全身炎癥反應的影響。方法① 體外實驗：分離和培養清潔級大鼠 PBMCs，然后將其分為磷酸鹽緩沖溶液對照組、單獨 PI3K 抑制劑 LY294002 處理組、脂多糖處理組和脂多糖+LY294002 處理組 4 組，收集各組細胞的上清液和總蛋白，檢測細胞上清液中炎性因子腫瘤壞死因子-α（TNF-α）和白細胞介素-6（IL-6）水平以及細胞中 PI3K、AKT 磷酸化水平和 S1PR2 蛋白的變化。② 體內實驗：60 只清潔級 SD 大鼠被隨機分為假手術組、單獨 PI3K 抑制劑 LY294002 處理組、AOC 模型組及 AOC 模型+LY294002 處理組 4 組，記錄大鼠存活情況，檢測大鼠血清中肝功能丙氨酸轉氨酶（ALT）、門冬氨酸氨基轉移酶（AST）和總膽紅素（TBIL）水平及血清中 TNF-α 和 IL-6 的水平以及大鼠 PBMCs 中 PI3K、AKT 磷酸化水平和 S1PR2 蛋白的變化。結果① 體外實驗結果：脂多糖+LY294002 處理組細胞上清液中 TNF-α 和 IL-6 水平均明顯低于脂多糖處理組（P<0.050），PI3K、AKT 磷酸化水平和 S1PR2 的蛋白水平亦明顯低于脂多糖處理組（P<0.050）。② 體內實驗結果：AOC 模型+LY294002 處理組大鼠的生存率高于 AOC 模型組，血清中肝功能 ALT、AST、TBIL 和炎性因子 TNF-α 和 IL-6 水平均明顯低于 AOC 模型組（P<0.050），PI3K 和 AKT 磷酸化水平及 S1PR2 蛋白表達水平也明顯低于 AOC 模型組（P<0.050）。結論抑制 AOC 模型大鼠中 PBMCs 中 PI3K/AKT 通路的活化，可降低 S1PR2 的表達，且能抑制 AOC 誘導的大鼠全身炎癥反應。
目的 探討藏、漢族阻塞性睡眠呼吸暫停低通氣綜合征（obstructive sleep apnea hypopnea syndrome，OSAHS）患者的血液流變學指標與外周血單個核細胞中低氧誘導因子1α（hypoxia-inducible factor-1α，HIF-1α）/低氧誘導因子2α（hypoxia-inducible factor-2α，HIF-2α）表達的差異性。方法 選取藏、漢族OSAHS的重度患者各30例，同時選取同時期的健康體檢者藏、漢族各30例。采用全血黏度儀檢測各組受試者的全血黏度高剪切率、全血黏度低剪切率、血漿黏度比、紅細胞聚集指數和紅細胞比容。用實時逆轉錄聚合酶鏈反應和蛋白免疫印跡分別檢測外周血單個核細胞中磷脂酰肌醇3激酶（phosphoinositide 3-kinase，PI3K）、絲氨酸/蘇氨酸激酶（serine/threonine kinase，AKT）、核因子κB（nuclear factor-κB，NF-κB）p65 、HIF-1α和HIF-2α的mRNA和蛋白水平。結果 藏族OSAHS患者的血液流變學指標水平均顯著高于藏族健康人和漢族OSAHS患者（均P<0.05），漢族OSAHS患者的血液流變學指標水平均顯著高于漢族健康人（均P<0.05）。藏族OSAHS患者外周血單個核細胞的PI3K、AKT、NF-κB p65和HIF-1α mRNA和蛋白水平水平均顯著高于藏族健康人和漢族OSAHS患者（均P<0.05），漢族OSAHS患者HIF-1α mRNA和蛋白水平水平均顯著高于漢族健康人（均P<0.05），而HIF-2α mRNA和蛋白水平均顯著低于漢族健康人（均P<0.05）。結論 OSAHS患者的外周血單個核細胞HIF-1α水平上調和HIF-2α水平下調依賴于PI3K/AKT/NF-κB p65信號通路的激活，且藏族OSAHS患者的血液流變學水平高于漢族OSAHS患者。
目的探討表沒食子兒茶素沒食子酸酯（epigallocatechin gallate，EGCG）能否延緩軟骨細胞衰老及其作用機制。方法 取4周齡SPF級SD大鼠關節軟骨，采用Ⅱ型膠原酶分步消化法分離培養軟骨細胞并傳代。經甲苯胺藍染色、阿利新藍染色及Ⅱ型膠原蛋白免疫細胞化學染色鑒定后，將第2代細胞分為空白對照組、10 ng/mL IL-1β培養組以及6.25、12.5、25.0、50.0、100.0、200.0 μmol/L EGCG+10 ng/mL IL-1β共培養組，對應培養24 h后采用細胞計數試劑盒8觀測軟骨細胞活性，篩選EGCG最佳藥物濃度進行下一步實驗。進一步將第2代軟骨細胞分為空白對照組（A組）、10 ng/mL IL-1β培養組（B組）、EGCG+10 ng/mL IL-1β共培養組（C組）、EGCG+10 ng/mL IL-1β+5 mmol/L 3-甲基腺嘌呤（3-methyladenine，3-MA）組（D組），對應培養后采用β-半乳糖苷酶染色檢測細胞衰老程度，單丹磺酰尸胺法檢測細胞自噬情況，實時熒光定量PCR檢測軟骨細胞衰老相關基因 ［Ⅱ型膠原、基質金屬蛋白酶3（matrix metalloproteinase 3，MMP-3）、MMP-13）］ 表達水平，Western blot檢測軟骨細胞相關蛋白（Beclin-1、LC3、MMP-3、MMP-13、Ⅱ型膠原、P16、mTOR、AKT）表達水平。結果 經鑒定分離培養細胞為軟骨細胞。與空白對照組相比，10 ng/mL IL-1β培養組細胞活力降低（P<0.05）；與10 ng/mL IL-1β培養組相比，各濃度EGCG+10 ng/mL IL-1β共培養組細胞活力上升，其中50.0、100.0、200.0 μmol/L EGCG明顯促進軟骨細胞活性（P<0.05）；研究選擇100.0 μmol/L EGCG進行后續實驗。與A組相比，B組細胞呈衰老變化。與B組相比，C組軟骨細胞衰老率降低，自噬增強，Ⅱ型膠原mRNA相對表達量上調，MMP-3和MMP-13 mRNA相對表達量下調；Beclin-1、 LC3及Ⅱ型膠原蛋白相對表達量上調，但P16、MMP-3、MMP-13、mTOR 及AKT蛋白相對表達量下降；上述差異均有統計學意義（P<0.05）。與C組相比，當D組添加3-MA后，軟骨細胞衰老率上升、自噬減少，上述目標蛋白及mRNA相對表達量均呈相反趨勢變化（P<0.05）。結論 EGCG通過PI3K/AKT/mTOR通路調控軟骨細胞自噬水平，發揮抗衰老作用。
目的研究桔皮素對非小細胞肺癌（non-small cell lung cancer，NSCLC）的作用效果及腫瘤干性的影響，并尋找其發揮作用的分子機制。方法通過細胞計數實驗、細胞克隆實驗研究桔皮素對NSCLC細胞體外增殖的影響，transwell實驗檢測桔皮素對NSCLC細胞侵襲的影響，裸鼠荷瘤實驗檢測桔皮素對NSCLC細胞體內增殖的影響，自我更新實驗和CD133、Nanog蛋白表達檢測桔皮素對NSCLC細胞腫瘤干性的影響，蛋白免疫印跡（Western blotting，WB）實驗檢測PI3K/AKT/ mTOR信號通路相關蛋白的表達。結果細胞計數實驗、克隆形成實驗以及裸鼠荷瘤實驗顯示，桔皮素可以抑制NSCLC細胞系的增殖活動、克隆形成能力以及在體內的增殖能力。自我更新實驗顯示桔皮素可以抑制NSCLC細胞的自我更新能力。WB實驗顯示桔皮素可抑制腫瘤干性標記物CD133和Nanog在腫瘤細胞系中的表達；桔皮素可以抑制NSCLC細胞系中PI3K/AKT/mTOR信號通路相關蛋白的激活，而PI3K/AKT/mTOR信號通路激活劑可以部分緩解桔皮素對CD133和Nanog表達的抑制作用。結論桔皮素可以抑制NSCLC細胞的腫瘤干性，其抑制效果可能與PI3K/AKT/mTOR信號通路有關。
目的分析 miR-451a 對人胰腺癌 BxPc3 細胞增殖及凋亡的影響并探究其分子機制。方法以 BxPc3 細胞為研究對象，建立脂質體轉染 miR-451a 模擬物并分別設不同濃度（25、50、100 和 200 μmol/L）miR-451a 組及空白對照組。實時熒光定量 PCR 法檢測各組細胞內 miR-451a mRNA 表達情況；然后用 MTT 法、平板克隆實驗、流式細胞術及 Western blot 法分別檢測不同濃度 miR-451a 轉染對 BxPc3 細胞的增殖能力、細胞克隆數、細胞周期及凋亡變化的影響以及 BxPc3 細胞中巨噬細胞移動抑制因子（MIF）、鈣結合蛋白 39（CAB39）、磷酸化磷脂酰肌醇-3 激酶（p-PI3K）和磷酸化蛋白激酶 B（p-AKT）蛋白的表達情況。結果各濃度轉染組 BxPc3 細胞中 miR-451amRNA 表達量高于空白對照組（P<0.050）；轉染 miR-451a 可顯著抑制 BxPc3 細胞增殖且呈時間及濃度依賴性（P<0.050）；200 μmol/L miR-451a 轉染組細胞克隆數明顯少于空白對照組（P<0.050）；miR-451a 轉染后可使 BxPc3 細胞分化停滯于 G0/G1 期并可誘導細胞凋亡且具有濃度依賴性（P<0.050）；miR-451a 轉染后 BxPc3 細胞內 MIF、CAB39、p-PI3K 和 p-AKT 蛋白表達較空白對照組下調并呈現濃度依賴性（P<0.050）。結論從本研究實驗結果看，miR-451a 可抑制 BxPc3 細胞增殖、誘導細胞凋亡并呈現濃度依賴性，其機制可能與抑制 PI3K/AKT 信號通路有關。