目的 通過觀察嚴重燒傷患者血清對體外培養的人臍帶MSCs（human umbilical cord MSCs，hUCMSCs）生物學行為的影響，探討hUCMSCs移植治療嚴重燒傷的可行性。 方法 取足月剖腹產手術的健康胎兒臍帶組織分離培養hUCMSCs，將第3代hUCMSCs用于實驗。根據培養血清不同將實驗分為3組，分別為10%FBS組（A組）、10%正常血清組（B組）和10%燒傷血清組（C組）。于培養24 h、72 h和6 d，采用倒置顯微鏡觀察各組細胞形態及融合情況，MTT法測定細胞增殖；培養后第6天采用碘化丙啶染色、流式細胞儀檢測細胞周期，吖啶橙/溴化乙錠染色法檢測細胞凋亡，β-半乳糖苷酶（β-galactosidase，β-gal）染色檢測細胞衰老，ELISA法測定B、C組血清中TNF-α、IL-1、PDGF及IGF-1含量。 結果 各時間點各組細胞形態均呈長梭形，部分呈多角形；但C組細胞融合速度顯著快于A、B組。細胞增殖曲線顯示，培養2～6 d，C組增殖細胞數高于A、B組，差異有統計學意義（P lt; 0.05）。流式細胞儀檢測示，培養6 d A、B、C組hUCMSCs增殖期（S期）比例分別為9.21% ± 1.02%、11.79% ± 1.87%和20.54% ± 2.03%，C組顯著高于A、B組（P lt; 0.05）。各時間點各組細胞形態和結構正常，未見細胞核著橘紅色熒光的凋亡細胞或死亡細胞。培養6 d A、B、C組β-gal染色陽性細胞百分率分別為4.8% ± 0.2%、3.8% ± 0.4%和2.6% ± 0.1%，C組顯著低于A、B組（P lt; 0.05）。ELISA法檢測C組血清中TNF-α、IL-1、PDGF及IGF-1含量顯著高于B組，差異有統計學意義（P lt; 0.05）。 結論 嚴重燒傷患者血清中含有較高水平的TNF-α、IL-1、PDGF和IGF-1等細胞因子，可顯著刺激hUCMSCs快速增殖，不引起細胞凋亡，能減少細胞衰老，將hUCMSCs移植治療嚴重燒傷可行。
目的 探討D-半乳糖(D-galactose, D-gal) 誘導SD大鼠骨髓間充質干細胞(marrow mesenchymal stem cells, MSCs)衰老后的形態學及生物學變化情況。方法 取3只2月齡SD大鼠MSCs分離培養至第3代，一部分置于含8 g/L D-gal的培養液中繼續培養至第6代作為誘導組；另一部分在原培養液中繼續培養至第6代作為對照組，并作表型鑒定。采用流式細胞儀檢測對照組加入8 g/L Dgal后4 d內細胞周期的分布變化。兩組MSCs培養7 d并繪制生長曲線，在光鏡和透射電鏡下觀察其形態和結構變化，β-半乳糖苷酶染色、單細胞凝膠電泳檢測DNA損傷方法檢測其衰老后的生物學行為變化。結果 誘導組MSCs鏡下呈典型的衰老細胞形態；對照組MSCs形態均勻，長勢良好。流式細胞儀檢測表明加入D-gal誘導后90% MSCs停留在G 0/G 1期，而S期和G 2/M期MSCs趨于消失，并隨誘導時間延長趨勢越明顯；對照組MSCs各期比例正常。MSCs生長曲線示誘導組生長速度較對照組明顯減慢。誘導組約85%呈β-半乳糖苷酶陽性染色，對照組染色為陰性。單細胞凝膠電泳示誘導組MSCs DNA有拖尾現象，對照組MSCs無DNA損傷。結論 D-gal對SD大鼠MSCs的老化具有誘導作用，初步推斷8 g/L為最適濃度，為研究MSCs衰老提供了較好的模型。
目的 探討 SV40如何介導細胞永生化 ,與細胞永生化現象相關的因素及它們的作用。方法 復習近十年有關細胞永生化與復制衰老現象研究的文章 ,對 SV40介導的細胞永生化及其相關因素進行綜述。結果細胞永生化涉及病毒 DNA的整合 ,端粒酶的活化 ,生長抑制因子的失活等多方面的因素 ,它們的作用機制密切相關。結論 細胞永生化的研究有助于更廣義地理解細胞生物學現象 ,并可作為標準細胞在細胞工程及組織工程的研究中發揮作用。
目的 探討藍光光照強度、時間與大鼠視網膜色素上皮（RPE）細胞復制衰老的關系。方法 將36只鼠齡12~14周的Wistar大鼠置于懸有波長為（450plusmn;10） nm的醫用藍光燈管的自制光照架中。隨機分為4組，每組9只大鼠，1組：無光照對照組；2組：自然光照組；3組：500 lx光照組；4組：1000 lx光照組。每組按照照射時間再分為1、2、3個月組3個亞組，分別在1、2、3個月時行10％水合氯醛腹腔注射麻醉后取出眼球，將右眼球行石蠟切片，蘇木精伊紅（HE）染色；左眼球行冰凍切片，采用衰老相關beta;半乳糖苷酶（SA-beta;-Gal）染色方法觀察RPE細胞染色陽性情況。采用SPSS 11.5統計軟件對結果數據進行統計學分析。結果 不同光照強度組、不同光照時間組大鼠RPE 細胞SA-beta;-Gal染色陽性細胞個數差異有統計學意義（F＝510.309，55.016；P＝0.000）；組間兩兩比較，除1組與2組之間差異無統計學意義外（P＝0.154），其它各組之間差異均有統計學意義（P＝0.000）。在單一光照強度條件下，除1組大鼠RPE細胞SA-beta;-Gal染色陽性細胞個數差異無統計學意義外（P=0.897）,其余各組差異均有統計學意義（P＜0.01）；在單一時間條件下，各組差異均有統計學意義（P＝0.000）。結論 同一藍光光照強度下，隨著時間的增加大鼠視網膜RPE細胞逐漸出現復制衰老改變;同一時間條件下，隨光照強度增加大鼠視網膜RPE細胞也逐漸出現復制衰老改變。
目的篩選質粒，研究質粒短發夾RNA（shRNA）對小鼠腎內髓集合管細胞（IMCD3）Klotho基因的抑制作用。 方法針對Klotho基因的3個位點設計并合成3對Klotho-shRNA序列（shRNA轉染1、2、3組），構建其表達質粒pRNAU6-Klotho，并設置陰性序列（陰性對照組）及正常IMCD3細胞（未處理組）為對照，以Lipofactine2000轉染至IMCD3細胞，24 h后采用逆轉錄-聚合酶鏈反應（RT-PCR）及蛋白質印跡法檢測IMCD3細胞Klotho基因mRNA及蛋白表達水平。 結果轉染后，RT-PCR顯示shRNA轉染2組IMCD3細胞Klotho mRNA水平與未處理組和陰性對照組相比較，均存在統計學意義（P＜0.01）；蛋白質印跡法結果顯示與未處理組、陰性對照組、shRNA轉染1組及shRNA轉染3組相比，shRNA轉染2組IMCD3細胞的Klotho蛋白水平差異均有統計學意義（P＜0.001）。 結論質粒shRNA能高效抑制小鼠腎臟IMCD3細胞Klotho的表達，提示其在腎臟病研究中可有一定的作用，并為下一步研究篩選出一條合適的干擾序列。
采用紫外分光光度儀測定茄尼醇的紫外透光率、體外清除自由基和酪氨酸酶活性抑制率,從三個方面探討茄尼醇抗氧化和抑制酪氨酸酶的作用機制。觀察了茄尼醇的最小紫外透光率及紫外透光率的日變化規律,參照Smirnoff反應方法建立反應體系模型來檢測對羥基自由基(·OH)的清除力,采用鄰苯三酚自氧化法檢測對超氧陰離子自由基(O2-·)的清除力,還利用酶動力法研究了茄尼醇對酪氨酸酶活性的抑制作用。實驗結果表明:茄尼醇能有效吸收紫外輻射,有效清除脂質自由基而阻斷脂質過氧化,以及有效抑制酪氨酸酶。茄尼醇為天然提取物,可望用于抑制皮膚衰老及老年斑形成。
心血管疾病是一種嚴重威脅人類健康和生命的疾病, 導致其發病的因素很多, 其中遺傳方面的因素近年來受到高度重視。大量研究表明, 共濟失調毛細血管擴張癥突變(ATM)基因若發生缺失或突變, 會導致DNA損傷修復缺陷、端粒縮短、抗氧化能力下降、胰島素抵抗、血脂水平增高等, 進而導致衰老、動脈粥樣硬化及代謝綜合征等心血管疾病危險因素的發生。本文就ATM基因與心血管疾病危險因素之間的作用機制進行綜述, 以期為相關基礎研究和臨床應用提供一定的參考依據。
目的初步探索衰老標記蛋白30(SMP-30)在人肺組織中的表達以及在慢性阻塞性肺疾病(慢阻肺)發病中的意義。 方法納入2012年1月至6月在江蘇省人民醫院因肺部腫瘤行肺葉切除術的患者20例。肺組織標本從江蘇省人民醫院組織庫申請獲得, 為距離癌組織＞5 cm的相對正常組織。根據患者肺功能及吸煙情況, 將患者分為健康對照組7例, 吸煙對照組7例, 以及慢阻肺組6例。采用免疫組織化學和蛋白免疫印跡法檢測SMP-30在各組肺組織中的細胞定位及含量。 結果SMP-30在人肺組織中主要分布于肺泡巨噬細胞胞漿, 慢阻肺組肺泡巨噬細胞及SMP-30陽性細胞數量均明顯增多。蛋白免疫印跡法顯示肺組織SMP-30蛋白在吸煙非慢阻肺組的含量明顯高于健康對照組(2.16±0.23比1.10±0.14, P＜0.01)。相較于吸煙非慢阻肺組, 慢阻肺組SMP-30蛋白表達進一步增加(4.62±0.97比2.16±0.23, P＜0.05)。 結論SMP-30的表達增加可能與肺泡巨噬細胞壽命延長、數量增多有關, 有可能是慢阻肺發生發展的一個病理環節。
目的探討同一年齡段、不同程度腰椎間盤退變患者髓核中p16INK4a的表達，明確其與椎間盤退變的關系，為退變椎間盤的生物學修復提供依據。 方法收集腰椎間盤退變患者退變髓核標本17例，年齡40～50歲；退變按Pfirrmann分級為Ⅲ級10例、Ⅳ級7例。檢測衰老相關-β-半乳糖苷酶（senescence-associated β-galactosidase，SA-β-gal）活性，評價細胞衰老情況；免疫組織化學染色和Western blot檢測聚集蛋白聚糖（Aggrecan）、含血小板凝血酶敏感蛋白的解聚素與金屬蛋白酶5（A disintegrin and metalloproteinase with thrombospondin motifs 5，ADAMTS 5）、Sry相關的HMG盒轉錄因子9（Sry-related HMG box transcription factor 9，Sox-9）、p16INK4a蛋白表達。采用Bivariate過程分析ADAMTS 5和p16INK4a蛋白表達的相關性。 結果Ⅲ、Ⅳ級髓核組織內均可見到綠染的SA-β-gal陽性髓核細胞（nucleuspulposus cells，NPCs），多呈簇狀分布，其中Ⅲ級中也可見少量單個分布的綠染NPCs，呈圓形，其外周由多層細胞外基質包裹，而Ⅳ級中難以見到單個分布的綠染NPCs；Ⅲ、Ⅳ級髓核組織陽性細胞百分比分別為22.7%±5.4%和37.1%±7.6%，差異有統計學意義（t=-9.666，P=0.000）。免疫組織化學染色和Western blot檢測示，Ⅳ級髓核組織中p16INK4a、ADAMTS5染色陽性細胞百分比和蛋白相對表達量明顯多于Ⅲ級，而Aggrecan、Sox-9明顯少于Ⅲ級，差異均有統計學意義（P<0.05）。退變髓核組織中ADAMTS 5與p16INK4a的蛋白表達成線性相關（r=0.908，P=0.000）。 結論過早衰老NPCs的累積與椎間盤退變程度密切相關，p16INK4a參與的NPCs過早衰老對椎間盤退變進程起著主導作用。
目的探討在過早衰老髓核細胞（nucleus pulposus cells，NPCs）微環境中BMSCs的生物學行為，為充分利用BMSCs干細胞特性進行退變椎間盤修復奠定實驗基礎。 方法收集人退變髓核組織與正常骨髓組織進行NPCs、BMSCs分離、培養及鑒定；對過早衰老誘導的第1代NPCs和正常第3代BMSCs行非接觸共培養，根據NPCs與BMSCs不同比例將實驗分為A組（75%∶25%）、B組（50%∶50%）和C組（0∶100%）。倒置相差顯微鏡和透射電鏡觀察各組BMSCs形態變化；對培養3、6 d的BMSCs進行增殖能力檢測：細胞計數試劑盒8檢測細胞活力、流式細胞儀檢測細胞周期、BrdU標記流式檢測DNA代謝；培養6 d檢測衰老相關β半乳糖苷酶（senescence associated β-galactosidase，SA-β-gal）活性評價細胞衰老。 結果倒置相差顯微鏡示A、B組BMSCs中混雜的三角形或大多角形細胞增多，尤其是A組；透射電鏡觀察A、B組均可見典型衰老形態的細胞。培養3、6 d，A組細胞存活率均顯著低于B組，差異有統計學意義（P＜0.05）。3 d時，A組G1期細胞比例明顯高于B、C組（P＜0.05），S期細胞比例明顯低于B、C組（P＜0.05）。6 d時，A組約81.0%細胞停滯于G1期，S期及G2期細胞比例減小，與B、C組比較各細胞周期分布差異均有統計學意義（P＜0.05）；B組細胞停滯于G1期比例增加至約74.4%，與C組比較各細胞周期分布差異均有統計學意義（P＜0.05）。培養3、6 d，A組摻入的BrdU含量均明顯低于B、C組（P＜0.05）；B、C組間3 d時差異無統計學意義（P＞0.05），6 d時B組明顯低于C組（P＜0.05）。培養6 d，A、B組SA-β-gal活性顯著提高，3組間比較差異均有統計學意義（P＜0.05）。 結論過早衰老的NPCs可通過旁分泌效應下調共培養的BMSCs增殖能力，而NPCs數量上的優勢使得共培養的BMSCs更早表現出衰老特征。