隨著對血管內皮生長因子（VEGF）的深入研究和抗VEGF藥物的研發，新生血管性老年性黃斑變性治療領域有了突破性進展。抗VEGF藥物治療新生血管性老年性黃斑變性的主要途徑是玻璃體腔注射。任何一種新興療法的應用都要建立在可靠的安全性研究基礎上。抗VEGF藥物玻璃體腔注射的不良反應主要分為藥物相關和注射相關不良反應。其中，眼部不良反應主要有眼內炎、視網膜脫離、視網膜裂孔、眼壓升高、白內障等；全身不良反應主要有心肌梗死、卒中、尿路感染、高血壓、鼻咽炎、咽痛、前列腺癌、骨關節炎、腹股溝疝等。與貝伐單抗（bevacizumab，商品名Avastin）比較，雷珠單抗（ranibizumab，商品名Lucentis）具有較低的不良反應發生率，其全身不良反應不明顯。基于藥物的安全性差異還有待于更大規模臨床試驗來證實。
目的 觀察糖尿病視網膜病變(DR)對循環外周血內皮祖細胞（EPCs）的影響。方法 雄性成年Wistar大鼠60只，隨機分為正常對照組和糖尿病組。后者通過腹腔注射鏈脲佐菌素(STZ)建立DR模型。采用流式細胞儀分別計數建模后1周、1、3、6個月各組大鼠循環外周血EPCs數量，同時于各相應時間點摘除大鼠眼球行蘇木精伊紅(HE)染色、視網膜血管消化鋪片過碘酸Schiff(PAS)染色，通過光學顯微鏡以及透射電子顯微鏡進行視網膜組織病理學檢查。對比分析EPCs數量以及EPCs數量與DR形態學變化的相互關系。結果 大鼠注射STZ 1周、1、3、6個月后循環外周血EPCs數量分別為(25plusmn;7)、(28plusmn;8)、(39plusmn;7)、(43plusmn;7)個/20萬個單個核細胞，對照組為(45plusmn;4)個/20萬個單個核細胞。與正常對照組大鼠相比，糖尿病組EPCs數量均降低（F=8.933，P＜0.01）。隨著觀察時間的延長，糖尿病組EPCs數量逐漸回升，而視網膜結構、光感受器細胞、血管也逐漸出現病理性改變。光學顯微鏡下，與正常對照組比較，大鼠注射STZ后1周和1個月組視網膜各層結構清晰完整，但厚度開始變薄，1個月組視網膜細胞排列紊亂，細胞核腫脹、體積增大，光感受器細胞減少，隨病程時間增加這些改變逐漸加重，3、6個月組視網膜厚度更薄，細胞排列紊亂更加明顯，部分擴張的血管有向外突出、破潰的趨勢。透射電子顯微鏡下，毛細血管內皮細胞水腫，線粒體腫脹；毛細血管基底膜增厚，管腔狹窄，6個月組甚至出現管腔閉塞和視網膜微動脈瘤；光感受器細胞膜盤間隙擴大，排列紊亂，線粒體水腫，細胞早期空泡變性。結論 糖尿病大鼠外周血EPCs數量較正常大鼠降低。隨著DR的進展，EPCs數量逐漸回升。
目的觀察p21活化激酶4（PAK4）對視網膜血管內皮細胞行為和線粒體功能的影響。方法實驗研究，分為體內動物實驗和體外細胞實驗兩部分。體內動物實驗：健康C57BL/6J雄性小鼠12只，隨機分為正常對照組、糖尿病組，每組各6只小鼠。糖尿病組小鼠經鏈脲佐菌素誘導建立糖尿病模型。建模后8周，采用蛋白質免疫印跡法、實時熒光定量聚合酶鏈反應檢測正常對照組、糖尿病組小鼠視網膜PAK4表達情況。體外細胞實驗：人視網膜微血管內皮細胞（hRMEC）分為常規培養細胞組（N組）、空載體組（Vector組）、PAK4過表達組（PAK4組）。各組加入150 μg/ml糖基化終末產物誘導細胞。細胞劃痕實驗檢測各組hRMEC內細胞遷移情況；流式細胞儀檢測各組白細胞粘附于hRMEC數量。Seahorse XFe96細胞能量代謝分析儀測定細胞內線粒體基礎呼吸、三磷酸腺苷（ATP）生成、最大呼吸與備用呼吸能力。兩組間比較采用t檢驗；三組間比較采用單因素方差分析。結果體內動物實驗：與正常對照組小鼠比較，糖尿病組小鼠視網膜中PAK4 mRNA、蛋白相對表達量顯著升高，差異均有統計學意義（t=25.372、22.419、25.372，P＜0.05）。體外細胞實驗：與N組、Vector組比較，PAK4組hRMEC中PAK4蛋白、mRNA相對表達量和細胞遷移率均顯著升高，差異有統計學意義（F=36.821、38.692、29.421，P＜0.05）。流式細胞儀檢測結果顯示，PAK4組hRMEC上白細胞粘附數量明顯升高，差異有統計學意義（F=39.649，P＜0.01）。線粒體壓力測量結果顯示，PAK4組hRMEC內線粒體基礎呼吸、ATP生成、最大呼吸與備用呼吸能力明顯減弱，差異有統計學意義（F=27.472、22.315、31.147、27.472，P＜0.05）。結論PAK4高表達損傷線粒體功能并顯著促進白細胞粘附和內皮細胞遷移。
目的觀察二甲雙胍（Met）對糖尿病（DM）微環境下人視網膜微血管內皮細胞（hRMEC）中核苷酸結合寡聚化結構樣受體蛋白3（NLRP3）炎癥小體及細胞焦亡的影響。方法實驗研究，分為體內動物實驗和體外細胞實驗進行。體內動物實驗：健康C57BL/6J雄性小鼠9只，隨機分為DM組、正常對照組、DM+Met處理組（DM+Met組），每組各3只小鼠。DM組、DM+Met組小鼠經鏈脲佐菌素誘導建立DM模型；DM+Met組給予Met 400 mg/（kg·d）干預。建模后8周，免疫組織化學染色觀察正常對照組、DM組、DM+Met組小鼠視網膜NLRP3、cleaved-膜穿孔蛋白D（GSDMD）、cleaved-半胱天冬酶1（Caspase-1）的表達。體外細胞實驗：hRMEC分為常規培養細胞組（N組）、晚期糖基化終末產物（AGE）組、AGE+Met組。AGE組、AGE+Met組加入150 μg/ml AGE誘導細胞，AGE+Met組另加入2.0 mmol/L Met處理細胞。流式細胞儀檢測各組細胞焦亡情況；2', 7'-二氯熒光素二乙酸酯（DCFH-DA）熒光探針檢測各組細胞中活性氧（ROS）表達；實時熒光定量聚合酶鏈反應、蛋白質免疫印跡法檢測各組細胞中NLRP3、cleaved-GSDMD、cleaved-Caspase-1 mRNA、蛋白相對表達量。三組間比較采用單因素方差分析。結果體內動物實驗：與DM組比較，正常對照組、DM+Met組小鼠視網膜中NLRP3、cleaved-GSDMD、cleaved-Caspase-1表達顯著降低；三組間比較，差異有統計學意義（F=43.478、36.643、24.464，P＜0.01）。體外細胞實驗：流式細胞儀檢測結果顯示，AGE組細胞焦亡率顯著高于N組、AGE+Met組，差異有統計學意義（F=32.598，P＜0.01）。DCFH-DA檢測結果顯示，N組、AGE+Met組細胞內ROS水平較AGE組明顯降低，差異有統計學意義（F=47.267，P＜0.01）。AGE+Met組細胞中NLRP3、cleaved-GSDMD、cleaved-Caspase-1的mRNA（F=51.563、32.192、44.473，P＜0.01）和蛋白（F=63.372、54.463、48.412，P＜0.01）相對表達量較N組顯著下降。結論Met可下調hRMEC內NLRP3炎性小體相關因子表達并抑制細胞焦亡。
目的觀察聚嘧啶束結合蛋白相關剪接因子（PSF）高表達對糖基化終末產物（AGEs）誘導下RPE細胞損傷的保護作用。方法將體外培養的人RPE細胞分為正常對照組（N組）、空白對照組（N+AGAGEs組）、空載體對照組（Vec+AGEs組）、PSF高表達組（PSF+AGEs組）。N組RPE細胞常規培養；N+AGEs組只做轉染處理但不導入任何外源性基因的RPE細胞聯合AGEs誘導；Vec+AGEs組、PSF+AGEs組利用轉染試劑脂質體2000將pcDNA空載體或pcDNA-PSF真核表達質粒導入RPE細胞聯合AGEs誘導。除N組以外，其余3組細胞進行相應的轉染處理，24 h后應用150 μg/ml的AGEs刺激72 h。采用HE染色和Hoechst 33258染色觀察PSF高表達對RPE細胞凋亡相關形態改變的影響；通過ROS水平檢測分析PSF高表達對AGEs誘導的RPE細胞ROS表達的影響；采用MTT比色法檢測PSF高表達對RPE細胞生存力的影響；采用Western blot檢測PSF不同作用時間及不同劑量對血紅素氧合酶1（HO-1）表達的影響。結果HE染色和Hoechst 33258染色觀察發現，N組細胞形態飽滿，細胞核呈圓形，細胞質豐富，染色均一；N+AGEs組、Vec+AGEs組細胞體積縮小，嗜酸性染色增強，細胞核致密濃染、固縮甚至碎裂；PSF+AGEs組細胞形態尚飽滿，細胞漿染色較均勻，細胞核染色均一。MTT比色法檢測結果顯示，PSF高表達可有效提高RPE細胞生存力，但該作用可被ZnPP有效拮抗，且差異有統計學意義（F=33.26，P＜0.05）。DCFH-DA法檢測結果顯示，與N+AGEs組、Vec+AGEs組比較，PSF+AGEs組細胞中ROS產量下降，差異有統計學意義（F=11.94，P＜0.05）。Western blot檢測結果顯示，PSF蛋白以時間、劑量依賴性的方式上調HO-1的表達水平。PSF蛋白作用24、48、72 h的HO-1相對表達水平較0 h明顯升高，差異有統計學意義（F=164.91，P＜0.05）。0.1、0.5、1.0、1.5、2.0 μg PSF蛋白作用下的HO-1相對表達水平較0.0 μg明顯升高，差異有統計學意義（F=104.82，P＜0.05）。結論PSF可能通過上調HO-1的表達而抑制ROS產生，從而對AGEs誘導下的RPE細胞損傷發揮保護作用。
目的觀察慢病毒介導聚嘧啶束結合蛋白相關剪接因子（PSF）對氧誘導視網膜病變（OIR）小鼠視網膜新生血管的抑制作用。方法5日齡C57BL/6J小鼠112只隨機分為正常對照組、單純OIR模型組、OIR模型+慢病毒空載體處理組（以下簡稱Vec組）及OIR模型+ PSF慢病毒處理組（以下簡稱PSF組），分別為16、32、32、32只。小鼠7日齡時，正常對照組小鼠常規環境飼養；單純OIR模型組、Vec組及PSF組小鼠建立OIR模型。小鼠12日齡時，Vec組、PSF組小鼠玻璃體腔分別注射滴度為1×1011 TU/ml的空載體病毒或PSF慢病毒1 μl。正常對照組和單純OIR模型組小鼠不再做任何處理。小鼠17日齡時，采用HE染色計數突破視網膜內界膜的血管內皮細胞核；作視網膜鋪片，測量各組小鼠視網膜無灌注區相對面積；采用實時定量PCR檢測各組小鼠視網膜中NF-E2相關因子2（Nrf2）和血紅素氧合酶1（HO-1）的mRNA相對表達量；采用Western blot檢測各組小鼠視網膜中Nrf2、HO-1及PSF的蛋白相對表達量。組間比較采用單因素方差分析。結果正常對照組、單純OIR模型組、Vec組、PSF組小鼠突破內界膜的血管內皮細胞核數分別為0.00、14.36±5.50、15.67±4.96、8.13±2.09個；視網膜無灌注區面積分別為0.00%、（35.71±2.81）%、（36.57±4.53）%、（15.33±4.75）%。4組間小鼠突破內界膜的血管內皮細胞核數及視網膜無灌注區面積比較，差異均有統計學意義（F=24.87、165.70，P＜0.05）。組間兩兩比較，單純OIR模型組、Vec組較正常對照組突破內界膜的血管內皮細胞核數增多，視網膜無灌注區面積增大；PSF組較單純OIR模型組、Vec組突破內界膜的血管內皮細胞核數減少，視網膜無灌注區面積減小，差異均有統計學意義（P＜0.05）。實時定量PCR及Western blot檢測結果顯示，4組間小鼠視網膜Nrf2、PSF mRNA相對表達量（F=53.66、83.54）以及Nrf2、HO-1、PSF蛋白相對表達量（F=58.38、52.69、24.79）比較，差異均有統計學意義（P＜0.05）。組間兩兩比較，單純OIR模型組、Vec組小鼠視網膜Nrf2、PSF mRNA相對表達量及Nrf2、HO-1、PSF蛋白相對表達量較正常對照組明顯降低，PSF組小鼠視網膜Nrf2、PSF mRNA相對表達量及Nrf2、HO-1、PSF蛋白相對表達量較單純OIR模型組、Vec組明顯增加，差異均有統計學意義（P＜0.05）。結論慢病毒介導的PSF可通過上調Nrf2及HO-1的表達抑制OIR小鼠視網膜新生血管形成。
目的觀察多聚嘧啶序列結合蛋白相關剪接因子（PSF）對缺氧誘導的人視網膜微血管內皮細胞（hRMECs）功能的影響。方法采用三質粒系統構建慢病毒顆粒（LV）-PSF。LV-PSF體外感染hRMECs后通過流式細胞計數法測定其感染效率。應用實時定量PCR（RT-PCR）檢測經LV-PSF感染的hRMECs中PSF mRNA表達水平。將實驗分為體內和體外兩部分。體內實驗：7日齡健康C57B/L6小鼠20只，采用隨機數字表法分為正常組、氧誘導視網膜病變（OIR）組、OIR+LV-空載體（Vec）組和OIR+LV-PSF組，每組5只。除正常組外，其余3組構建OIR模型。OIR組除缺氧刺激外，不做其余處理。OIR+LV-Vec組和OIR+LV-PSF組小鼠分別玻璃體腔注射LV-Vec或LV-PSF。觀察LV-PSF對視網膜新生血管（RNV）形成的影響。體外實驗：將hRMECs分為正常組、缺氧組、空載組、PSF高表達組。正常組為正常體外培養的hRMECs；缺氧組為缺氧刺激3 h恢復正常培養條件24 h的hRMECs；空載組、PSF高表達組分別為用LV-Vec、LV-PSF感染48 h，再用缺氧刺激3 h恢復正常培養條件24 h的hRMECs。采用MTT比色法觀察PSF對細胞增生能力的影響。采用細胞劃痕實驗和Transwell遷移實驗觀察PSF對缺氧刺激下細胞遷移能力的影響。采用RT-PCR觀察各組細胞中HIF-1α、VEGF及PSF的mRNA表達。結果成功構建可穩定高表達PSF的LV-PSF，流式細胞儀測定其感染效率為97%，RT-PCR測得經LV-PSF感染的hRMECs中PSF mRNA水平明顯上調。體內實驗：OIR組、OIR+LV-Vec組小鼠RNV面積較正常組明顯增加（t=18.31、43.71），OIR+LV-PSF組小鼠RNV面積較OIR組（t=11.30）、OIR+LV-Vec組（t=15.47）明顯減小，差異均有統計學意義（P＜0.05）。體外實驗：MTT比色法檢測結果顯示，缺氧組hRMECs增生能力較正常組明顯增強（t=2.57），PSF高表達組hRMECs增生能力較正常組、缺氧組、空載組明顯降低（t=5.26、5.46、3.73），差異均有統計學意義（P＜0.05）。細胞劃痕實驗結果顯示，缺氧刺激3 h恢復正常條件24 h或48 h均可刺激缺氧組與空載組細胞明顯遷移（t=8.35、13.84，P＜0.05）；而與缺氧組與空載組比較，PSF高表達組細胞遷移不明顯（t=10.99、18.27、9.75、8.93、26.94、7.01，P＜0.05）。Transwell小室實驗結果顯示，正常組和空載組微孔膜上染色的細胞數較多，而PSF高表達組微孔膜上染色的細胞數明顯減少（t=9.33、6.15，P＜0.05）。RT-PCR檢測結果顯示，與正常組比較，缺氧組、空載組hRMECs中HIF-1α、VEGF的mRNA表達明顯增加（t=15.23、21.09，P＜0.05），PSF mRNA表達無明顯變化（t=0.12、2.15， P＜0.05）；與缺氧組、空載組比較，PSF高表達組hRMECs中HIF-1α、VEGF的mRNA表達明顯下降（t=10.18、13.10，P＜0.05），PSF mRNA表達明顯增加（t=65.00、85.79，P＜0.05）。結論PSF可減少OIR模型小鼠RNV面積。PSF可能通過HIF-1α/VEGF信號通路抑制缺氧誘導的hRMECs增生和遷移。