目的 觀察人胚胎干細胞（hESC）向視網膜色素上皮（RPE）細胞誘導分化過程中微小核糖核酸（miRNA）-204和211的變化特征。方法 采用自然分化法誘導hESC向RPE細胞分化，細胞鑒定。按細胞誘導分化時間秩序，分為hESC組、含色素細胞組、hESC源性RPE細胞組和原代培養的人胎RPE（hfRPE）細胞組。行miRNA基因表達譜芯片分析、miRNA-204和211實時熒光逆轉錄聚合酶鏈反應（RT-PCR）檢測。 結果 miRNA芯片分析結果顯示，隨細胞誘導分化過程， miRNA-204持續上調。其中，含色素細胞組是hESC組的5.026倍，hESC 源性RPE細胞組是含色素細胞組的3.337倍；hfRPE細胞組是hESC源性RPE細胞的13.574倍。miRNA-211在細胞誘導分化過程中上調不明顯，但從hESC源性RPE細胞到hfRPE細胞，上調倍數為44.333倍，是miRNA表達譜中差異最大的miRNA。RT-PCR檢測結果顯示，hESC組、含色素細胞組、hESC源性RPE細胞組、hfRPE細胞組miR-204相對表達量分別為91.81plusmn;4.43、2 263.09plusmn;206.39、5 996.80plusmn;235.42、171 676.45plusmn;999.82，差異有統計學意義（t=18.22、20.66、279.38，P＜0.001）；miRNA-211相對表達量分別為2.23plusmn;0.31、129.33plusmn;3.75、125.76plusmn;4.78、16 682.00plusmn;352.97。含色素細胞組和hESC細胞組、hfRPE細胞組和hESC源性RPE細胞組miR-211相對表達量比較，差異均有統計學意義（t=58.58、81.24，P＜0.001）。結論 miRNA-204和211在hESC向RPE細胞誘導分化過程中持續單一變化。
目的分析氧誘導視網膜病變（OIR）小鼠模型的微小RNA表達譜，篩選可能與視網膜新生血管（RNV）形成有關的微小RNA。 方法7日齡健康C57BL/6J小鼠52只隨機分為正常對照組和OIR組，每組26只。OIR組建立OIR小鼠模型；正常對照組不做任何處理。小鼠17日齡時，行視網膜鋪片，觀察視網膜血管形態；行視網膜石蠟切片，計數突破內界膜的視網膜血管內皮細胞核數；行微小RNA芯片分析，檢測具有差異表達的微小RNA，再應用實時聚合酶鏈反應（RT-PCR）進行驗證。 結果正常對照組小鼠視網膜血管平滑、均勻有序分布；OIR組小鼠周邊視網膜血管紆曲、紊亂并伴有新生血管芽，中央視網膜無灌注區明顯。正常對照組、OIR組小鼠視網膜無灌注區的相對面積分別為（6.57±3.6）%、（25.81±2.12）%；OIR組小鼠視網膜無灌注區的相對面積較正常對照組明顯增大，差異有統計學意義（t=28.71，P＜0.001）。光學顯微鏡觀察發現，正常對照組小鼠內界膜結構完整、平滑，血管內皮細胞排列整齊，偶見突破內界膜的血管內皮細胞核。正常對照組、OIR組平均每張切片突破內界膜的視網膜血管內皮細胞核數分別為（0.16±0.31）、（28.41±4.01）個。兩組平均每張切片突破內界膜的視網膜血管內皮細胞核數比較，差異有統計學意義（t=54.45，P＜0.001）。微小RNA芯片分析結果顯示，與正常對照組比較，OIR組有21個微小RNA的表達發生了1.5倍以上的變化。其中，上調者9個，下調者12個。差異表達倍數≥3.0的微小RNA為miR-3078、miR-140、miR-29b、miR-29c。RT-PCR檢測發現，差異表達倍數≥3.0的4個微小RNA，其表達趨勢與芯片分析結果一致。與正常對照組比較，OIR組miR-3078的表達明顯上調，差異有統計學意義（t=-2.380，P＜0.05）；miR-140、miR-29b、miR-29c的表達明顯下調，差異也有統計學意義（t=2.638、2.323、2.415，P＜0.05）。 結論OIR小鼠模型的微小RNA表達譜中，miR-3078、miR-140、miR-29b、miR-29c的差異表達倍數≥3.0，其可能與RNV形成有關。
目的觀察糖尿病視網膜病變(DR)患者血清中微小RNA(miRNA)-195(miR-195)的表達。 方法抽取DR患者、糖尿病(DM)患者及正常受檢者靜脈血5 ml, 提取血漿總RNA, 純化。通過基因芯片篩選出在DR患者血清中具有差異表達的miRNA, 并采用逆轉錄聚合酶鏈反應(RT-PCR)驗證基因芯片檢測結果。采用生物信息學預測miRNA調控的潛在靶基因, 篩選出miR-195及其靶基因高遷移率族蛋白B1(HMGB1)。將人臍靜脈內皮細胞(HUVEC)轉染miR-195抑制物和(或)miR-195模擬物, 建立miR-195高表達和低表達細胞模型, 分為空白對照組、高表達(或)低表達組、陰性對照組。采用實時定量RT-PCR檢測轉染后細胞中HMGB1 mRNA的相對表達比率。采用蛋白免疫印跡法(Western blot)檢測轉染后細胞中HMGB1蛋白的表達。 結果基因芯片檢測結果顯示, DR組miR-195表達較DM組下調8.34倍, 較正常組下調11.47倍。RT-PCR驗證結果與基因芯片檢測結果相符。與DM組(F=0.034, t=8.057)和正常組(F=0.370, t=9.522)比較, DR組miR-195表達均明顯減弱, 差異均有統計學意義(P＜0.05)。RT-PCR檢測結果顯示, 高表達組HUVEC的HMGB1 mRNA表達較空白對照組(F=0.023, t=11.287)和陰性對照組(F=0.365, t=7.471)明顯下調, 差異有統計學意義(P＜0.05);低表達組HUVEC的HMGB1 mRNA表達較空白對照組(F=0.053, t=10.871)和陰性對照組(F=0.492, t=6.883)明顯上調, 差異有統計學意義(P＜0.05)。Western blot檢測結果顯示, 高表達組HUVEC的HMGB1蛋白表達較空白對照組(F=0.021, t=8.820)、陰性對照組(F=0.039, t=7.401)明顯下降, 差異有統計學意義(P＜0.05);低表達組HUVEC的HMGB1蛋白表達較空白對照組(F=0.186, t=10.092)、陰性對照組(F=0.017, t=12.923)明顯升高, 差異有統計學意義(P＜0.05)。 結論DR患者血清中miR-195表達明顯下調。
微小RNA（miRNA）是一類新發現的內源性非編碼小RNA，在細胞生長、發育、分化、增生、凋亡以及腫瘤的發生等生理病理過程中發揮著重要調控作用。多種miRNA在葡萄膜組織中表達，其在葡萄膜炎動物模型的發病過程中表現出一定的相關性。與葡萄膜疾病相關的miRNA基因多態性的臨床研究也有助于從遺傳學的角度了解疾病的發生發展規律，使葡萄膜疾病的預防以及具有針對性的個體化治療變成了可能。但如何確定與葡萄膜疾病關系最為密切的miRNA以及與之相對應的靶基因，之后又如何安全的將藥物運送至指定靶點還有待進一步研究。
上皮-間質轉化(EMT)是指上皮細胞在特定生理或病理情況下向間質細胞表型轉變的過程;是增生性玻璃體視網膜病變(PVR)的重要病理變化。轉化生長因子β等細胞因子通過調控下游信號通路誘導視網膜色素上皮(RPE)細胞發生EMT;微小RNA也參與調控RPE細胞發生EMT。深入了解EMT調控因素和相關信號通路,從而抑制RPE細胞發生EMT,將為PVR防治提供新的途徑。
脊髓損傷是一種全球高發病率、高致殘性和高死亡率的中樞神經系統疾病，不僅嚴重降低患者的生存質量，還給家庭、社會帶來巨大的負擔。脊髓損傷后的細胞應答和生物化學紊亂等病理改變主要依賴于特異性基因的表達或抑制。而微RNA（miRNA）在脊髓損傷后基因表達起著重要的開關作用。miRNA是真核生物中的一類由內源基因編碼的長度為18～25個核苷酸的非編碼RNA。它們在轉錄后水平調控基因表達，在脊椎動物脊髓損傷后病理調控中起重要作用。miRNA能成為調控細胞狀態和分子機制，提高脊髓損傷后功能恢復的有效治療工具。該文主要就miRNA在脊髓損傷后的表達變化及其在脊髓損傷后病理改變過程中的作用予以綜述，探討基于miRNA治療脊髓損傷的可行性，以期改善脊髓損傷的臨床預后。
目的觀察探討糖尿病視網膜病變（DR）患者血漿中miR-1470的表達變化及可能機制。方法住院治療的30例DR患者（DR組）以及在眼科門診檢查的30例糖尿病患者（DM組）、30名正常健康者（正常組）納入研究。抽取三組受檢者靜脈血5 ml，提取血漿總RNA，純化。通過基因芯片篩選出在DR患者血漿中具有差異表達的miRNA，并采用逆轉錄聚合酶鏈反應（RT-PCR）驗證基因芯片檢測結果。采用生物信息學預測miRNA調控的潛在靶基因，篩選出miR-1470及其靶基因表皮生長因子受體（EGFR）。將人視網膜內皮細胞（hREC）分為正常組（糖濃度5.5 mmol/L）、高糖組（糖濃度25.0 mmol/L）。將hREC轉染miR-1470模擬物建立miR-1470高表達細胞模型，并將其分為空白對照組、高表達組、陰性對照組。采用RT-PCR檢測細胞中miR-1470表達；采用蛋白免疫印跡法（Western blot）檢測細胞中EGFR蛋白表達。兩組間計量資料比較采用獨立樣本t檢驗，多組間計量資料比較采用方差分析, 組間計量資料兩兩比較采用多重比較。結果RT-PCR驗證結果與基因芯片檢測結果相符。DR組、DM組及正常組受檢者血漿中miR-1470表達比較，差異有統計學意義（F=63.486，P=0.049）。與DM組和正常組比較，DR組患者血漿中miR-1470表達明顯減弱，差異有統計學意義（q=111.2、73.9，P＜0.05）。高糖組hREC中miR-1470表達明顯低于正常組，差異有統計學意義（t=42.082，P=0.015）。高糖組hREC中EGFR蛋白表達明顯高于正常組，差異有統計學意義（t=?39.939，P=0.016）。空白對照組、陰性對照組、高表達組hREC中miR-1470表達（F=637.069，P=0.000）、EGFR蛋白表達比較，差異有統計學意義（F=122.908，P=0.000）。與空白對照組、陰性對照組比較，高表達組hREC中miR-1470表達明顯升高（q=329.7、328.8，P＜0.05），EGFR蛋白表達明顯降低（q=242.5、234.6，P＜0.05），差異均有統計學意義。陰性對照組與空白對照組hREC中miR-1470表達、EGFR蛋白表達比較，差異無統計學意義（q=1.5、7.9，P＞0.05）。結論DR患者血漿中miR-1470表達明顯下調，EGFR表達增加可能與其有關。
miRNA是一種性質穩定的小分子RNA，在動物、植物內大量表達，可通過與目的mRNA的3’非翻譯區堿基互補配對結合，在轉錄后水平調控靶基因的表達。某些miRNA的表達失調及其后續的異常生物學調控，與老年性黃斑變性（AMD）發生發展中的炎癥反應、氧化應激損傷、吞噬功能障礙以及異常血管生成方面有著密切聯系。鑒于miR-155、miR-125b及miR-34a的失調似乎對AMD的發生起到了更加重要的作用，這些miRNA或有望成為AMD的診斷標記物及治療新靶點。
目的觀察氧誘導視網膜病變（OIR）小鼠視網膜組織中miRNA的表達，篩選與視網膜新生血管（RNV）有關的miRNA。方法80只健康7日齡C57BL/6J小鼠隨機分為對照組和OIR組，每組40只。OIR組小鼠構建OIR模型，對照組小鼠不做任何處理。小鼠17日齡時，做視網膜熒光鋪片，熒光顯微鏡下觀察小鼠RNV發生情況；做視網膜病理切片HE染色，光學顯微鏡下計數突破視網膜內界膜的血管內皮細胞核。取視網膜組織行miRNA芯片分析，檢測對照組與OIR組之間差異表達的miRNA，并行PCR驗證。所得差異miRNA靶基因和表達譜分別進行基于基因注釋（GO）和京都基因與基因組百科全書（KEGG）的富集分析。組間兩兩比較采用獨立樣本t檢驗。結果熒光顯微鏡及光學顯微鏡觀察發現，對照組小鼠視網膜未見無灌注區、新生血管及突破視網膜內界膜的血管內皮細胞核；OIR組小鼠視網膜可見大量無灌注區、新生血管及突破視網膜內界膜的血管內皮細胞核。兩組小鼠突破視網膜內界膜的血管內皮細胞核數量比較，差異有統計學意義（t=9.025，P＜0.05）。miRNA芯片分析結果顯示，與對照組比較，OIR組有54個miRNA發生了具有統計學差異的表達。其中，上調者47個，下調者7個。miRNA差異表達倍數大于1.25倍者23個，小于0.75倍者5個。PCR驗證結果顯示，差異表達倍數最高的5個miRNA表達趨勢與芯片分析結果一致，差異均有統計學意義（P＜0.05）。GO分析共得到1112個差異有統計學意義的條目（P＜0.05）；KEGG分析共得到65個差異有統計學意義的條目（P＜0.05）。結論OIR小鼠視網膜組織中miRNA較正常小鼠視網膜組織有54個表達差異顯著的miRNA；表達差異的miRNA可能不同程度參與了RNV的發生發展。
老年性黃斑變性（AMD）是一種受環境因素和遺傳變異影響的多因素疾病，是老年人不可逆轉性視力喪失的主要原因。miRNA是一類內源性表達的非編碼RNA，通過抑制或沉默轉錄基因的表達在氧化應激、病理性新生血管生成、炎癥反應等AMD的發病機制中發揮重要作用。miRNA在易合成性、靶向性、具有相加效應等方面有獨特優點，已有大量實驗證明了miRNA在AMD中的治療潛力，其有望成為未來治療AMD的新方法。由于AMD的發病機制尚未完全闡明，今后仍需繼續深入研究AMD的發病機制、各種miRNA在AMD發生發展過程中的生物學作用及機制，并觀察其在AMD的治療效果，進而為AMD的精確防治提供更多有效的選擇。