目的探討p38蛋白激酶（p38 MAPK）在小腸移植早期排斥反應中腸黏膜上皮細胞凋亡機理中的作用。方法選用近交系SD和Wistar大鼠進行節段性小腸移植，實驗分3組： 同基因移植組（Wistar→Wistar組）、異基因移植組（SD→Wistar組）和異基因移植加環孢素A組（SD→Wistar+CsA組）。分別于移植術后1、3、5及7 d采集移植腸管行病理學檢查排斥反應，TUNEL法檢測凋亡細胞，并行Westernblotting測定p38 MAPK表達； 同時，ELISA法測定血清TNFα活性。結果SD→Wistar組腸黏膜上皮細胞發生輕、中、重度排斥反應中存在細胞凋亡，凋亡細胞數隨排斥反應的加重而增加（P＜0.01）； Wistar→Wistar組排斥反應輕微，凋亡細胞數無明顯變化（Pgt;0.05）； SD→Wistar+CsA組隨著CsA的應用，排斥反應逐漸得到控制，且凋亡細胞數也隨著減少。SD→Wistar組及SD→Wistar+CsA組的血清TNFα隨移植腸管上皮細胞凋亡的輕重而發生相應的變化（P＜0.01）。p38 MAPK在SD→Wistar組隨凋亡細胞數增加而表達加強（P＜0.01），Wistar→Wistar組p38 MAPK表達無明顯變化（Pgt;0.05），在SD→Wistar+CsA組隨凋亡細胞數而發生相應的變化（P＜0.01）。小腸移植早期排斥反應中腸黏膜上皮細胞凋亡現象與p38 MAPK呈正相關（r=0.875，P＜0.01），血清TNFα與移植腸上皮細胞凋亡呈正相關（r=0.837, P＜0.01），血清TNFα與p38 MAPK亦呈正相關（r=0.826，P＜0.01）。結論大鼠小腸移植排斥反應中存在腸黏膜上皮細胞凋亡現象，p38 MAPK參與細胞凋亡信號轉導過程并起重要作用。
目的 探討小鼠感染肺炎衣原體后肺組織TOLL 樣受體( TLR) 2 的基因表達變化及其信號傳導機制。方法 TLR4 基因缺失小鼠( C3H/HeJ) 96 只, 隨機分為對照組、模型組、SB203580 組和PDTC 組, 每組24 只。每組分別按1、4、7、14 d 各分4 個小組, 每小組6 只。對照組鼻內接種二磷酸蔗糖( 2sp) 緩沖液, 模型組和干預組均給予約4. 0 ×106 IFU/mL( 0. 04 mL) 的肺炎衣原體鼻內接種,SB203580 組和PDTC 組在接種完肺炎衣原體后分別立即腹腔注射相應的p38 蛋白激酶( p38MAPK)抑制劑SB203580 ( 100 mg/ kg ) 或核因子κB ( NF-κB) 抑制劑吡咯烷二硫氨基甲酸( PDTC)( 50 mg/kg) 。分別于接種后第1、4、7 及14 d 處死小鼠, RT-PCR 法檢測肺組織TLR2 mRNA 的表達,ELISA 法測定肺組織勻漿腫瘤壞死因子α( TNF-α) 的含量, 同時觀察肺組織病理變化。結果 小鼠感染肺炎衣原體后肺組織TLR2 mRNA 表達迅速升高, 以第4 d 和第7 d 明顯, 14 d 以后開始下降。PDTC 早期干預可在一定程度上抑制肺臟組織TLR2 mRNA 表達, 并在感染高峰期抑制明顯。SB203580 對小鼠肺組織TLR2 mRNA 表達也有明顯抑制。感染肺炎衣原體后, 肺組織TNF-α表達水平顯著高于正常組, SB203580 和PDTC 對小鼠肺組織TNF-α表達均有抑制作用, SB203580 對TNF-α的抑制作用強于PDTC。結果 小鼠感染肺炎衣原體后, 可引起TLR2 表達的增加。對p38MAPK 和 NF-κB 的干預均影響TLR2 的表達以及炎癥介質的釋放, 提示肺炎衣原體可能是通過TLR2 /MAPK 和TLR2 /NF-κB 通路導致肺部炎癥反應。
目的 通過建立小鼠肺炎衣原體感染的模型, 探討小鼠感染肺炎衣原體后, 其信號通路Toll 樣受體2( TLR2) -p38 蛋白激酶( p38MAPK) 中TLR2 mRNA 和p38MAPK mRNA 的表達變化及其信號通路抑制劑對其影響以及炎癥介質表達變化的意義。方法 使用TLR4 基因缺失小鼠( C3H/HeJ) 72 只, 隨機分為正常組、肺炎衣原體感染組、肺炎衣原體感染加特異性p38MAPK 抑制劑SB203580 干預組, 分別按接種后1、4、7 及14 d 各分4 組。正常組鼻內接種2SP 緩沖液, 感染組鼻內接種肺炎衣原體; 干預組在感染肺炎衣原體后即在腹腔注射SB203580, 分別在預定的時間處死, 取肺臟組織應用逆轉錄-聚合酶鏈反應( RT-PCR) 半定量方法檢測肺組織TLR2 mRNA 和p38MAPK mRNA的表達變化, 用酶聯免疫吸附法( ELISA) 測定TNF-α的含量。結果 與正常組比較, 感染肺炎衣原體后小鼠肺組織TLR2 mRNA 和p38MAPK mRNA 表達迅速升高, 以第4 d 和第7 d 最明顯, 其中TLR2mRNA 在第7 d 表達量明顯高于正常組[ ( 7. 24 ±1. 78) mg/L 比( 0. 64 ±0. 14) mg/L] , p38MAPK mRNA 在第4 d 表達量明顯高于正常組[ ( 9. 267 ±1. 813) mg/L 比( 3. 734 ±0. 946) mg/L] , 14 d 以后感染開始減輕。其相應的肺組織TNF-α含量表達也升高, 并明顯高于正常組, 以第4 d 為高峰( 77. 29 ±9. 66) pg/mg。給予SB203580 抑制劑后TLR2 mRNA 和p38MAPK mRNA 表達明顯減弱, 以第4 d 和第7 d 明顯, 其中TLR2 mRNA 在第7 d 為( 0. 269 ±0. 09) mg/L, p38 MAPK mRNA 在第4 d為( 0. 002 ±0. 001) mg/L, 其相應的肺組織TNF-α含量表達與感染組比較也明顯降低, 以第4 d( 25. 76 ±3. 49) pg/mg 明顯。結論 小鼠感染肺炎衣原體后, 可引起TLR2-p38 MAPK 信號通路的活化, 引起細胞因子的釋放。SB203580 對TLR2-p38 MAPK 信號通路有明顯的抑制作用, 并能抑制炎癥介質的釋放, 表明肺炎衣原體感染與TLR2-p38MAPK 的信號通路密切相關。
目的 探討17b-雌二醇（17b-E2）對兔在體缺血/再灌注（I/R）心肌的急性保護作用及其相關機制。方法 通過結扎冠狀動脈左前降支建立兔在體心肌I/R模型（心肌缺血40 min，再灌注3 h）；采用抽簽法將24只健康雄性新西蘭白兔隨機分為兩組（每組12只），對照組：心肌缺血前靜脈注入1ml乙醇；實驗組：心肌缺血前靜脈注入10 μg/kg 17b-E2。用酶聯免疫吸附測定（ELISA）法分別于心肌缺血前、缺血40 min、再灌注1 h、2 h和3 h不同時間點檢測血清中腫瘤壞死因子-α（TNF-α）、白細胞介素-6(IL-6)的含量；蛋白印跡法（Western blotting）測定心肌p38絲裂原活化蛋白激酶（MAPK）的表達；脫氧核苷酸轉移酶介導的生物素脫氧尿嘧啶核苷酸缺口末端標記(TUNEL)法檢測心肌細胞凋亡。 結果 缺血過程中，實驗組TNF-α較對照組降低（F=0.007,P=0.001），而IL-6變化不明顯（F=0.616,P=0.095）; 再灌注過程中，實驗組TNF-α和IL6的含量明顯低于對照組（Plt;0.01）；同時實驗組p38MAPK的活性和心肌凋亡指數均明顯低于對照組(45.07%±2.73% vs. 61.25%±2.41%，t＝-15.398，P=0000；11.21%±3.85% vs. 22.02%±4.49%, t＝-6.332，P=0.000)。 結論 17bE2通過抑制炎癥反應及抗凋亡途徑減輕心肌I/R損傷，其作用可能是通過對p38MAPK的抑制而實現的。
目的 探討p38絲裂素活化蛋白激酶(p38 mitogen-activatedprotein kinase,p38MAPK)及其上游信號分子MAPKKs (mkk3和mkk6)基因，在不同胎齡胎兒皮膚和出生后機體皮膚組織中表達的變化，及其可能的生物學意義。方法 用病理學技術檢測不同發育時期皮膚的結構特征后，提取18例不同胎齡（13～32周）的胎兒皮膚和6例出生后機體皮膚組織(作為對照)的總RNA，分離mRNA，用逆轉錄-聚合酶鏈反應(reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)方法檢測3種基因在不同組織中的表達規律。結果 p38MAPK, mkk3和mkk6基因在不同發育階段的皮膚組織中都有表達。在早期妊娠胎兒的皮膚組織中，這三種基因表達較強，隨著胎兒的生長發育，皮膚組織內這三種基因表達逐漸減弱。在出生后機體的皮膚細胞中，p38MAPK、mkk3和mkk6基因的表達量分別為妊娠早期皮膚的39.6%、63.5%和54.5%，明顯減弱（Plt;0.01）。結論 p38MAPK、mkk3和mkk6基因在不同發育階段人皮膚組織內都有表達，顯示細胞外信號引起的p38MAPK信號通路可能對皮膚的發生、結構功能的維持以及傷后修復十分重要。在早期妊娠胎兒皮膚中p38MAPK及其上游信號分子MAPKKs基因的高表達可能是胎兒皮膚組織細胞快速增殖、皮膚創面無瘢痕愈合的機制之一，但深層次機制還需進一步研究。
目的 研究p38絲裂原活化蛋白激酶（p38 mitogen-activated protein kinase，p38MAPK）在重癥急性胰腺炎（severe acute pancreatitis，SAP）大鼠肺組織中的表達情況，并初步探討p38MAPK與SAP肺毛細血管內皮屏障損傷的關系。方法 將40只健康雄性SD大鼠隨機（隨機數字表法）分為假手術（SO）組和SAP組，SAP組又再分為3、6、12及24h4個時間點組，共5組，每組8只。采用胰膽管逆行注射5%牛磺膽酸鈉的方法建立SAP大鼠模型。采用HE染色方法觀察大鼠肺和胰腺組織的病理學改變； 采用ELISA法檢測血清腫瘤壞死因子-α（TNF-α）和白細胞介素-1β（IL-1β）水平； 采用免疫組化染色方法檢測肺組織中磷酸化p38（p-p38）蛋白和水通道蛋白1（AQP1）的表達水平； 采用實時定量熒光PCR法（real-time PCR）檢測肺組織中AQP1 mRNA的表達水平。結果 SAP各時間點組大鼠肺組織充血水腫，炎癥細胞浸潤；胰腺組織可見大片壞死，部分腺葉結構模糊甚至消失；血清TNF-α和IL-1β水平均較SO組高（P＜0.05）。SO組大鼠肺組織中p-p38蛋白僅有微量表達，而在SAP 3h組，p-p38蛋白的表達就明顯上調，在6 h時達高峰，24h時仍高于SO組（P＜0.05）。SAP各時間點組大鼠肺組織中AQP1 mRNA及其蛋白的表達水平均較SO組下降（P＜0.05），并隨著時間的推移而逐漸下降； SAP組大鼠AQP1 mRNA的表達與TNF-α、IL-1β及p-p38蛋白之間均存在負相關關系（r=-0.87，P＜0.05；r=-0.88，P＜0.05；r=-0.78，P＜0.05）。結論 肺組織中AQP1蛋白表達的下調是SAP肺毛細血管內皮屏障損傷的重要原因之一，其可能與p38MAPK的激活及炎癥因子的過度釋放有關。
目的探討p38絲裂原激活蛋白激酶(p38 MAPK)信號通路在脂多糖(LPS)誘導RAW264.7細胞表達可溶性髓樣細胞觸發受體1(sTREM-1)中的作用。 方法培養小鼠巨噬細胞株RAW264.7,采用相同濃度的LPS在不同時間誘導RAW264.7細胞,應用Western blot法分別檢測p38 MAPK與磷酸化p38 MAPK (p-p38MAPK)蛋白表達水平,RT-PCR法檢測p38 MAPK mRNA表達水平,酶聯免疫吸附(ELISA)法檢測細胞培養上清液中sTREM-1表達水平。用不同濃度p38 MAPK特異性抑制劑SB203580處理細胞,觀察上述指標的變化。 結果LPS可呈時間依賴性誘導RAW264.7細胞p-p38 MAPK和p38 MAPK mRNA的表達;SB203580可呈濃度依賴性抑制p-p38 MAPK和p38 MAPK mRNA的表達;SB203580阻斷p38 MAPK信號轉導通路后,LPS對sTREM-1表達的誘導作用受到顯著抑制,并且具有劑量依賴性。 結論LPS通過p38 MAPK信號通路誘導RAW264.7細胞表達sTREM-1。
目的探討miR-33s是否能夠通過靶向p38 MAPK負性調節LPS誘導的炎癥反應。 方法體外培養人單核細胞株THP-1,分別將miR-33s的擬似物(mimic,25 nmol/L)和miR-33s的抑制劑(inhibitor,25 nmol/L)轉染至THP-1細胞24 h。用濃度10.0 ng/mL的LPS誘導轉染后的THP-1細胞24 h,分別采用Realtime RT-PCR和Western blot方法檢測細胞miR-33s及p38MAPK蛋白表達,ELISA法檢測THP-1細胞培養上清液中白細胞介素1β(IL-1β)、腫瘤壞死因子α(TNF-α)、白細胞介素6(IL-6)的分泌量。 結果miR-33s mimic轉染組p38 MAPK蛋白表達明顯減少(P<0.05),IL-1β、TNF-α、IL-6含量顯著降低(P<0.05)。miR-33s inhibitor轉染組p38MAPK蛋白表達明顯增加(P<0.05),IL-1β、TNF-α、IL-6含量顯著上升(P<0.05)。 結論LPS能誘導THP-1細胞釋放IL-1β、TNF-α、IL-6;miR-33s mimic抑制炎性細胞因子的分泌。miR-33s inhibitor促進促炎性細胞因子的分泌;miR-33s可能通過靶向結合p38 MAPK的3'末端非編碼區來發揮它的負性調節炎癥作用。
目的 探討急性肺損傷炎癥狀態下谷胱甘肽硫轉移酶M5(GSTM5)對人支氣管上皮細胞16HBE炎癥水平的影響及其可能的分子機制。 方法 腫瘤壞死因子α(TNF-α；10 ng/mL)誘導16HBE，建立急性肺損傷細胞炎癥模型，分組處理如下：空白對照組、TNF-α組(TNF-α)、GSTM5組(GSTM5+TNF-α)、陰性對照組(陰性對照質粒+TNF-α)。GSTM5組及陰性對照組分別采用脂質體Lipofectamine2000轉染導入GSTM5-GFP質粒及陰性對照質粒；酶聯免疫吸附試驗檢測各組細胞上清液中IL-6、IL-8、IL-10的含量，反轉錄聚合酶鏈反應檢測NF-κB mRNA表達水平，蛋白質印跡法檢測NF-κB、P-NF-κB、p38、P-p38蛋白表達水平。 結果 熒光顯微鏡檢查證實成功構建GSTM5-GFP真核表達質粒并轉染成功。TNF-α誘導后，細胞培養上清液中IL-6、IL-8、IL-10濃度較空白對照組升高(P＜0.05)，GSTM5組細胞上清液中IL-6、IL-8、IL-10均較TNF-α組降低(P＜0.05)，差異有統計學意義；同時，TNF-α刺激后各組細胞總NF-κB mRNA轉錄水平、NF-κB、p38磷酸化水平均較空白對照組增高(P＜0.05)，而GSTM5組較TNF-α組與陰性對照組降低(P＜0.05)。 結論 過表達GSTM5可下調TNF-α誘導的人支氣管上皮細胞16HBE炎癥水平，其機制與GSTM5抑制p38MAPK、NF-κB磷酸化密切相關。
目的探討在成骨誘導環境下，辛伐他汀對BMSCs成骨分化中晚期的作用和對p38MAPK信號通路的影響。 方法取20只雌性SD大鼠雙側股骨和脛骨骨髓，全骨髓培養法分離培養BMSCs并傳代，取第2代細胞進行實驗。實驗分為5組，對照組（CM組）：完全培養基培養；辛伐他汀組（SIM組）：含終濃度為1×10-7 mol/L辛伐他汀的完全培養基培養；成骨誘導培養基組（OM組）：含10 mmol/L β甘油磷酸鈉和50 μg/mL抗壞血酸的成骨誘導培養基培養；辛伐他汀和成骨誘導培養基組（OM+SIM組）：含終濃度為1×10-7 mol/L辛伐他汀成骨誘導培養基培養；阻斷劑組（OM+SIM+SB組）：先用p38MAPK信號通路阻斷劑SB203580干預30 min后，再采用含終濃度為1×10-7 mol/L辛伐他汀成骨誘導培養基培養。MTT法檢測CM組和SIM組細胞活性；ELISA法檢測OM組及OM+SIM組培養7、14 d細胞ALP含量。應用實時定量PCR和Western blot方法檢測OM組和OM+SIM組第21、28天開始成骨誘導培養1、12、24 h后，骨鈣素(osteocalcin，OCN)蛋白和mRNA表達水平，從而確定辛伐他汀作用最佳時間點，隨后檢測該時間點OM組、OM+SIM組和OM+SIM+SB組p38、磷酸化p38（phospho-p38，p-p38）蛋白表達，計算p-p38/p38。 結果MTT檢測示各時間點，SIM組與CM組吸光度（A）值比較差異無統計學意義（P＞0.05），提示辛伐他汀對BMSCs活性和增殖能力無明顯影響。與OM組相比，OM+SIM組7、14 d ALP含量均明顯增高，且兩組組內7 d ALP含量均高于14 d，差異均有統計學意義（P＜0.05）。實時定量PCR及Western blot檢測示，第21、28天開始成骨誘導培養后，各組OCN mRNA及蛋白在12 h時表達量高于其他時間點（P＜0.05），且OM+SIM組明顯高于OM組（P＜0.05）；確定辛伐他汀誘導成骨干預的最佳起效時間為12 h。阻斷劑干預后，12 h時OM+SIM+SB組p-p38/p38明顯低于其他兩組（P＜0.05），OM+SIM組高于OM組（P＜0.05）。 結論辛伐他汀的最佳起效時間為給藥后12 h，其可以提高BMSCs成骨分化中晚期OCN蛋白、mRNA和p-p38蛋白表達量。