目的探討神經生長分化相關miR-124a和miR-9在癲癇發生各時間點上表達水平的動態變化 方法將56只Sprague-Dawley大鼠隨機分為2組:正常對照組(n=6)、實驗組氯化鋰-匹羅卡品誘導癲癇持續狀態(SE)致癇大鼠組(n=50)。觀察SE發作時的動物行為學改變, 并行長程視頻監測, 觀察慢性期自發性癲癇的發作情況。選取SE后1、7、14和28 d為主要研究時間點(每組6只), 適時處死動物、獲取組織標本。同時處死、獲取正常對照組(n=6)大鼠的組織標本。提取各時點上大鼠海馬腦組織中總RNA, 應用熒光定量qPCR檢測大鼠海馬腦組織中miR-124a和miR-9表達, 明確其在上述各研究時點上的表達水平, 統計學分析miR-124a和miR-9在各研究時點上的表達差異和動態變化。 結果實驗組(n=50)大鼠中有40只進入SE。與正常對照組比較, miR-124a的表達水平在SE后1d變化不明顯(P＞0.05), 但在其后7、14、28 d呈現顯著下降趨勢, 與對照組比較有統計學意義(P＜0.05), 該趨勢隨時間點延長愈加明顯。與正常對照組比較, miR-9的表達水平在SE后1、7、14和28d呈現顯著升高趨勢(P＜0.05), miR-9的表達上調在SE后7d存在波動, 但其總體呈上升趨勢, 并隨時間點延長愈加顯著。 結論神經生長分化相關miR-124a和miR-9在SE后大鼠海馬癲癇發生中呈現表達下調或上調的動態變化, 推測miR-124a和miR-9表達動態改變與癲癇發生機制有關, 可能參與了SE后海馬神經再生和重塑。
力學響應microRNA（miRNA）是一類對力學載荷敏感或者能產生響應的miRNA，在施加力學載荷以后，其表達量發生變化，并影響所調控的mRNA、蛋白質表達水平。迄今為止，已經在一些生理、病理組織或者器官中發現力學響應miRNA。然而，這些發現普遍具有局限性，尚不能很好地指導臨床實踐。基于此，本文對近幾年力學響應miRNA的研究成果予以總結，以期為臨床應用、后續研究提供指南。
目的探討miRNA-155/PU.1信號通路阻滯對骨髓來源樹突狀細胞（DCs）成熟及其對應用于大鼠小腸移植中的免疫功能的影響。 方法利用貼壁法培養誘導DCs，針對miRNA-155/PU.1信號通路中關鍵轉錄因子PU.1基因設計并合成3對PU.1 siRNA（PU.1沉默組、陰性對照組及對照組），用脂質體法轉染細胞，并篩選一對高沉默效率PU.1 siRNA。流式細胞術分析PU.1沉默組、陰性對照組及對照組細胞表面CD80、CD86及主要組織相容性復合體（MHC）-Ⅱ的表達；ELISA法檢測上清液中IL-10及IL-12p70的水平；混合淋巴細胞反應檢測對同種異體T淋巴細胞的增殖作用；在大鼠小腸移植前7 d經受體尾靜脈等量注射3組細胞，移植后觀察各組受體存活情況及移植物病理情況。 結果①DCs表面分子CD80、CD86和MHC-Ⅱ表達率在PU.1沉默組分別為（27.0±5.6）%、（23.6±4.8）%及（36.8±6.8）%，陰性對照組分別為（74.0±9.4）%、（76.5±8.7）%及（87.8±11.3）%，PU.1沉默組均分別明顯低于陰性對照組（P＜0.05）。②PU.1沉默組IL-10水平較陰性對照組明顯升高（P＜0.05），IL-12p70則明顯降低（P＜0.05）。③PU.1沉默組DCs刺激同種異體T淋巴細胞增殖也較陰性對照組明顯降低（P＜0.05）。④將PU.1沉默組DCs術前注入受體行大鼠小腸移植后，受體平均存活時間為（14.3±3.3）d，明顯長于陰性對照組的（7.8±1.5）d（P＜0.05）和對照組的（8.0±2.5）d（P＜0.05），且術后5 d時移植物病理顯示移植腸組織輕度淋巴細胞浸潤和絨毛水腫。 結論體內外實驗表明，miRNA-155/PU.1信號通路阻滯的DCs成熟度明顯受到抑制，并能穩定發揮誘導受體特異性免疫耐受的作用。
目的探討miRNA219-5P（miR219-5P）調控Smad4在TGF-β1誘導人肌腱成纖維細胞（tendonderived fibroblasts，TDFs）纖維化過程中的作用。 方法取患者自愿捐贈的肌腱組織分離培養TDFs，取第3代細胞進行實驗。化學合成miR219-5P類似物（mimics）、阻遏物（inhibitor）及陰性對照序列，分別轉染TDFs 48 h后，采用實時定量PCR及Western blot法分別檢測miR219-5P基因及Smad4蛋白表達情況；以正常細胞作為空白對照。信息學軟件預測miR219-5P與Smad4基因3’UTR區結合位點，構建Smad4預測基因3’UTR-PGL3重組質粒，構建野生型及突變型報告基因表達載體，并通過熒光素酶報告基因實驗進行靶位驗證。取正常及轉染后TDFs，采用TGF-β1誘導細胞發生纖維化，于培養24、48、72 h采用細胞計數試劑盒8法檢測細胞增殖活性變化，72 h時采用Western blot法檢測纖維化相關蛋白指標。 結果miR219-5P mimics轉染TDFs可明顯上調miR219-5P表達、下調Smad4蛋白表達，而miR219-5P inhibitor抑制細胞內miR219-5P表達、增加Smad4蛋白表達，與空白對照組比較差異均有統計學意義（P<0.05）。熒光素酶實驗顯示，與pGL3-WT-Smad4轉染組比較，pGL3-WT-Smad4+mimics轉染組細胞內熒光素酶活性降低、pGL3-WT-Smad4+inhibitor轉染組活性增強（P<0.05）；而pGL3-MT-Smad4+mimics轉染組、pGL3-MT-Smad4+inhibitor轉染組組間比較無明顯變化（P>0.05）。與空白對照組比較，TGF-β1誘導培養72 h后細胞增殖活性明顯增強（P<0.01），同時上調細胞纖維化相關蛋白指標的表達（P<0.01）；與直接誘導組比較，miR219-5P過表達且誘導組TDFs細胞增殖活性和纖維化蛋白指標升高趨勢得到抑制，而miR219-5P表達抑制且誘導組細胞增殖活性和纖維化蛋白指標則進一步增強，差異有統計學意義（P<0.01）。 結論miR219-5P可通過抑制其靶基因Smad4表達，顯著抑制TGF-β1誘導TDFs纖維化。
目的探討miRNA-1在大鼠早期失神經支配后骨骼肌中不同時段的表達，以及被動運動對失神經骨骼肌miRNA-1表達及成肌細胞分化的影響。 方法取SD大鼠27只，體質量（200±10） g，隨機分為假手術組（A組，n=3）、失神經組（B組，n=12）和失神經被動運動組（C組，n=12）。各組大鼠顯露右側坐骨神經并游離，B、C組切除坐骨神經長約1 cm，A組僅顯露游離神經不切除；術后1 d起，對C組大鼠右后肢行被動屈伸運動。A組于術后6 h，B、C組分別于術后3、7、14、28 d，采用頸椎脫臼法各處死3只大鼠，測量腓腸肌濕重比以及行HE染色觀察腓腸肌細胞直徑，對肌萎縮情況進行綜合評價；采用RT-PCR法檢測miRNA-1、肌分化因子（myocyte differentiationfactor，MyoD）基因表達，免疫組織化學染色觀察MyoD蛋白表達。 結果B、C組腓腸肌失神經后均有不同程度萎縮，隨失神經時間延長，肌纖維排列逐漸紊亂，肌細胞直徑逐漸減小，失去正常的結構形態。B、C組術后各時間點腓腸肌濕重及肌細胞直徑均小于A組（P<0.05）；B、C組間除術后3 d腓腸肌濕重比以及術后3、28 d肌細胞直徑比較差異無統計學意義（P>0.05）外，其余各時間點C組均大于B組（P<0.05）。術后隨時間延長，B、C組miRNA-1和MyoD基因相對表達量呈逐漸升高趨勢，但各時間點均顯著低于A組（P<0.05）；B、C組間除術后3 d比較差異無統計學意義外（P>0.05），術后7、14、28 d C組miRNA-1和MyoD基因相對表達量均高于B組（P<0.05）。免疫組織化學染色示A、B、C組各時間點MyoD均呈陽性表達，A組陽性表達少于B、C組；B、C組隨失神經時間延長，陽性表達逐漸增多，且C組各時間點陽性表達均多于B組。相關性分析結果示miRNA-1、MyoD分別與腓腸肌濕重比在3、7 d時無相關性（P>0.05），14、28 d時成正相關（P<0.05）；各時間點MyoD與miRNA-1基因相對表達量成正相關（P<0.05）。 結論被動運動可能通過促進miRNA-1的表達，以促進肌細胞分化發揮防止失神經骨骼肌萎縮的作用。
結直腸癌是嚴重威脅人類健康的惡性腫瘤之一，隨著對微小RNA（miRNAs）研究的不斷深入，越來越多的證據表明多種miRNAs參與了結直腸癌的發生、發展，并且可能作為其診斷、評估預后及復發轉移的生物學標志。研究發現，miRNA-143/miRNA-145在多種腫瘤中的表達都發生了下調，能起到腫瘤抑制作用，其在結直腸癌中的研究也已較成熟。本文就miRNA-143/miRNA-145與結直腸癌的研究進展做一綜述，為今后的結直腸癌機制和靶向治療研究提供參考。
目的 探討 miRNAs 對胰腺癌（pancreatic cancer）的診斷價值。 方法 計算機檢索 PubMed、Scopus、Web of Science、CBM、CNKI、WanFang Data 和 VIP 數據庫，搜集 miRNAs 診斷胰腺癌的診斷性試驗，檢索時限均從建庫至 2015 年 12 月 31 日。由 2 位研究者獨立篩選文獻、提取資料，并采用 QUADAS-2 工具評價納入研究的偏倚風險后，采用 MetaDiSc 1.4 及 Stata 12.0 軟件進行 Meta 分析。 結果 共納入 40 篇文獻，109 個研究。miRNAs 診斷胰腺癌的Sen合并=0.81 [95%CI（0.80，0.82） ]、Spe合并=0.77 [95%CI（0.75，0.78） ]、+LR合并=3.15 [95%CI（2.78，3.58） ]、–LR合并=0.27[95%CI（0.24，0.31） ]、DOR合并=13.58 [95%CI（10.89，16.94） ]、AUC=0.86 [95%CI（0.84，0.88） ]。診斷準確性白種人優于亞洲人（AUC=0.89vs. 0.84），聯合 miRNAs 優于單一 miRNA（AUC=0.91vs. 0.84）。 結論 現有證據表明，miRNAs 對胰腺癌具有一定診斷價值，尤其是聯合 miRNAs 診斷。但受納入研究質量的限制，上述結論仍需開展高質量的研究予以驗證。
目的 乙型肝炎病毒 X（hepatitis B virus X protein，HBx）蛋白通過調控蛋白編碼基因表達而廣泛參與人原發性肝細胞癌（簡稱肝癌）的發生和進展。本研究將 HBx 的調控功能拓展到非編碼 RNA 領域，探討 HBx 能否調控宿主肝癌細胞內 microRNA（miRNA）的表達，進而參與肝癌細胞生長及惡性轉化。 方法 利用高通量芯片分析及實時定量聚合酶鏈反應（quantitative real time polymerase chain reaction，qRT-PCR）鑒定 HBx 在肝癌細胞內誘發的 miRNA 表達變化。通過系列蛋白和 mRNA 表達分析，細胞周期及凋亡實驗以及螢光素酶報告實驗來檢測 miR-16 家族表達抑制后 HepG2 肝癌細胞的生物學變化。 結果 芯片分析結果顯示，HBx 在 HepG2 細胞內誘發了大量的 miRNAs 表達變化，其中 miR-16 家族的低表達能在 HepG2、SK-HEP-1 及 Huh7 肝癌細胞中得到重復。同時，HBx 顯著上調 miR-16 家族的靶基因 CCND1 的表達。c-myc 介導了 HBx 相關 miR-16 家族沉默，外源表達的 miR-16/15a 能通過阻滯細胞周期進展和誘導凋亡而抑制 HepG2-hbx（穩定表達 HBx）細胞的增殖、克隆形成及非貼壁生長能力。反之，沉默 miR-16 表達能促進 HepG2 細胞的周期進展和生長。 結論 HBx 能在體外改變肝癌細胞的 miRNA 表達譜，尤其是沉默 miR-16 家族表達。c-myc 高表達介導了 HBx 下調 miR-15a/16 的過程且是 HBx 促進 HepG2 細胞惡性轉化所必須的。因此，miR-16 家族可能成為 HBV 相關肝細胞癌的治療靶點。
目的 總結近年來 miRNA 在調控脂肪干細胞（adipose-derived stem cells，ADSCs）分化中的研究進展。 方法 查閱近年來與 miRNA 和 ADSCs 分化調控相關的文獻，詳細分析其調節機制，并進行綜述。 結果 在 ADSCs 分化過程中，miRNA 的表達會改變，并且 miRNA 可通過調節細胞分化相關的信號通路，調控 ADSCs 定向分化為脂肪細胞、成骨細胞、軟骨細胞、神經細胞、肝細胞等。 結論 利用 miRNA 對 ADSCs 分化的調控作用，構建出符合需求的組織工程種子細胞，用于臨床分子靶向治療和干細胞治療。
目的 檢測肝細胞肝癌（簡稱肝癌）患者血清中 miR-483-5p 水平并探討其對肝癌的診斷價值。 方法 收集 2010 年 1 月至 2012 年 1 月期間蘭州大學第一醫院收治的 112 例肝癌患者術前 1 d 及術后 30 d 以及 85 例慢性乙型病毒性肝炎（簡稱慢性乙肝）患者和 56 例健康對照人群的清晨空腹血清樣本。應用實時定量熒光 PCR 法檢測血清中 miR-483-5p 和 miR-500a 水平，按常規電化學法檢測血清中甲胎蛋白（AFP）水平，應用操作者工作特征（ROC）曲線分析血清中 miR-483-5p、miR-500a 及 AFP 水平用于肝癌的診斷價值。 結果 肝癌患者血清中 miR-483-5p 和 miR-500a 水平均明顯高于慢性乙肝患者（ P<0.000 1）和健康對照人群（P<0.000 1），但是其在慢性乙肝患者和健康對照人群間比較差異均無統計學意義（均P>0.05）。肝癌患者術后 30 d 時血清中 miR-483-5p 水平較術前明顯下降（P<0.000 1）。miR-483-5p、miR-500a、AFP 及 miR-483-5p 與 AFP 聯合診斷肝癌的 ROC 曲線下面積（AUC）分別是 0.74、0.66、0.81 及 0.92，當 miR-483-5p 臨界值為 2.842 時的診斷靈敏度與特異度分別為 74% 和 66%，當 miR-500a 的臨界值為 1.830 時的診斷靈敏度和特異度分別是 74% 和 51%，當 AFP 的臨界值為 20 μg/L 時的診斷靈敏度與特異度分別為 78% 和 70%，當 miR-483-5p 與 AFP 聯合使用的臨界值為 3.78 時的診斷靈敏度和特異度分別為 81% 和 83%。miR-483-5p 診斷 AFP 陽性（AFP>20 μg/L）和 AFP 陰性（0～20 μg/L）肝癌患者的AUC 值分別為 0.78 和 0.83，二者的靈敏度和特異度分別為0.76、0.68和0.79、0.72。 結論 miR-483-5p 在肝癌患者的血清中呈高水平，其診斷肝癌有一定準確性，與 AFP 聯合可以提高其診斷價值，并且其對 AFP 陰性肝癌患者的診斷具有重要的補充作用。