目的 富血小板血漿（platelet-rich plasma，PRP）具有刺激椎間盤細胞增殖、促進細胞外基質合成代謝及抑制纖維環細胞凋亡等作用。通過觀察自體PRP干預兔早期椎間盤退變，明確其治療效果，為臨床應用提供理論依據。 方法取健康成年新西蘭大白兔45只，體重2.5～3.0 kg，雌雄不限；隨機分為實驗組、對照組、假手術組（n=15）。取實驗組兔耳中央動脈血，采用Landesberg等方法制備PRP，同時對全血及PRP行血小板計數。實驗組及對照組采用纖維環針刺法建立L4、5及L5、6椎間盤退變模型，造模2周后于L4、5及L5、6椎間隙分別注入100 ?L自體PRP及100 ?L PBS液；假手術組僅分離暴露椎間盤，不作處理。觀察實驗動物造模后一般情況；造模2周及干預1、2周時各組取5只實驗動物行腰椎MRI、HE染色及Ⅱ型膠原免疫組織化學染色觀察，腰椎MRI退變程度分級及Ⅱ型膠原陽性積分吸光度（IA）值檢測。 結果兔PRP中血小板計數約為外周血的4.92倍。實驗動物均存活至實驗完成。造模2周時，與假手術組相比，實驗組和對照組椎間盤信號降低，髓核細胞減少，基質退變，Ⅱ型膠原表達降低。腰椎MRI退變程度分級及Ⅱ型膠原陽性IA值結果顯示，各時間點實驗組、對照組與假手術組相比差異均有統計學意義（P lt; 0.05），干預1、2周時，實驗組MRI退變程度分級顯著低于對照組 （P lt; 0.05），但仍與假手術組有差異（P lt; 0.05）；干預1、2周時，實驗組髓核細胞及軟骨樣基質較對照組增多，基質纖維化程度輕，Ⅱ型膠原表達明顯強于對照組（P lt; 0.05）。 結論椎間盤內注射自體PRP可終止甚至一定程度逆轉兔早期椎間盤退變，可能與PRP含有多種生長因子調控細胞功能、改善組織微環境、促進組織再生修復有關。
目的?探討生長分化因子7（growth differentiation factor 7，GDF-7）在體外能否促進BMSCs向肌腱細胞分化，為改善BMSCs修復肌腱療效提供依據。?方法?采用密度梯度離心法從綠熒光大鼠骨髓組織中分離培養BMSCs，通過成骨、成脂和成軟骨分化鑒定其多向分化能力。取第3代BMSCs根據成肌腱培養液中加入不同濃度GDF-7（0、12.5、25.0、50.0 ng/mL），分為A、B、C、D組。體外誘導培養2周后，實時熒光定量PCR檢測各組scleraxis、tenomodulin、tenascin C和Ⅰ型膠原mRNA表達，免疫細胞化學染色觀察tenomodulin、tenascin C和Ⅰ型膠原蛋白表達，Western blot法檢測A、C組tenomodulin蛋白的表達。?結果?經鑒定，分離培養的BMSCs具有成骨、成脂和成軟骨分化的多向分化能力。實時熒光定量PCR檢測結果示，B、C、D組的tenomodulin mRNA表達分別較A組增加了2.85、3.41、3.07倍（P lt; 0.05），scleraxis mRNA表達增加了2.13、1.50、2.56倍（P lt; 0.05），tenascin C mRNA表達增加了2.45、2.86、1.88倍（P lt; 0.05），但B、C、D組間比較差異均無統計學意義（P gt; 0.05）。B、C組Ⅰ型膠原mRNA表達較A組分別增高了1.92和2.45倍（P lt; 0.05）；D組較A組有所增高，但差異無統計學意義（P gt; 0.05）。免疫細胞化學染色示，B、C、D組均有tenomodulin、tenascin C 和Ⅰ型膠原蛋白表達，而A組均未表達；除C組Ⅰ型膠原表達高于B、D組外，其他蛋白表達B、C、D組間無明顯差異。Western blot檢測示C組比A組有更高的tenomodulin蛋白表達。?結論?GDF-7在體外能促進大鼠BMSCs向肌腱細胞分化。
目的介紹保守治療、內固定、人工關節置換術和多學科綜合診療（multidisciplinary team，MDT）模式等治療老年股骨頸骨折的研究進展。方法廣泛查閱國內、外近年相關文獻，對多種老年股骨頸骨折治療方法、新治療模式的特點和應用進行總結分析。結果老年非移位型股骨頸骨折應手術治療，保守治療繼發移位風險高。移位型骨折則應盡早進行手術，人工半髖、全髖關節置換術后患者的遠期功能結果沒有差別。人工半髖關節置換術中出血量少、手術時間短，適合基礎情況不佳的高齡患者；人工全髖關節置換術適合基礎情況較好、對生活質量要求較高的老年患者。MDT 可有效減少患者術前等待時間和住院時間、降低內科并發癥發生率、改善患者營養狀況和降低患者死亡率。結論內固定、人工關節置換術等術式和 MDT 新模式用于老年股骨頸骨折的治療均取得了顯著成果。
目的探討BMP-2體外誘導人跟腱來源肌腱干細胞（human Achilles tendon-derived stem cells，hATDSCs）成軟骨分化的作用。 方法無菌條件下取急性跟腱斷裂患者自愿捐贈的跟腱組織，膠原酶消化獲得有核細胞；以500個/cm2細胞密度接種，細胞貼壁呈克隆樣生長，混合培養獲得原代hATDSCs；體外傳代培養至第3代，流式細胞儀檢測hATDSCs免疫表型；油紅O染色、茜素紅染色及番紅O/快綠染色分別鑒定hATDSCs成脂、成骨及成軟骨分化能力。取第3代細胞體外三維培養成微球后分為兩組，實驗組用重組人BMP-2（recombinant human BMP-2，rhBMP-2）干預，對照組不進行干預。3周后行微球大體觀察；組織學切片行HE染色、番紅O/快綠染色、Ⅱ型膠原免疫組織化學染色觀察；實時熒光定量PCR檢測成軟骨特異性基因SOX9、Ⅱ型膠原和軟骨聚集蛋白多糖（Aggrecan）表達。 結果原代hATDSCs體外培養呈克隆樣集落生長；傳代后以紡錘形、成纖維樣細胞生長，形態均一。hATDSCs陽性表達MSCs特異性表面標志CD44、CD90、CD105，陰性表達CD34、 CD45和CD146。多向分化潛能鑒定示hATDSCs成脂誘導3周油紅O染色陽性，成骨誘導4周茜素紅染色陽性，成軟骨誘導3周番紅O/快綠染色陽性。rhBMP-2誘導hATDSCs 3周，實驗組微球形成，體積顯著大于對照組；HE染色、番紅O/快綠染色、Ⅱ型膠原免疫組織化學染色均呈陽性，實時熒光定量PCR檢測示SOX9、Ⅱ型膠原和Aggrecan mRNA表達顯著高于對照組（P lt; 0.05）。 結論體外BMP-2可促進hATDSCs成軟骨分化和蛋白聚糖合成增加，為研究慢性腱病組織病理學變化提供細胞生物學依據。
體外分離培養豬滑膜源性MSCs（synovium-derived MSCs，SMSCs），探討其在體外多向分化潛能。 方法 2 月齡長楓雜交豬3 頭，雌雄不限，體重8 ～ 10 kg。取豬膝關節滑膜組織分離SMSCs 并行原代及傳代培養，待第3 代SMSCs 長滿培養皿后，吸去基礎培養液，分別加入特定培養液進行成軟骨、成骨、成脂誘導分化，作為實驗組；以基礎培養液培養作為對照組。成軟骨誘導21 d 后行甲苯胺藍染色、免疫組織化學染色和實時熒光定量 PCR 檢測；成骨誘導10 d 后行ALP 染色檢測，21 d 后行茜素紅染色檢測；成脂誘導21 d 后行油紅O 染色檢測。 結果 SMSCs 培養24 h后細胞形態細長或呈多角形；48 h 后細胞數量增多；72 h 后可見大量紡錘形細胞，其間散在分布少許小圓形細胞。實驗組成軟骨誘導21 d 后甲苯胺藍染色呈陽性，細胞外有蛋白多糖（Aggrecan）形成；免疫組織化學染色示特異軟骨基質Col Ⅱ表達；實時熒光定量PCR 檢測示Col Ⅱ A1、Aggrecan、SOX9 mRNA 表達量與對照組比較，差異有統計學意義（P lt; 0.05）。成骨誘導10 d 后ALP 染色陽性，21d 后茜素紅染色陽性，有鈣結節形成。成脂誘導21 d 后油紅O 染色示細胞內有脂滴形成。對照組除ALP 染色觀察呈弱陽性外，余染色均呈陰性。 結論 豬膝關節滑膜組織可分離獲取SMSCs，其在體外具有向成軟骨、成骨、成脂多向分化潛能，有望成為組織工程種子細胞來源。
構建含人IL-1 受體拮抗蛋白（IL-1 receptor antagonist，IL-1Ra）逆轉錄病毒表達載體（PLXRNIL-1Ra），體外轉染人骨關節炎（osteoarthritis，OA）軟骨細胞，研究其相關特性。 方法 利用細菌內同源重組技術快速構建PLXRN-IL-1Ra 逆轉錄病毒重組質粒，經測序及酶切鑒定正確后轉染PT67 細胞，包裝成為重組PLXRN-IL-1Ra 逆轉錄病毒，并使用小鼠腎成纖維細胞系NIH/3T3 對病毒進行滴度測定。實驗分為3 組：未轉染組（A 組）、PLXRN 空質粒轉染組（B 組）、PLXRN-IL-1Ra 轉染組（C 組），病毒感染人OA 軟骨細胞后，RT-PCR 檢測細胞內IL-1Ra 基因的轉錄和表達；ELISA 法檢測細胞培養上清液中人IL-1Ra 蛋白表達。 結果 酶切鑒定及基因測序證實重組逆轉錄病毒質粒中含有人IL-1Ra cDNA，測定包裝的病毒滴度為3 × 104 CFU/mL。原代軟骨細胞體外培養呈多角形或梭形，甲苯胺藍染色見細胞內有紫色異染顆粒。RT-PCR 結果顯示在C 組出現311 bp 人IL-1Ra mRNA 片段，A、B 組未見人IL-1Ra mRNA 的表達帶，GAPDH 在各組均有表達。ELISA 檢測發現C 組細胞上清有一定量的人IL-1Ra 表達，蛋白濃度為（60.47 ± 15.13）ng/L，A 組和B 組均無人IL-1Ra 表達。 結論 構建的IL-1Ra 逆轉錄病毒表達載體成功地感染人OA 軟骨細胞，并在體外獲得穩定表達，為將表達人IL-1Ra 基因的人OA 軟骨細胞用于OA 基因治療提供了實驗依據。
目的探討深低溫冷凍處理對大鼠髕腱組織中肌腱干細胞（tendon-derived stem cells，TDSCs）的成活、細胞活力、早期凋亡、遷移能力及肌腱相關基因表達的影響。方法取 12 只 4 月齡雄性 SD 大鼠雙側髕腱組織，其中 6 只大鼠 12 條髕腱組織（實驗組）進行深低溫冷凍處理；剩余髕腱組織（對照組）不作處理，作為正常對照。取兩組髕腱組織用 0.3% Ⅰ 型膠原酶消化獲得有核細胞，分別用錐蟲藍染色檢測有核細胞成活率、結晶紫染色檢測有核細胞克隆形成能力；取兩組髕腱組織分離培養 TDSCs，并傳至第 3 代，采用 Alamar Blue 法檢測細胞體外增殖能力；Annexin V-FITC/PI 雙染法檢測細胞早期凋亡率；Transwell 法檢測細胞遷移能力；實時熒光定量 PCR 檢測細胞肌腱相關基因 Ⅰ 型膠原（collagen type Ⅰ，Col1α1）、scleraxis（Scx）和 tenomodulin（Tnmd） mRNA 表達。結果與對照組（91.00%±3.63%）比較，實驗組原代有核細胞成活率為 61.65%±4.76%，差異有統計學意義（t=12.010，P=0.000）。兩組有核細胞接種后，均呈克隆樣生長；培養 12 d，實驗組每 1 000 個有核細胞克隆集落形成數為（8.41±0.33）個，較對照組（15.19±0.47）個顯著減少（t=28.910，P=0.000）。實驗組 TDSCs 占活性有核細胞比例為 1.37%±0.09%，較對照組 1.67%±0.10% 顯著減少（t=5.508，P=0.003）。第 3 代 TDSCs 培養 14 d 內兩組細胞生長趨勢一致；兩組各時間點吸光度（A）值比較，差異均無統計學意義（P>0.05）。實驗組及對照組 TDSCs 早期凋亡率分別為 1.67%±0.06%、1.63%±0.06%，比較差異無統計學意義（t=0.707，P=0.519）。鏡下見，兩組均有 TDSCs 黏附于 Transwell 小室下室，實驗組細胞數為（445.00±9.70）個，對照組為（451.50±12.66）個，比較差異無統計學意義（t=0.998，P=0.342）。實驗組 Col1α1、Scx、Tnmd 的 mRNA 相對表達量分別為 3.498±0.065、0.062±0.002、（4.211±0.211）×10–5，對照組分別為 3.499±0.113、0.062±0.001、（4.341±0.274）×10–5，比較差異均無統計學意義（t=0.013，P=0.991；t=0.042，P=0.969；t=0.653，P=0.549）。結論大鼠肌腱組織經深低溫冷凍后其有核細胞成活率降低，但肌腱組織仍保留大量有活性 TDSCs，且細胞增殖能力、早期凋亡率、體外遷移能力及成肌腱分化能力未見明顯異常。
目的分析老年股骨頸骨折患者人工股骨頭置換術后死亡率及其危險因素。方法以 2011 年 1 月—2015 年 12 月因股骨頸骨折行人工股骨頭置換術患者為研究對象，將符合選擇標準的 109 例患者納入研究，收集臨床資料，包括年齡、性別、合并基礎疾病數量、入院至手術時間以及術前血紅蛋白、營養狀況。采用單因素分析和 Cox 比例風險回歸模型篩查術后死亡危險因素。結果術后 1 年和 2 年死亡率分別為 6.4%（7/109）和 17.4%（19/109）。單因素分析顯示年齡、術前血紅蛋白水平和營養狀況是患者術后死亡的影響因素（P<0.05）。多因素分析顯示，年齡≥80 歲和營養不良是患者術后死亡的獨立危險因素（P<0.05）。結論老年股骨頸骨折患者人工股骨頭置換術后死亡率高，對于此類患者，尤其是高齡和營養不良者，應多學科綜合評估圍術期風險，加強圍手術期管理和優化，以改善臨床預后。
目的 比較鎖定鋼板及髓內釘治療老年肱骨近端Neer二、三部分骨折的療效。方法 回顧分析2015年1月—2018年12月符合選擇標準的86例肱骨近端Neer二、三部分骨折老年患者臨床資料。其中，46例行鎖定鋼板固定（鎖定鋼板組），40例行髓內釘固定（髓內釘）。兩組患者性別、年齡、致傷原因、骨折側別及分型、受傷至手術時間以及合并損傷等一般資料比較，差異均無統計學意義（P>0.05）。比較兩組疼痛視覺模擬評分（VAS）、美國肩肘外科（ASES）評分、Constant-Murley評分，以及肩關節活動度（前屈、外展、外旋）；X線片復查骨折愈合情況，于術后第2天及末次隨訪圖像測量頸干角并計算差值。結果 兩組患者均獲隨訪，隨訪時間18～40個月，平均30.4個月；兩組隨訪時間差異無統計學意義（t=?0.986，P=0.327）。X線片復查示兩組骨折均愈合，鎖定鋼板組骨折愈合時間為（11.3±2.1）周，髓內釘組為（10.3±2.0）周，差異有統計學意義（t=2.250，P=0.027）。鎖定鋼板組頸干角差值為（7.63±7.01）°，髓內釘組為（2.85±2.82）°，差異有統計學意義（t=4.032，P<0.001）。末次隨訪時，兩組Constant-Murley評分、ASES評分、VAS評分及肩關節活動度比較，差異均無統計學意義（P>0.05）。鎖定鋼板組13例（28.3%）、髓內釘組4例（10.0%）發生并發癥，差異有統計學意義（χ2=4.498，P=0.034）。結論 鎖定鋼板及髓內釘均可用于治療老年肱骨近端Neer二、三部分骨折，其中髓內釘固定手術更加微創，術后并發癥更少，骨折愈合更快。
目的 介紹加速康復外科（enhanced recovery after surgery，ERAS）在老年髖部骨折圍術期治療管理的研究進展。 方法 廣泛查閱國內外近年相關文獻，對 ERAS 在老年髖部骨折的應用內容和特點等進行總結分析。 結果 多模式鎮痛、炎癥控制、血液管理、早期活動、心理疏導等 ERAS 的研究內容在老年髖部骨折圍術期（急診、術前、術中、術后）全程治療的應用實踐，大大降低了術后并發癥發生率，也減少了住院時間和費用，既保障了患者生命健康利益，又節省了醫療支出。同時 ERAS 在老年髖部骨折領域的研究和實施，為進一步發展和完善老年髖部骨折圍術期的全程管理方案提供了依據。 結論 ERAS 在老年髖部骨折圍術期的應用取得了顯著成果，為老年髖部骨折圍術期的治療管理提供了一種優選方案。