體外分離培養豬滑膜源性MSCs(synovium-derived MSCs,SMSCs),探討其在體外多向分化潛能。 方法 2 月齡長楓雜交豬3 頭,雌雄不限,體重8 ~ 10 kg。取豬膝關節滑膜組織分離SMSCs 并行原代及傳代培養,待第3 代SMSCs 長滿培養皿后,吸去基礎培養液,分別加入特定培養液進行成軟骨、成骨、成脂誘導分化,作為實驗組;以基礎培養液培養作為對照組。成軟骨誘導21 d 后行甲苯胺藍染色、免疫組織化學染色和實時熒光定量 PCR 檢測;成骨誘導10 d 后行ALP 染色檢測,21 d 后行茜素紅染色檢測;成脂誘導21 d 后行油紅O 染色檢測。 結果 SMSCs 培養24 h后細胞形態細長或呈多角形;48 h 后細胞數量增多;72 h 后可見大量紡錘形細胞,其間散在分布少許小圓形細胞。實驗組成軟骨誘導21 d 后甲苯胺藍染色呈陽性,細胞外有蛋白多糖(Aggrecan)形成;免疫組織化學染色示特異軟骨基質Col Ⅱ表達;實時熒光定量PCR 檢測示Col Ⅱ A1、Aggrecan、SOX9 mRNA 表達量與對照組比較,差異有統計學意義(P lt; 0.05)。成骨誘導10 d 后ALP 染色陽性,21d 后茜素紅染色陽性,有鈣結節形成。成脂誘導21 d 后油紅O 染色示細胞內有脂滴形成。對照組除ALP 染色觀察呈弱陽性外,余染色均呈陰性。 結論 豬膝關節滑膜組織可分離獲取SMSCs,其在體外具有向成軟骨、成骨、成脂多向分化潛能,有望成為組織工程種子細胞來源。
引用本文: 汪洋,王友,芮云峰,杜琳,湯亭亭,戴尅戎. 豬滑膜源性MSCs 體外多向分化潛能的研究. 中國修復重建外科雜志, 2009, 23(6): 737-734. doi: 復制