目的 觀察外源性軸突導向因子-1（netrin-1）對糖尿病（DM）大鼠視網膜Müller細胞活化的影響。 方法 健康清潔級雄性Sprague-Dawley大鼠50只，采用隨機數字表法隨機分為正常對照組（A組）、正常+平衡鹽溶液（BSS）組（B組）、正常+netrin-1 100 μg/ml組（C組）、DM +BSS組（D組）、DM+netrin-1 100 μg/ml組（E組），每組10只。D、E組大鼠按60 mg/kg的劑量，左下腹腔注射鏈脲佐菌素誘導DM動物模型。采用免疫組織化學染色法檢測大鼠視網膜Müller細胞標志物膠質原纖維酸性蛋白（GFAP）的陽性表達；熒光定量聚合酶鏈反應檢測大鼠視網膜GFAP mRNA的表達。 結果 免疫組織化學染色結果顯示，A～C組大鼠視網膜僅在神經纖維層及神經節細胞層可見少量GFAP陽性表達。D組大鼠視網膜GFAP陽性表達增多。E組大鼠視網膜GFAP陽性表達較D組減少。A～E組大鼠視網膜GFAP陽性表達、mRNA表達比較，差異有統計學意義（F=203.43、72.91，P=0.00、0.00）。與A組比較，D組大鼠視網膜GFAP陽性表達、mRNA表達明顯增多，差異有統計學意義（t=?26.01、22.26，P=0.00、0.00）。E組大鼠視網膜GFAP陽性表達、mRNA表達較D組明顯下降（t=?10.78、3.93，P=0.00、0.00），但仍高于A組（t=7.00、?9.82，P=0.00、0.00），差異均有統計學意義。A、C組大鼠視網膜GFAP陽性表達、mRNA表達比較，差異均無統計學意義（t=?0.29、0.50，P=0.77、0.62）。 結論 Netrin-1可降低DM大鼠視網膜Müller細胞活化，減少視網膜GFAP表達。
目的觀察探討外源性軸突導向因子netrin-1對早期糖尿病(DM)大鼠血視網膜屏障(BRB)的影響及可能的作用機制。 方法健康雄性Sprague-Dawley大鼠80只, 采用隨機數字表法將其分為正常對照組、DM+平衡鹽溶液(BSS)組、DM+netrin-1低劑量組、DM+netrin-1高劑量組, 每組均為20只大鼠。鏈脲佐菌素腹腔注射誘導DM模型。DM 3個月時, DM+netrin-1低劑量組、DM+netrin-1高劑量組大鼠玻璃體腔分別注射10、100 mg/ml的netrin-1 5μl；DM+BSS組大鼠玻璃體腔注射等體積BSS。高糖高脂飼養1個月后處死所有大鼠, 摘除眼球。每組隨機選取5只大鼠行蘇木精-伊紅染色觀察各組大鼠視網膜微血管改變；免疫組織化學染色檢測視網膜閉合蛋白(occludin)的表達以及熒光定量聚合酶鏈反應(RT-PCR)觀察occludin mRNA的表達；伊凡思藍(EB)滲漏試驗觀察大鼠視網膜微血管結構改變和滲漏。獨立樣本t檢驗對兩組間指標進行統計學分析。多組間比較采用單因素方差分析。 結果光學顯微鏡觀察發現, DM+BSS組大鼠視網膜神經節細胞層水腫, 排列紊亂, 視網膜微血管擴張, 結構異常；DM+netrin-1高劑量組大鼠視網膜神經節細胞水腫減輕, 微血管擴張程度減輕。免疫組織化學染色結果顯示, DM+netrin-1低劑量組、DM+netrin-1高劑量組大鼠視網膜棕黃色顆粒染色范圍擴大, 顏色加深。RT-PCR檢測結果顯示, 與正常對照組大鼠視網膜中occludin mRNA表達比較, 其余各組大鼠視網膜中occludin mRNA表達減少, 差異有統計學意義(P＜0.05)。DM+BSS組、DM+netrin-1低劑量組、DM+netrin-1高劑量組間大鼠視網膜平均積分吸光度[A, 舊稱光密度(OD)]值(IA值)比較, 差異有統計學意義(F=177.13, P=0.00), 且DM+netrin-1高劑量組大鼠視網膜occludin表達較DM+netrin-1低劑量組高。DM+BSS組大鼠視網膜IA值與DM+netrin-1低劑量組比較, 差異有統計學意義(t=-13.98, P=0.00)；DM+netrin-1高劑量組大鼠視網膜IA值與正常對照組比較, 差異有統計學意義(t=12.87, P=0.00)。EB滲漏試驗結果顯示, DM+BSS組、DM+netrin-1低劑量、DM+netrin-1高劑量組間大鼠視網膜EB滲漏量比較, 差異有統計意義(F=179.69, P=0.00)；DM+netrin-1低劑量組大鼠視網膜EB滲漏量與DM+netrin-1高劑量組比較, 差異有統計學意義(t=12.73, P=0.00)。 結論玻璃體腔注射外源性netrin-1對早期DM大鼠BRB有保護作用；這種保護作用可能是通過抑制視網膜occludin的減少實現。
目的 觀察不同濃度外源性軸突導向因子（netrin）-1對糖尿病（DM）大鼠視網膜血管通透性的影響。 方法 健康清潔級雄性Sprague-Dawley大鼠80只，采用隨機數字表法隨機分為正常對照組（A組）、正常＋平衡鹽溶液（BSS）組（B組）、正常＋netrin-1 500 μg/ml組（C組）、DM＋BSS組（D組）、DM＋netrin-1 10 μg/ml組（E組）、DM＋netrin-1 50 μg/ml組（F組）、DM＋netrin-1 100 μg/ml組（G組）、DM＋netrin-1 500 μg/ml組（H組），每組10只。E～H組大鼠腹腔注射鏈脲佐菌素誘導DM動物模型。建模3個月后，E～H組大鼠玻璃體腔分別注射10、50、100、500 μg/ml netrin-1 5 μl。C組大鼠玻璃體腔注射500 μg/ml netrin-1 5 μl。B、C組大鼠玻璃體腔注射等體積BSS。A組大鼠不做任何處理。采用免疫組織化學染色法觀察大鼠視網膜閉合蛋白（occludin）的陽性表達；熒光定量聚合酶鏈反應檢測大鼠視網膜occludin mRNA的表達；伊凡思藍檢測各組大鼠視網膜血管通透性變化。 結果 與A組比較，D組大鼠視網膜occludin陽性表達（t=27.71，P=0.00）、mRNA表達（t=8.59，P=0.00）均減少，差異有統計學意義；視網膜血管通透性增加，差異有統計學意義（t=?42.72，P=0.00）。D～H組大鼠視網膜occludin陽性表達（F=146.31，P=0.00）、mRNA表達（F=16.54，P=0.00）及視網膜血管通透性（F=67.77，P=0.00）比較，差異有統計學意義。B、C組大鼠視網膜occludin陽性表達（t=?1.13，P=0.27）、mRNA表達（t=0.93，P=0.36）及視網膜血管通透性（t=1.04，P=0.31）比較，差異無統計學意義。隨著外源性netrin-1濃度升高，大鼠視網膜occludin陽性表達、mRNA表達升高，視網膜血管通透性降低。相關性分析結果顯示，外源性netrin-1濃度與視網膜occludin陽性表達、mRNA表達呈正相關（r=0.73、0.81，P=0.00、0.00），與視網膜血管通透性呈負相關（r=–0.61，P=0.00）。 結論 外源性netrin-1可降低DM大鼠視網膜血管通透性，且該作用與外源性netrin-1濃度有關。
目的觀察HIF-2α在增生型糖尿病視網膜病變（PDR）纖維血管膜中的表達，初步探討HIF-2α在PDR新生血管形成中的作用。方法回顧性臨床研究。2014年7月至2015年7月于青島大學附屬醫院眼科行玻璃體切割手術的PDR患者57例60只眼納入研究。根據手術前是否行玻璃體腔注射抗VEGF藥物治療將患眼分為PDR未注藥組和PDR注藥組，分別為30例32只眼、27例28只眼。PDR注藥組患眼手術前2～7 d玻璃體腔注射10 mg/ml雷珠單抗0.05 ml（含雷珠單抗0.5 mg）。選取同期特發性黃斑前膜患者18例18只眼作為對照組。于玻璃體切割手術中獲得PDR纖維血管膜、黃斑前膜病理標本。免疫組織化學染色法及熒光定量PCR（RT-PCR）檢測各組病理標本中HIF-2α、Delta樣配體4（Dll4）、VEGF的表達。多組間相關因子表達差異比較采用Kruskal-Wallis檢驗。兩變量間關系行Spearman相關性分析。結果免疫組織化學染色結果顯示，PDR未注藥組、PDR注藥組纖維血管膜中HIF-2α、Dll4、VEGF蛋白表達均呈陽性。PDR未注藥組HIF-2α、Dll4、VEGF蛋白相對表達量均高于PDR注藥組，差異均有統計學意義（t=4.36、6.01、4.82，P=0.000、0.008、0.016）。RT-PCR檢測結果顯示，PDR未注藥組、PDR注藥組、對照組纖維血管膜、黃斑前膜中HIF-2α、Dll4、VEGF mRNA相對表達量比較，差異均有統計學意義（H=18.81、19.60、20.50，P=0.000、0.000、0.000）。其中，PDR未注藥組、PDR注藥組HIF-2α、Dll4、VEGF mRNA相對表達量均顯著高于對照組；與PDR未注藥組比較，PDR注藥組HIF-2α、Dll4、VEGF mRNA相對表達量均降低。Spearman相關性分析結果顯示，HIF-2α與Dll4、VEGF mRNA相對表達量呈顯著正相關（r=0.95、0.87，P＜0.05）。結論PDR患眼纖維血管膜中HIF-2α表達高于對照組，且與DLL4、VEGF的表達均呈顯著正相關。
目的 觀察人臍帶間充質干細胞（hUCMSC）對早期糖尿病（DM）大鼠視網膜神經細胞凋亡及膠質纖維酸性蛋白（GFAP）表達的影響。 方法 健康雄性Sprague-Dawley大鼠70只，隨機分為正常對照組（A組）、DM組，分別為12、58只大鼠。DM組經鼠尾靜脈注射鏈脲佐菌素誘導DM模型。成模5個月時，DM組再隨機分為DM空白對照組（B組）、磷酸鹽緩沖液組（C組）、hUCMSC干預組（D組）。剔除死亡或血糖恢復大鼠，最終每組12只大鼠納入研究。采用dUTP缺口末端標記法檢測各組大鼠視網膜細胞凋亡情況；免疫組織化學染色法及蛋白免疫印跡法（Western blot）檢測各組大鼠視網膜中GFAP蛋白表達。 結果 A組大鼠視網膜各層細胞排列整齊，未見凋亡細胞；B、C組大鼠視網膜神經節細胞層（GCL）、內核層（INL）均可見大量凋亡細胞，GCL水腫；D組大鼠視網膜GCL偶見凋亡細胞、水腫明顯減輕。A組大鼠視網膜中GFAP陽性表達主要見于GCL和神經纖維層（RNFL）；B、C組大鼠視網膜中GFAP陽性表達貫穿于內叢狀層（IPL）、INL，RNFL、GCL棕黃色顆粒著染加深；D組大鼠視網膜中GFAP陽性表達范圍僅見于RNFL、GCL，IPL未見陽性細胞突起。A組大鼠視網膜中GFAP蛋白呈低表達；B、C組大鼠視網膜中GFAP蛋白表達明顯增加；D組大鼠視網膜中GFAP蛋白表達較B、C組明顯降低。A、B、C、D組之間大鼠視網膜中GFAP蛋白表達比較，差異有統計學意義（F=79.635，P＜0.05）。 結論 hUCMSC可以抑制早期DM大鼠視網膜神經細胞凋亡與膠質細胞活化。
目的觀察Delta樣配體4（Dll-4）對早期糖尿病（DM）大鼠視網膜病理結構的影響及其與血管內皮生長因子受體（VEGFR）-2的關系。方法雄性Sprague-Dawley大鼠70只，隨機數字表法分為正常組（10只）和DM組（60只）。DM組大鼠經腹腔注射鏈脲佐菌素誘導DM模型；剔除血糖恢復和死亡大鼠，最終50只大鼠納入統計。正常組大鼠注射等體積檸檬酸-檸檬酸鈉緩沖液。隨機數字表法將DM組大鼠分為DM 1m組、DM 2m組、DM 3m組、DM 3m+Anti組、DM 3m+磷酸鹽緩液（PBS）組，各組均為10只大鼠。DM 3m+Anti組大鼠玻璃體腔注射抗Dll-4多克隆抗體4 μl，抗體濃度0.25 mg/ml；DM 3m+PBS組大鼠玻璃體腔注射等體積PBS。注射后5 d，處死大鼠。其余各組大鼠不做任何處理，分別于成模后1、2、3個月處死。蘇木精-伊紅染色觀察視網膜各層結構及微血管變化，測量視網膜總厚度；免疫組織化學和熒光定量聚合酶鏈反應（PCR）檢測視網膜中Dll-4、VEGFR-2 mRNA的表達。單因素方差分析比較各組大鼠視網膜中Dll-4、VEGFR-2表達差異；兩組間比較采用最小顯著差法t檢驗。結果光學顯微鏡觀察發現，DM 3m組大鼠視網膜神經節細胞層明顯水腫，內、外核層變薄，細胞數量減少，排列紊亂，外叢狀層（OPL）水腫明顯，微血管異常擴張；DM 3m+Anti組大鼠視網膜OPL水腫較DM 3m組減輕，其余各層無明顯差異。與正常組比較，DM 3m組、DM 3m+Anti組、DM 3m+PBS組大鼠視網膜總厚度增加，差異均有統計學意義（t=5.596、3.290、4.286，P=0.000、0.008、0.002）。免疫組織化學染色結果顯示，正常組大鼠視網膜神經節細胞層可見少量Dll-4陽性表達；神經節細胞層及內、外核層均可見少量VEGFR-2陽性表達。DM 1m組、DM 2m組、DM 3m組大鼠視網膜血管內皮細胞中Dll-4陽性表達逐漸增加。DM 3m+Anti組大鼠視網膜各層及血管內皮細胞中Dll-4陽性表達明顯減少，而VEGFR-2表達顯著增加。DM 3m+PBS組大鼠視網膜Dll-4、VEGFR-2陽性表達與DM 3m組無明顯差異。熒光定量PCR檢測結果顯示，DM 3m組大鼠視網膜中Dll-4、VEGFR-2 mRNA表達量較正常組明顯升高，差異有統計學意義（t=6.705、20.871，P＜0.05）。與DM 3m組比較，DM 3m+Anti組大鼠視網膜Dll-4 mRNA表達量降低，VEGFR-2 mRNA表達量升高，差異均有統計學意義（t=2.681、3.639，P＜0.05）。DM 3m+PBS組、DM 3m組大鼠視網膜中Dll-4、VEGFR-2 mRNA表達量比較，差異無統計學意義（t=0.513、0.657，P＞0.05）。結論DM大鼠早期視網膜病變過程中視網膜血管內皮細胞中Dll-4表達逐漸增加；抑制Dll-4表達，VEGFR-2的表達上調，且OPL水腫減輕。