目的 探討水通道蛋白1（AQP-1）在炎癥性胸腔積液大鼠胸膜上的表達及其與胸水形成的關系。方法 56只健康Wistar大鼠隨機分為對照組（8只）和胸膜炎組（48只）。采用角叉菜膠胸腔內注射復制炎癥性胸腔積液大鼠模型。胸膜炎組根據注入角叉菜膠后處理時間再分為6，12，24，36，48和72 h組，每組8只。測定各組大鼠胸腔積液量，對胸腔積液進行細胞計數和分類，采用HE染色觀察臟、壁層胸膜的病理變化，采用免疫組化染色檢測AQP-1在大鼠胸膜上的分布，分別采用RT-PCR和Western blot方法檢測臟、壁層胸膜AQP-1的mRNA和蛋白表達。結果 胸膜炎各時相組胸水量分別為2.10±0.22、4.10±0.15、4.40±0.36、3.20±0.27、2.60±0.18和0.12±0.02 mL。AQP-1主要表達在臟、壁層胸膜的間皮細胞和毛細血管內皮細胞。胸膜炎各時相組臟、壁層胸膜AQP-1表達均增強。胸膜炎組AQP-1 mRNA在壁層胸膜的表達于6 h開始升高，24 h達高峰；在臟層胸膜的表達于12 h開始升高，24 h達高峰。AQP-1蛋白表達的變化趨勢與mRNA表達一致。12 h和24 h組壁層胸膜AQP-1表達與胸腔積液量正相關（r=0.857，r=0.846，P均lt;0.01）；24 h臟層胸膜AQP-1表達與胸腔積液量正相關（r=0.725，Plt;0.05）。結論 胸膜炎胸腔積液時胸膜AQP-1表達增強，AQP-1可能參與炎癥性胸腔積液的轉運過程。
目的 探討水通道蛋白1( AQP1 ) 在胸腔積液發生機制中的作用。方法 SD 大鼠按實驗設計分為5 組( n =24) : 地塞米松組、內毒素組、紅霉素組、高滲鹽水組及對照組, 通過免疫組織化學染色測定AQP1 在胸膜上的表達和定位; 采用Real-time RT-PCR 方法對不同刺激因子作用下不同時間胸膜組織AQP1 的基因表達進行定量分析。結果 大鼠臟、壁層胸膜間皮細胞及壁層胸膜下毛細血管內皮上均存在AQP1 的表達, 臟層胸膜間皮細胞上AQP1 的表達較壁層胸膜明顯[ ( 7. 43 ±2. 02) ×104 copy / μg 比( 4. 14 ±1. 12) ×104 copy/ μg, P lt;0. 05] 。地塞米松、高滲鹽水上調大鼠胸膜組織AQP1 的表達( P lt;0. 05) ; 紅霉素、內毒素下調胸膜組織上AQP1 的表達( P lt;0. 05) 。結論 地塞米松、內毒素、紅霉素和高滲鹽水刺激下胸膜組織AQP1 表達的改變, 提示存在炎癥因子和滲透梯度下調控AQP1 的途徑, 胸膜組織上AQP1 可能參與了炎癥性胸腔積液的分泌和吸收。
目的 探討半夏提取物( EP) 對脂多糖誘導的大鼠氣道黏液高分泌模型的干預作用。方法 30 只Wistar 大鼠隨機分為5 組( n= 6) , 分別為空白組、模型組、低劑量EP 組、中劑量EP 組及高劑量EP 組。模型組和EP 組經氣道注入脂多糖( LPS) 復制大鼠氣道黏液高分泌模型。低、中、高劑量EP 組連續4 d 分別給予管飼EP 10、30 及60 g/kg; 采用免疫組化法檢測肺內氣道的黏蛋白5AC ( MUC5AC) 蛋白表達, RT-PCR 法檢測肺組織MUC5AC mRNA、水通道蛋白5( AQP-5) mRNA; ELISA 法檢測BALF 中的TNF-α濃度。結果 大鼠氣道上皮MUC5AC 蛋白和肺組織MUC5AC mRNA 的表達在模型組中均明顯高于空白組( P lt; 0. 05) ; 在低劑量及中劑量EP 組較模型組稍降低( P gt;0. 05) , 仍顯著高于空白組( P lt; 0. 05) ; 在高劑量EP 組顯著低于模型組( P lt;0. 05) 。大鼠AQP-5 mRNA 表達在模型組顯著低于空白組( P lt;0. 05) ; 在低劑量及中劑量EP 組較模型組稍升高( P gt; 0. 05) , 仍較空白組顯著降低( P lt;0. 05) ; 在高劑量EP 組顯著高于模型組( P lt; 0. 01) 。BALF 中TNF-α濃度與肺組織MUC5AC mRNA 的表達呈正相關( r = 0. 948, P lt;0. 05) , 肺組織AQP-5 mRNA 與MUC5AC mRNA 及 TNF-α的表達呈負相關( r = - 0. 955, P lt;0. 05; r = - 0. 909, P lt;0. 05) 。結論 高劑量的EP 能明顯抑制大鼠氣道上黏液高分泌狀態。
目的 觀察水通道蛋白1( AQP-1) 在急性過敏性哮喘小鼠肺組織表達的變化, 以及乙酰唑胺( AZ) 對AQP-1 表達的影響。方法 40 只C57BL/6 小鼠隨機分對照組( A 組) 、AZ 大劑量干預組( 300 mg/kg, B 組) 、AZ 中劑量干預組( 200 mg/kg, C 組) 、AZ 小劑量干預組( 100 mg/kg, D 組) 和哮喘組( E 組) , 每組8 只。干預組在激發階段給予不同劑量的AZ 腹腔注射。結果 ①E 組肺組織的濕干重比值比A 組明顯增高( P lt;0. 05) ; B、C、D組肺組織的濕干重比值較E 組顯著減低( P lt;0. 05) , 與劑量呈負相關性。②E 組BALF 中細胞總數、嗜酸粒細胞數和IL-5 水平均高于A 組( P lt; 0. 05) ,IFN-γ水平低于A 組( P lt;0. 05) , 治療后細胞總數、嗜酸粒細胞數、中性粒細胞及淋巴細胞均明顯下降( P lt;0. 05) , 且與劑量呈正相關性。③E 組AQP-1 在氣管黏膜上皮、微血管內膜上皮、支氣管周圍血管床及炎癥細胞呈強陽性表達, 其表達水平明顯高于A 組( P lt;0. 01) , 使用AZ 干預后表達明顯低于E 組( P lt;0. 05) , 下降的幅度與劑量呈正相關性; 但AQP-1 mRNA 檢測結果無明顯差異( P gt; 0. 05) 。結論 ①AQP-1 在急性哮喘小鼠肺組織內及炎癥細胞上過度表達, E 組呈強陽性表達。②AZ 對AQP-1 有顯著的抑制作用, 可明顯改善小鼠肺部的炎性細胞浸潤等病理改變, 且呈劑量依賴性。③AQP-1蛋白質在各組中表達差異較大, 但AQP-1 mRNA 無明顯差異, 提示乙酰唑胺對AQP-1 的影響可能是在轉錄后的水平上。
目的 氨基胍（aminoguanidine，AG）能顯著減輕腦外傷及中風動物模型腦水腫，提高神經功能恢復程度。探討AG對大鼠急性脊髓損傷（spinal cord injury，SCI）后脊髓水腫的作用及相關機制。 方法 取成年雄性SD大鼠150只（體重230～255 g），分為對照組（A組，25只）、假損傷組（B組，25只）、SCI后未治療組（C組，25只）和SCI后AG治療組（75只）；AG治療組按給藥劑量分為AG 75 mg/kg組（D組，25只）、AG 150 mg/kg組（E組，25只）和AG 300 mg/kg組（F組，25只）。A組未行任何處理，B組僅行椎板切除術但不治療；C、D、E、F組制備靜壓型大鼠SCI模型后，C組腹腔注射5%DMSO，D、E、F組腹腔注射相應劑量AG。于造模后0、12、24、48 h用干濕重法檢測受損脊髓組織含水量以篩選最佳劑量，進一步用伊文思蘭（Evans blue，EB）法評測血-脊髓屏障功能，用RT-PCR檢測水通道蛋白4（aquaporins 4，AQP4）mRNA表達，Western blot和免疫組織化學染色檢測AQP4蛋白表達。 結果脊髓組織含水量檢測示，E組在造膜后12、24、48 h對SCI后脊髓組織水腫有明顯抑制作用（P lt; 0.05），選擇該劑量組用于后續實驗。造模后12、24、48 h，E組EB含量明顯低于C組（P lt; 0.05），降低血-脊髓屏障通透性。RT-PCR檢測結果示造模后12、24、48 h，B、E組AQP4 mRNA表達明顯低于C組；Western blot檢測示造模后24、48 h，B、E組AQP4蛋白表達明顯低于C組；免疫組織化學染色示造模后48 h，B、E組AQP4蛋白表達明顯低于C組，差異均有統計學意義（P lt; 0.05）；但各指標各時間點B、E組間比較，差異均無統計學意義（P gt; 0.05）。 結論急性SCI后大鼠經150 mg/kg AG治療后，能降低AQP4表達，改善脊髓水腫，減輕損傷。
目的 水通道蛋白1（aquaporins 1，AQP-1）表達變化可能與細胞凋亡相關。通過觀察軟骨組織中AQP-1 和半胱天冬氨酸蛋白酶 3（Caspase-3）的表達，探討AQP-1 表達與軟骨細胞凋亡的相關性，為進一步研究骨性關節炎（os teoarthritis，OA）的發病機制提供實驗依據。 方法 取8 周齡清潔級雄性SD 大鼠72 只，體重286 ～ 320 g，平均300 g；隨機分為手術組、假手術組和對照組，每組24 只。手術組采用切斷前交叉韌帶及內側副韌帶、部分切除內側半月板方法制備大鼠雙膝OA 模型；假手術組僅暴露關節腔；對照組不作處理。造模后觀察大鼠一般情況，于1、2、4、8 周處死大鼠取膝關節標本行大體、組織學觀察；采用實時熒光定量PCR 檢測 AQP-1 和Caspase-3 mRNA 的表達情況；使用酶標儀檢測Caspase-3 蛋白酶活性；并對AQP-1 mRNA 表達與Caspase-3 mRNA 的表達及蛋白酶活性的相關性進行分析。 結果 術后共6 只大鼠死亡，均給予補充；其余大鼠均存活至實驗完成。各時間點對照組及假手術組膝關節軟骨外觀及結構均正常；隨時間延長手術組關節軟骨表面粗糙且有裂隙，可見大量贅生物，軟骨表層纖維化，細胞排列紊亂。參照Mankin 評分標準，造模后1 周各組組織學評分比較，差異均無統計學意義（P gt; 0.05）；2、4、8 周時手術組與對照組、假手術組間比較，差異有統計學意義（P lt; 0.05）。造模后1 周，手術組AQP-1、Caspase-3 mRNA 表達和Caspase-3 蛋白酶活性與假手術組及對照組比較，差異均無統計學意義（P gt; 0.05）；而2、4、8 周時手術組以上指標均明顯高于對照組和假手術組（P lt; 0.05），且隨時間延長呈增高趨勢。AQP-1 mRNA 和Caspase-3 mRNA 表達成正相關（r=0.817，P=0.000），回歸方程為y=0.426 7x2+0.051 5x；AQP-1 mRNA 表達和Caspase-3 蛋白酶活性亦成正相關（r=0.945，P=0.000），回歸方程為y=15.423 0x+ 4 .392 8。 結 論 AQP-1 的表達上調可能與軟骨細胞凋亡相關，在OA 發病過程中AQP-1 表達的變化可能參與了OA 的發生、發展。
【摘要】 目的 探討腹水引起的腹內高壓對肝硬化小鼠肺組織水通道蛋白1（AQP1）和水通道蛋白5（AQP5）表達的影響。 方法 雄性美國癌癥研究所（Institudo of Cancer Reseach，ICR）小鼠50只，隨機取10只作正常對照組（腹壓0 cm H2O，1 cm H2O=0.098 kPa），其余40只用四氯化碳建立肝硬化小鼠模型，并隨機分為4組:肝硬化（腹壓0 cm H2O）組、肝硬化（腹壓5 cm H2O）組、肝硬化（腹壓10 cm H2O）組、肝硬化（腹壓20 cm H2O）組，通過腹腔注射不同量的白蛋白生理鹽水形成不同的腹壓，并維持腹壓24 h后取肺組織行病理、免疫組織化學、肺濕/干比值及實時熒光定量PCR檢測AQP1和AQP5 mRNA表達量。 結果 與正常對照小鼠相比，肝硬化小鼠肺AQP5、AQP1表達明顯下降（Plt;0.05）；肝硬化小鼠隨著腹內壓的升高，肺濕/干比值升高，AQP5、AQP1表達相應增加（Plt;0.05）。 結論 肝硬化可以影響肺AQP1、AQP5的表達；肝硬化小鼠隨著腹內壓的升高，AQP1、AQP5表達相應增加，并與肺水腫的嚴重程度密切相關。【Abstract】 Objective To investigate the role of intra-abdominal hypertension caused by ascites on the expression of Aquaporin (AQP) 1 and AQP 5 in the lung of cirrhotic mice. Methods We randomly chose 10 from 50 male Institude of Cancer Research (ICR) mice to form the control group [intra-abdominal pressure (IAP)=0 cm H2O, 1 cm H2O=0.098 kPa]. The model of cirrhosis were prepared by subcutaneous injection of carbon tetrachloride for the rest 40 mice which were then randomly divided into 4 groups: cirrhosis (IAP=0 cm H2O) group, cirrhosis (IAP=5 cm H2O) group, cirrhosis (IAP=10 cm H2O) group, and cirrhosis (IAP=20 cm H2O) group. Saline with different volume of albumin was injected into the peritoneum of each mouse in order to form different IAP. After 24 hours, analysis of pathology, immunochemistry and wet/dry ratio was done for the lungs of these mice; and the expression of AQP1 and AQP5 at the protein and mRNA levels were analyzed by IHC and qRT-PCR. Results Compared with the normal mice, the expression of AQP1 and AQP5 in lungs of cirrhotic mice were significantly lower (Plt;0.05). Both the lung wet/dry ratio and the expression of AQP1 and AQP5 raised with the increase of IAP. Conclusion Cirrhosis can affect the expression of AQP1 and AQP5 in lungs. The expression of AQP5 and AQP1 in lungs of cirrhotic mice increases with the increase of IAP, which is also closely correlated with the severity of pulmonary edema.
目的 探討水通道蛋白4（AQP4）在腦膠質瘤性腦水腫的分子調節機制及與血管內皮生長因子（VEGF）的關系。 方法 收集2007年10月-2008年6月間65例腦膠質瘤患者手術切除新鮮腫瘤標本（膠質瘤Ⅰ級6例、Ⅱ級18例、Ⅲ級11例、Ⅳ級30例）。應用免疫熒光細胞化學方法檢測腫瘤組織中AQP4蛋白和VEGF蛋白的陽性表達情況，并分析AQP4和VEGF的表達差異與關系。 結果 免疫熒光細胞化學法染色顯示，AQP4蛋白在正常腦組織中主要表達于細胞膜表面，胞漿和細胞核著色較淺。在膠質瘤細胞內，AQP4廣泛分布于胞漿內；腫瘤中AQP4表達和VEGF呈正相關（r=0.877，P=0.000）。 結論 在膠質瘤性腦水腫中，AQP4在膠質瘤細胞內主要分布于胞漿內，且與VEGF呈明顯正相關。
目的 研究p38絲裂原活化蛋白激酶（p38 mitogen-activated protein kinase，p38MAPK）在重癥急性胰腺炎（severe acute pancreatitis，SAP）大鼠肺組織中的表達情況，并初步探討p38MAPK與SAP肺毛細血管內皮屏障損傷的關系。方法 將40只健康雄性SD大鼠隨機（隨機數字表法）分為假手術（SO）組和SAP組，SAP組又再分為3、6、12及24h4個時間點組，共5組，每組8只。采用胰膽管逆行注射5%牛磺膽酸鈉的方法建立SAP大鼠模型。采用HE染色方法觀察大鼠肺和胰腺組織的病理學改變； 采用ELISA法檢測血清腫瘤壞死因子-α（TNF-α）和白細胞介素-1β（IL-1β）水平； 采用免疫組化染色方法檢測肺組織中磷酸化p38（p-p38）蛋白和水通道蛋白1（AQP1）的表達水平； 采用實時定量熒光PCR法（real-time PCR）檢測肺組織中AQP1 mRNA的表達水平。結果 SAP各時間點組大鼠肺組織充血水腫，炎癥細胞浸潤；胰腺組織可見大片壞死，部分腺葉結構模糊甚至消失；血清TNF-α和IL-1β水平均較SO組高（P＜0.05）。SO組大鼠肺組織中p-p38蛋白僅有微量表達，而在SAP 3h組，p-p38蛋白的表達就明顯上調，在6 h時達高峰，24h時仍高于SO組（P＜0.05）。SAP各時間點組大鼠肺組織中AQP1 mRNA及其蛋白的表達水平均較SO組下降（P＜0.05），并隨著時間的推移而逐漸下降； SAP組大鼠AQP1 mRNA的表達與TNF-α、IL-1β及p-p38蛋白之間均存在負相關關系（r=-0.87，P＜0.05；r=-0.88，P＜0.05；r=-0.78，P＜0.05）。結論 肺組織中AQP1蛋白表達的下調是SAP肺毛細血管內皮屏障損傷的重要原因之一，其可能與p38MAPK的激活及炎癥因子的過度釋放有關。
目的通過檢測梗阻性黃疸（OJ）時大鼠腎臟水通道蛋白-3（AQP-3）基因及蛋白表達的變化，探討其在早期腎功能損害診斷中的價值。方法將Wistar大鼠40只，隨機分為實驗組（n=20，建立OJ動物模型）和對照組（n=20，假手術組）。 于術后7 d和14 d，采用全自動生化分析儀檢測各組大鼠血總膽紅素（TBIL）、直接膽紅素（DBIL）、肌酐（Cr）和尿素氮（BUN）水平，并用Western blotting法和RT-PCR法分別檢測各組大鼠腎臟AQP3蛋白和mRNA的表達水平。 結果實驗組大鼠術后14 d血清TBIL和DBIL水平明顯高于術后7 d（P=0.000），且均高于相應時相假手術組（P=0.000），而假手術組內兩時相間比較差異無統計學意義（P=0.154），證實OJ模型建立成功。 血Cr水平在2組內不同時相間和相同時相組間比較差異均無統計學意義（Pgt;0.05）。 實驗組大鼠術后14 d的血BUN水平明顯高于術后7 d以及假手術組術后14 d的水平（P=0.001），而假手術組術后兩時相間的差異無統計學意義（P=0.288）。 實驗組大鼠術后7 d 及14 d的AQP-3蛋白表達水平均明顯低于相應時相的假手術組（P=0.033，P=0.000）， 且術后14 d的水平又明顯低于同組術后7 d水平（P=0.000）; 假手術組大鼠術后兩時相的AQP-3蛋白表達水平間的差異無統計學意義（P=0.059）。 實驗組大鼠術后7和14 d的AQP-3 mRNA表達水平明顯高于相應時相的假手術組（P=0.000），而兩組內不同時相間比較，其差異均無統計學意義（P=0.139，P=0.059）。 結論OJ合并腎功能損害時大鼠腎臟AQP-3 mRNA及蛋白表達的變化早于血肌酐及尿素氮的變化，其變化的應用有望提高OJ時腎功能損害的早期診斷率。