目的 觀察δ阿片受體激動劑D-丙2，D-亮5腦啡肽（D-Ala2，D-Leu5-enkephali，DADLE）對膿毒癥大鼠肝細胞凋亡及肝組織bcl-2和caspase-3表達的影響，探討DADLE對肝臟保護作用的可能機理。方法 采用盲腸結扎加穿孔(CLP)法制作大鼠膿毒癥模型，SD大鼠54只(雌雄不限)，采用隨機數字表法隨機分為CLP組（n=18）、DADLE組（n=18）和假手術組（n=18）。在不同時間點(2、4及6 h)處死大鼠，原位末端標記法檢測肝細胞凋亡情況，免疫組化法檢測肝組織中bcl-2及caspase-3蛋白表達的動態變化并觀察肝臟的病理改變。結果 CLP組大鼠肝組織病理損害明顯較假手術組嚴重，DADLE組肝臟的病理變化明顯改善； CLP組大鼠肝組織細胞凋亡指數明顯較假手術組升高（P＜0.01），以4 h最顯著（P＜0.01），DADLE 組各時相肝細胞凋亡指數均明顯降低（P＜0.01）； CLP組大鼠肝組織caspase3蛋白的表達強度比假手術組明顯增強（P＜0.01），而bcl-2蛋白的表達則明顯減弱（P＜0.05）； DADLE組肝組織caspase-3蛋白的表達強度較CLP組明顯減弱（P＜0.01），而bcl-2蛋白的表達則明顯增強（P＜0.05）。肝組織caspase-3的表達與肝細胞凋亡指數呈正相關（r=0.83，P＜0.01），bcl-2的表達與肝細胞凋亡指數呈負相關(r=-0.65，P＜0.01)。結論 DADLE能明顯改善膿毒癥大鼠肝臟的病理變化，其作用機理可能與DADLE下調caspase-3表達、上調bcl-2表達，從而抑制肝細胞凋亡有關。
研究白介素6(IL-6)在過氧化氫誘導的肺泡上皮細胞凋亡中的作用及其機制。方法：以人Ⅱ型肺泡上皮細胞A549細胞株為實驗對象，MTT法檢測IL-6對A549細胞增殖活性的影響，TUNEL檢測法檢測IL-6對A549細胞凋亡率的影響，Western blot觀察caspase-3和caspase-9蛋白量的變化。結果：IL-6能夠增加A549細胞的增殖活性，減少其凋亡。與模型組相比，IL-6干預組的caspase-3和caspase-9的蛋白表達量明顯降低,有統計學意義。結論：IL-6能夠抑制過氧化氫誘導的肺泡上皮細胞凋亡，并且與caspase-3和caspase-9蛋白的表達量下降有關。提示IL-6對肺泡上皮細胞的保護作用可能是通過抑制細胞凋亡相關蛋白來實現的。
目的 探討軟骨細胞體外培養過程中凋亡發生以及 caspase- 3的表達。 方法 采用 Annexin 和TU NEL 法檢測第 1～ 4代軟骨細胞在體外正常培養體系中第 3天和第 7天的凋亡率 ;RT- PCR和 Western blot分析caspase- 3表達水平 ;EL ISA檢測 caspase- 3蛋白酶活性。 結果 第 1～ 4代軟骨細胞在體外培養過程中均存在不同程度的凋亡現象 ,各代次軟骨細胞第 7天的凋亡率 15 .7%± 0 .3% ,明顯高于第 3天的 8.9%± 0 .6 % ,有統計學意義 (Plt;0 .0 1)。caspase- 3m RNA和蛋白質在整個培養過程中都有表達 ,隨著時間延長表達上調 ,第 7天的表達水平高于第 3天。體外培養 7天后 caspase- 3被激活 ,可檢測到分子量為 2 0 ku的裂解片段。caspase- 3蛋白酶活性隨著培養時間延長也逐漸增高 ,與細胞凋亡程度基本一致。 結論 軟骨細胞在體外培養過程中存在凋亡 ,caspase- 3參與了凋亡事件并發揮著重要作用。
【摘要】 目的 探討鐵螯合劑去鐵胺（DFO）對誘導白血病細胞HL-60的分子機制。 方法 2003年7-12月用鈣黃綠素（calcein）檢測HL-60細胞LIP。臺盼藍活細胞拒染實驗進行活細胞計數及細胞存活率測定；光鏡形態學觀察及流式細胞儀（FCM）等方法檢測HL-60細胞凋亡；比色法檢測caspase-3（基于pNA標記底物的比色法）活性。 結果 ①不同濃度的DFO作用于HL-60細胞后，隨培養時間延長及DFO濃度的增加，動態鐵池降低，細胞生存率逐漸下降，凋亡率增加，顯示一定的時間劑量依賴性。②HL-60細胞在不同濃度的DFO作用下，caspase-3的活性逐漸升高。50、100 μmol/L DFO作用于HL-60細胞24 h，caspase-3酶活性升高明顯，與對照組相比，有統計學意義（Plt;0.001）；相關分析結果顯示，HL-60細胞LIP的改變與caspase-3活性變化呈負相關系（r=-0.887，Plt;0.05）。 結論 DFO誘導白血病細胞凋亡的作用可能與螯合細胞內鐵，降低細胞LIP，激活caspase-3，最終實施細胞凋亡密切相關。【Abstract】 Objective To observe the changes of caspase-3 activity during apoptosis of HL-60 cells induced by an iron deferoxamine (DFO). Methods Exponentially growing HL-60 cells (1×106/mL) were used in this experiment from July 2003 to December 2003. The study groups were divided as follows: DFO group, iron+DFO group and control group. The viability was detected by typanblue, apoptosis was assessed by morphological study and flow cytometry (FCM) assay, and the caspase-3 activity was detected by melorimetry. The intracellular label iron pool (LIP) was measured with a fluorimetric assay using the metalsensitive probe calcein-AM. Results ①When HL-60 cells were incubated with different concentrations of DFO, viability assay was lower than that in the control group at the 12th, 24th and 48th hour (Plt;0.05). ② The cells incubated with different concentrations of DFO showed dose-time dependence and was much higher than that in the control group (Plt;0.01). ③The caspase-3 activity was significantly higher in the apoptotic cells than that in the control cells. Conclusions The apoptosis of HL-60 cells induced by DFO may be correlated with the decrease of cellular LIP and activity of caspase-3.
目的:探討白藜蘆醇對人腦膠質瘤U251細胞的凋亡相關因子caspase-3的作用。方法:應用RT-PCR方法和Western-blot分別檢測凋亡因子caspase-3的RNA和蛋白水平的表達。結果:白藜蘆醇能明顯促進U251細胞的凋亡相關因子caspase-3的表達,存在劑量依賴與時間依賴性。結論:白藜蘆醇能通過caspase－3途徑誘導U251細胞的凋亡。
目的研究大鼠皮膚切創愈合過程中caspase-3、Toll樣受體4（TLR4）的表達與損傷時間的關系，為損傷時間的推斷提供實驗依據。 方法采用隨機數字表法將健康大鼠63只隨機分為正常對照組（3只）、生前造創組（33只）、死后造創組（12只）和死后穩定性組（15只）。建立大鼠背部皮膚切創模型，運用蘇木精-伊紅染色技術、免疫組織化學染色技術觀察各組caspase-3和TLR4的表達情況；使用Image-Pro Plus圖像分析軟件、SPSS統計分析軟件對實驗結果進行處理。 結果caspase-3和TLR4主要在炎性細胞內表達，在正常皮膚組織的表皮層、毛囊及皮脂腺細胞內也均有表達。生前造創組：除0 h組外，其余各組與對照組比較差異均有統計學意義（P＜0.05）；傷后0.5 h，在創緣毛囊周圍中性粒細胞中可見少量caspase-3及TLR4表達；隨著炎細胞浸潤，caspase-3及TLR4陽性細胞率增加，3 d時達峰值；而后逐漸降低，主要表達于成纖維細胞及單核-巨噬細胞；10 d時，炎細胞大量減少，陽性表達主要在成纖維細胞。死后造創組：細胞表達結果與對照組差異無統計學意義。死后穩定性組：caspase-3、TLR4陽性細胞率與死后即刻比較差異無統計學意義（P＞0.05）。 結論在皮膚創傷愈合過程中caspase-3、TLR4陽性細胞率具有一定的規律性及時間相關性，且兩者在25℃溫度環境中具有較好的穩定性，可望成為法醫學損傷時間推斷的指標。