【摘 要】 目的 目前臨床使用的小口徑（lt; 5 cm）人工血管因生物相容性差、遠期通暢率低，效果不理想。擬通過在脫細胞血管支架表面預載bFGF，制備一種新型的小口徑人工血管。 方法 采用去污劑- 酶消化法制備犬頸動脈脫細胞支架，將bFGF 預載在經肝素固化（肝素固化組）和未固化的（單脫細胞組）脫細胞支架表面，ELISA 法檢測結合的bFGF 量及體外釋放情況。通過與犬BMSCs 體外復合培養1 ～ 5 d，觀察bFGF 預載肝素固化脫細胞支架（bFGF 預載組）和未固化的脫細胞支架（未預載組），以及各自空白對照組細胞生長情況。取8 只雜交犬，切斷并剪下頸總動脈造成約5 cm 缺損，隨機選取一側，將預載組支架行端端吻合于缺損中，作為實驗側；將未預載組支架以同樣方法植入對側，作為對照側。術后8 周取材行DSA、HE 染色觀察移植效果。 結果 犬頸動脈經脫細胞后大體形態完好、細胞基本去除、纖維結構完整。肝素固化組支架表面結合的bFGF 量與bFGF 反應濃度成正相關，與相同反應濃度下單脫細胞組比較差異有統計學意義（P lt; 0.05）；肝素固化組在濃度為100 ng/mL 下結合的bFGF 可在體外持續釋放20 d。 bFGF 預載支架促進BMSCs 增殖，MTT 顯示BMSCs 在兩組支架表面均可黏附生長，復合培養1、2 d 兩組差異無統計學意義（P gt; 0.05）；3 ～ 5 d，bFGF 預載組支架表面細胞增殖活性明顯高于未預載組（P lt; 0.01）。異體犬頸動脈移植后8 周，實驗側支架均通暢，且有細胞覆蓋內膜及浸潤管壁，而對照側通暢率僅為12.5%（1/8），閉塞的移植物腔內均為血栓形成，未見細胞覆蓋。 結 論 對同種異體血管脫細胞支架表面進行bFGF 預載，初步獲得一種具有良好生物相容性和通暢性的生物人工血管，其遠期通暢率及生物安全性仍待進一步評價。
目的 將含bFGF 和維生素C（vitamin C，VitC）的羊膜載體復合膜負載BMSCs 植入兔創面，探討其對真皮新生和重建速度的影響以及促進表皮修復速度的最佳時期。 方法 取健康3 月齡新西蘭大耳白兔24 只，體重1.0 ～ 1.5 kg，雌雄不限，取骨髓5 mL 進行BMSCs 體外分離、培養和傳代，取第2 代細胞調整至3.5 × 107 個/mL 備用。取新鮮牛羊膜制備大小為4.52 cm2 的羊膜載體復合膜。在每只兔背部脊柱兩側作3 個創面，深度達深筋膜，面積約3.14 cm2，隨機分為A、B、C 3 組。A 組創面植入含1 mL BMSCs、10 mL bFGF（0.2 mg/L）和10 mL VitC（0.02 g/L）的羊膜載體復合膜，B 組創面植入僅含有1 mL BMSCs 的羊膜載體復合膜，C 組創面僅植入羊膜載體復合膜。術后行大體觀察，術后7、14、21 d 取材行HE、Masson、Van Gieson、Ⅰ型膠原免疫組織化學染色觀察，血管墨汁灌注法動態觀察創面愈合情況。 結 果 術后各組創面愈合良好。術后21 d，A 組創面與周邊正常皮膚齊平；B 組創面尚有凹陷；C 組創面凹陷明顯較B 組大且深，周邊組織分界明顯較B 組清楚。術后7 d，各組創面無明顯縮小。術后14 d，各組創面逐漸縮小，形成新生表皮，A、B、C 組創面平均愈合率分別為60%、41% 和23%；術后21 d，3 組創面平均愈合率分別為99%、90%、81%；組間兩兩比較差異均有統計學意義（P lt; 0.05）。術后7、14、21 d，HE、Masson、Van Gieson 染色示A 組新生表皮層數及真皮成纖維細胞數、膠原纖維數量均多于B、C 組，Ⅰ型膠原免疫組織化學染色示A 組陽性細胞數多于B、C 組，墨汁灌注法顯示A 組血管數量明顯多于B、C 組。 結論 添加BMSCs、bFGF 和VitC 的羊膜載體復合膜植入全層皮膚缺損后，能加速真皮的修復重建，并且在真皮修復全層皮膚過程中表皮有新生和重建的最佳時期。
目的 探討應用SC、ECM 凝膠、bFGF-PLGA 緩釋微球、PLGA 纖維微絲整合至高滲透性聚乳酸[poly（D，L-lacitic acid），PDLLA] 導管中，構建組織工程神經的方法，并評價其修復周圍神經缺損的效果。 方法 培養和純化1 d 齡SD 近交系乳鼠SC，取第1 代細胞（1 × 107 個/mL）與bFGF-PLGA 緩釋微球、ECM 凝膠復合，注入內置PLGA纖維微絲的高滲透性PLLDA 導管中，構建組織工程神經。取成年SD 大鼠60 只，制備坐骨神經15 mm 缺損模型后，根據移植物不同隨機分為5 組（n=12）。A 組：采用自體神經移植修復；B 組：PDLLA 導管，管內注滿PBS 液；C 組：含PLGA纖維微絲的PDLLA 導管，管內注滿30%ECM 凝膠；D 組：含PLGA 纖維微絲的PDLLA 導管，管內注滿30%ECM 凝膠與SC 的混合物；E 組：組織工程神經。術后觀察大鼠一般情況，于術后12、16、20 及24 周行坐骨神經功能指數（sciaticfunction index，SFI）測定，術后12 及24 周神經電生理檢測，并取材行大體觀察和組織學觀察。 結果 術后大鼠均存活至實驗完成。術后12、16 周，E 組SFI 與B 組差異有統計學意義（Plt; 0.05）；術后20、24 周，E 組與B、C 組差異有統計學意義（P lt; 0.05）。術后12 周，電生理檢測E 組坐骨神經傳導速度（nerve conduct velocity，NCV）大于B、C 組（P lt; 0.05），復合動作電位振幅（compound amplitude，AMP）和動作電位面積分數（action potential area，AREA）大于B、C 及D 組（P lt;0.05）；術后24 周，E 組NCV、AMP 和AREA 大于B、C 組（Plt; 0.05）。組織學觀察術后12 周，E 組再生神經組織面積及有髓神經纖維數與A、B、C 組比較，差異有統計學意義（Plt; 0.05）；有髓神經纖維密度和直徑小于A 組（P lt; 0.05），大于B、C、D 組（P lt; 0.05）。術后24 周，E 組再生神經組織面積大于B 組（P lt; 0.05），有髓神經纖維數與A、B、C 組比較有統計學意義（P lt; 0.05） ；有髓神經纖維密度和直徑大于B、C 組（P lt; 0.05）。 結論 SC、ECM 凝膠、bFGF-PLGA 緩釋微球，PLGA 纖維微絲與高滲透性PDLLA 導管相互整合構建的組織工程神經修復神經缺損后，能促近神經再生，修復效果接近于自體神經移 植。
目的 探討bFGF 植入失神經腓腸肌后填補神經營養因子丟失、促進肌衛星細胞增殖、延緩肌萎縮的作用。 方法 將28 只健康雄性Wistar 大鼠隨機分成實驗組和對照組，每組14 只。切斷大鼠左下肢坐骨神經，制備失神經支配動物模型。實驗組于同側腓腸肌內植入盛有0.1 g bFGF 的硅膠管，對照組植入盛有生理鹽水的硅膠管。術后14 d 和30 d 取材行大體觀察，電生理檢測纖顫電位波幅變化，腓腸肌濕重測量，組織學觀察，圖像分析儀檢測及透射電鏡觀察。 結果 術后14 d 和30 d 對照組腓腸肌萎縮程度及與周圍結締組織粘連程度均較實驗組明顯加重。術后14、30 d，實驗組腓腸肌纖顫電位波幅為（0.220 6 ± 0.301 0）μm，對照組為（0.155 2 ± 0.050 3）μm；實驗組肌濕重為（2.475 7 ±0.254 6）g，對照組為（1.459 1 ± 0.642 5）g；兩組比較差異均有統計學意義（P lt; 0.05）。術后14、30 d 實驗組HE 染色示腓腸肌內肌衛星細胞核較對照組增多；Mallory 三色染色示對照組藍色結締組織略多于實驗組；PCNA 染色示實驗組呈陽性反應，棕黃色細胞核略多于對照組；維生素C 銀染示實驗組肌纖維間維生素C 濃度和結締組織增生均低于對照組。透射電鏡觀察術后30 d，對照組肌絲排列紊亂或模糊不清等萎縮改變的肌纖維及肌纖維間的膠原纖維多于實驗組。術后30 d，實驗組肌纖維直徑和截面積分別為（66.368 6 ± 12.672 7）μm 和（2 096.112 9 ± 311.563 9）μm2，對照組分別為（55.504 0 ±4.945 0） μm和（1 418.068 0 ± 264.953 7） μm2；實驗組PCNA陽性肌細胞核數量為（116.200 ± 5.357）個，對照組為（53.000 ±3.937）個；兩組比較差異均有統計學意義（P lt; 0.05）。 結論 bFGF 具有促進失神經腓腸肌的肌衛星細胞增殖、延緩肌纖維萎縮和抑制肌纖維向結締組織增生的作用。
目的 探討bFGF和副甲狀腺激素相關肽（parathyroid hormone-related protein，PTHrP）對TGF-β1誘導兔BMSCs向軟骨細胞分化的影響。 方法2月齡健康日本大耳白兔3只，雌雄不限，體重1.6～2.1 kg；取兔脛骨骨髓分離培養BMSCs。取第3代細胞行團塊狀立體培養，并按照不同誘導條件分為TGF-β1組（A組）、TGF-β1/bFGF組（B組）、TGF-β1/21 d bFGF組（C組）、TGF-β1/PTHrP組（D組）、TGF-β1/21d PTHrP組（E組）。于團塊狀立體培養開始時，各組均加入10 ng/mL TGF-β1；B、D組同時加入10 ng/mL bFGF或10 ng/mL PTHrP；C、E組于培養21 d時對應加入10 ng/ mL bFGF或10 ng/mL PTHrP。培養后1、2、3、4、5、6周檢測各組BMSCs向軟骨細胞分化的標志性基因Ⅰ型膠原（collagen type Ⅰ，ColⅠ）、ColⅡ、ColⅩ和基質金屬蛋白酶（matrix metalloproteinases，MMP）13的表達，1、2、3、4、6周檢測ALP活性，6周時行1，9二甲基亞甲藍（1，9-dimethylmethylene blue，DMMB）染色觀察細胞外基質分泌情況。 結果RT-PCR檢測示，3周后C、E組ColⅠ基因表達呈顯著下降趨勢，4、5周時A組顯著高于C、E組（P lt; 0.05），3～6周A組顯著高于B、D組（P lt; 0.05）；B、C組3、4周時及D、E組3周時比較，差異有統計學意義（P lt; 0.05）。C、E組3周后ColⅡ、ColⅩ基因表達均逐漸下降，4～6周時顯著低于A組（P lt; 0.05）；B、D組各時間點兩基因表達均未見顯著升高，與A組比較差異均有統計學意義（P lt; 0.05）。A組各時間點MMP-13均未見明顯表達，3周時B組與A、C組比較差異有統計學意義（P lt; 0.05），D組顯著高于A、E組（P lt; 0.05）。隨著時間延長A組ALP活性逐漸升高，4周后C、E組顯著下降，均低于A組（P lt; 0.05）；B、C組間及D、E組間比較，僅在2、3周時差異有統計學意義（P lt; 0.05）。DMMB染色顯示6周時A組軟骨陷窩明顯，其余各組軟骨陷窩明顯較少。 結論bFGF和PHTrP能通過改變軟骨細胞外基質的合成和分解，抑制TGF-β1誘導的兔BMSCs向軟骨細胞分化。這種抑制作用不僅通過抑制ColⅩ基因表達而實現，可能還通過抑制其他軟骨分化相關蛋白實現。
【摘 要】 目的 音猬因子（Sonic hedgehog，Shh）介導的信號參與調控血管生成的重要環節。研究不同濃度的重組Shh-N（recombinant Shh N-termitant，rShh-N）對BMSCs表達和分泌VEGF和bFGF的影響。 方法 取健康3日齡SD大鼠骨髓分離培養BMSCs，體外擴增至第3代，分別用含0、10、100、200 ng/mL rShh-N的L-DMEM培養BMSCs，作為A、B、C、D組。培養12、24、48、72 h后行ELISA法檢測各組上清液中VEGF和bFGF的濃度，實時熒光定量PCR法檢測各組VEGF和bFGF mRNA的表達水平。 結果 在基因表達水平上，D組各時間點的VEGF和bFGF mRNA表達量均明顯高于A組（P lt; 0.05），且在12、48 h表達量高于24、72 h（P lt; 0.01）；C組在各時間點均促進bFGF mRNA表達（P lt; 0.05），在24～72 h促進VEGF mRNA表達（P lt; 0.05），且在72 h時表達量均最高（P lt; 0.01）；B組在12 h抑制VEGF mRNA表達（P lt; 0.05），48 h和72 h表現出促進作用（P lt; 0.05），在12～48 h明顯促進bFGF mRNA表達（P lt; 0.05），且在48 h時的表達量最高（P lt; 0.01）。在蛋白水平上，D組各時間點VEGF和bFGF分泌量均高于A組（P lt; 0.01）；C組在24～72 h VEGF和bFGF分泌量明顯多于A組（P lt; 0.05）；B組在12 h和48 h抑制VEGF的分泌（P lt; 0.05），24 h增加其分泌作用（P lt; 0.05），而在24 h和48 h促進bFGF的分泌（P lt; 0.05）。各組在48 h和72 h時的VEGF和bFGF分泌量明顯多于12 h和24 h（P lt; 0.05）。 結論 rShh-N可促進BMSCs表達和分泌VEGF和bFGF，為進一步探討rShh-N和MSCs聯合應用于治療缺血性相關疾病以及促進骨修復重建的可行性提供了實驗依據。
目的探討以殼聚糖為載體、采用乳化交聯法制備的bFGF殼聚糖微球體外釋放特性，為下一步實驗奠定基礎。 方法應用0.6%三聚磷酸鈉溶液作為交聯劑，1.5%殼聚糖溶液作為載體，采用乳化交聯法制備bFGF殼聚糖微球。激光粒度及Zeta電位分析儀檢測微球粒徑分布，掃描電鏡觀察形態；ELISA法計算bFGF殼聚糖微球載藥量、包封率及體外釋藥規律。 結果bFGF殼聚糖微球粒徑為20.312～24.152 μm；掃描電鏡觀察顯示微球表面光滑圓整，無明顯孔隙，分布均勻，分散性好。載藥量和包封率分別為（7.57 ± 0.34）mg/g及95.14% ± 1.58%。bFGF殼聚糖微球可持續體外釋放bFGF 24 d；bFGF濃度隨時間延長逐漸升高，第24天達（820.45 ± 21.34）ng/mL；微球體外釋藥具有突釋效應，突釋率為18.08%，24 d累計釋放率為82.05%。 結論乳化交聯法制備bFGF殼聚糖微球操作簡便，微球表面光滑、分布均勻，分散性好，載藥量和包封率均較高，體外釋藥較穩定且釋放率較高，是一種較理想的制備bFGF殼聚糖微球的方 法。
目的 bFGF-2 具有促進組織或血管形成的作用，通過局部應用bFGF-2 評估其對糖尿病大鼠脛骨種植體周圍骨結合的影響。 方法 采用W/O/W 雙層乳液法制備負載bFGF-2 的聚乳酸- 聚羥基乙酸共聚物[poly（lacticco-glycolic acid，PLGA）] 微球。SPF 級9 周齡雄性SD 大鼠35 只，體重220 ～ 250 g，取10 只作為正常對照組，常規飼料喂養；另外25 只經高脂高糖飼料喂養后腹腔注射鏈脲佐菌素（30 mg/kg），其中20 只成功建立2 型糖尿病模型后，隨機分為糖尿病對照組和bFGF-2 干預組（n=10）。各組實驗動物分別于右側脛骨近骺端制備種植窩，植入經微弧氧化表面處理的純鈦種植體；其中bFGF-2 干預組在種植體植入前從種植窩抽血與bFGF-2 PLGA 微球均勻混合，在血液初凝時充分貼附在種植體表面粗糙螺紋間的微孔內。術后4、8 周，取出帶種植體的脛骨行組織學觀察，比較各組大鼠種植體周圍骨結合情況。 結果 術后4 周，正常對照組種植體周圍大部分被新生薄層的板狀骨環繞，骨板連續性較好；而糖尿病對照組種植體周圍結合骨板較薄，連續性較差，可見一定量的新生骨，存在較多纖維組織顆粒，同時有廣泛的區域骨組織吸收；bFGF-2 干預組沿種植體界面可見新骨形成明顯，骨板連續性較好。術后8 周各組種植體周圍骨結合情況與術后4 周相似。術后4 周，糖尿病對照組種植體周圍骨- 種植體接觸率顯著低于正常對照組和bFGF-2 干預組，差異有統計學意義（P lt; 0.05）；bFGF-2 干預組雖然低于正常對照組，但差異無統計學意義（P gt; 0.05）。術后8 周，正常對照組及bFGF-2 干預組均顯著高于糖尿病對照組，差異有統計學意義（P lt; 0.05）；bFGF-2 干預組與正常對照組比較，差異無統計學意義（P gt;0.05）。 結 論 將bFGF-2 PLGA 微球加載于糖尿病大鼠種植體周圍可以形成較好的骨結合效果。
目的 探討局部單次使用bFGF 及5- 氟尿嘧啶（5-fluorouracil，5-FU）促進屈肌腱愈合和防止粘連形成的效果。 方法 成年雄性來亨雞90 只，體重3.0 ～ 3.5 kg，隨機分為3 組，每組30 只。顯露實驗動物右爪第3 趾趾深屈肌腱，A 組切斷肌腱后在斷端使用纖維蛋白封閉劑（fibrin sealant，FS）0.6 μL，原位縫合修復橫斷肌腱；B 組肌腱斷端使用bFGF 和FS 混合物 0.6 μL（內含bFGF 500 ng），原位縫合修復橫斷肌腱；C 組在肌腱切斷前先用5-FU 浸泡肌腱，其余處理同B 組。術后觀察實驗動物一般情況，于1、2、4、8 周每組各取6 只雞第3 趾行大體及組織學觀察，術后8 周每組另取6 只雞第3 趾行生物力學測定。 結果 術后實驗動物全部存活至實驗完成，無肌腱斷裂發生。術后8 周，A 組肌腱粘連程度與B、C 組比較，差異均無統計學意義（P gt; 0.05）；C 組粘連程度較B 組輕（P lt; 0.05）。組織學觀察示，術后1、2、4 周A 組腱鞘、腱外膜及腱實質的成纖維細胞數均較B 組少（P lt; 0.05）；C 組在腱鞘、腱外膜少于A、B 組（P lt; 0.05），而在腱實質比A 組多（P lt; 0.05），與B 組比較差異無統計學意義（P gt; 0.05）。術后8 周，各組間成纖維細胞數比較差異均無統計學意義（P gt; 0.05）。術后4、8 周A 組腱鞘、腱外膜及腱實質的膠原纖維含量均少于B 組（P lt; 0.05）。在腱鞘、腱外膜，術后4 周A 組多于C 組（P lt; 0.05），術后8 周兩組間差異無統計學意義（P gt; 0.05）；在腱實質，各時間點A 組均少于C 組（P lt; 0.05）。各時間點B 組在腱鞘、腱外膜的膠原纖維含量均多于C 組（P lt; 0.05），而在腱實質兩組間差異無統計學意義（P gt; 0.05）。生物力學測定：A、B、C 組肌腱滑動距離分別為（3.51 ± 0.56）、（2.84 ± 0.42）、（4.56 ± 0.59） mm，屈曲功分別為（14.08 ± 1.85）、（20.62 ± 3.52）、（10.91 ± 1.53）N·mm，最大抗拉力分別為（11.26 ± 1.83）、（15.02 ± 2.20）、（14.4 ± 1.57） N。各組肌腱滑動距離和屈曲功比較，差異均有統計學意義（P lt; 0.05）；B、C 組間最大抗拉力差異無統計學意義（P gt; 0.05），但均大于A 組（P lt; 0.05）。 結論 局部單次使用bFGF 及5-FU 在有效促進雞屈肌腱愈合的同時能減輕肌腱粘連。
目的 壞死骨的血管再生及骨修復能力與VEGF、bFGF 與BMP-2 多種生長因子關系密切，通過觀察股骨頸骨折、創傷性及非創傷性股骨頭缺血性壞死（avascular necrosis of femoral head，ANFH）的股骨頭局部上述因子的表達變化，并與其組織病理學的骨質含量指標進行相關性分析，為進一步探討ANFH 的發病機制及臨床針對不同病因進行個性化治療提供實驗依據。 方法 取59 例人工全髖關節置換術患者自愿捐贈的股骨頭標本進行觀察。創傷性ANFH 22 例（A 組），Ficat 分期：Ⅲ期13 例，Ⅳ期9 例。非創傷性ANFH 19 例（B 組），Ficat 分期：Ⅲ期11 例，Ⅳ期8 例；其中激素性10 例，酒精性7 例，原因不明2 例。新鮮股骨頸骨折18 例（C 組）。3 組患者性別、年齡等一般資料比較，差異均無統計學意義（P gt; 0.05）。采用雙能X 線骨密度儀測量股骨頭負重區骨密度；大體觀察組織病理學改變，HE 染色光鏡及掃描電鏡下觀察其病理變化，計算空骨陷窩百分比及骨小梁面積百分比，并采用原位雜交技術分別對其VEGF、bFGF、BMP-2 mRNA表達進行檢測。 結果 A、B組骨密度均低于C組，B組低于A組，組間差異均有統計學意義（P lt; 0.05）。A、B 組股骨頭形態不規則，光鏡下見壞死區骨小梁稀疏、不完整，有大量空骨陷窩；健存區A 組有較多纖維組織增生，B 組髓腔內脂肪細胞增生、肥大。掃描電鏡示A、B 組大多骨細胞脂肪變性、壞死，骨基質內見脂肪細胞增生。C 組均呈正常股骨頭結構。A、B 組空骨陷窩百分比均高于C 組，骨小梁面積百分比均低于C 組，差異均有統計學意義（P lt; 0.05）；A、B 組間僅空骨陷窩百分比差異有統計學意義（P lt; 0.05）。A 組與B 組VEGF、BMP-2、bFGF mRNA 陽性染色面積百分比及吸光度（A）值均明顯低于C 組（P lt; 0.05）；A 組BMP-2、bFGF mRNA 兩指標均較B 組高（P lt; 0.05），但VEGF mRNA A、B組間差異無統計學意義（P gt; 0.05）。上述各因子表達強度與骨密度、骨小梁面積百分比成正相關，而與空骨陷窩百分比成負相關。 結論 創傷性ANFH 的股骨頭修復能力強于非創傷性ANFH，創傷性與非創傷性ANFH 股骨頭局部VEGF、bFGF、BMP-2 mRNA 表達均降低。