目的 異氟醚預處理能對大鼠腎臟發揮急性期缺血保護作用，但急性期保護作用僅能維持2 ～ 3 h。探討異氟醚延遲性預處理是否能減輕腎臟缺血再灌注損傷，以及缺氧誘導因子1α（hypoxia inducible factor 1α，HIF-1α）是否參與調節該保護作用。 方法 取雄性C57BL/6 小鼠52 只，體重20 ～ 25 g，隨機分為4 組（n=13）：對照組（A組）、PBS 加異氟醚預處理組（B 組）、無意義小干擾RNA（small interference RNA，siRNA）加異氟醚預處理組（C 組）和HIF- 1α siRNA 加異氟醚預處理組（D 組）。氣體暴露前24 h C、D 組小鼠經尾靜脈分別給予含有50 μg 無意義siRNA 或HIF-1α siRNA 的無RNA 酶的PBS 1 mL；A、B 組給予等體積PBS。B、C、D 組給予含1.5% 異氟醚和25%O2 的氣體持續吸入2 h，A 組僅吸入含25%O2 的氣體2 h。氣體暴露后24 h，采用Western blot 技術檢測腎臟組織中HIF-1α 和促紅細胞生成素（erythropoietin，EPO）蛋白的表達；制備腎缺血再灌注損傷，于再灌注后24 h 檢測血清肌酐（serum creatinine，SCr）和血尿素氮（blood urea nitrogen，BUN）水平，并觀察腎組織病理學變化。 結果 與A 組比較，B、C 組HIF-1α 和EPO蛋白表達明顯增加（P lt; 0.01），SCr 和BUN 水平以及腎小管評分明顯降低（P lt; 0.01）；D 組HIF-1α 蛋白表達及SCr、BUN水平較A 組明顯下降（P lt; 0.01）。與B、C 組比較，D 組HIF-1α 和EPO 蛋白的表達明顯下降（P lt; 0.01），SCr 和BUN 水平以及腎小管評分明顯增加（P lt; 0.01），腎組織損傷明顯加重。 結論 異氟醚延遲性預處理能明顯減輕腎缺血再灌注損傷，HIF-1α 參與調控異氟醚的保護作用。
目的 激素性股骨頭缺血性壞死（osteonecrosis of the femoral head，ONFH）防治效果不理想，探討六味地黃丸預防ONFH 的可行性及分子機制，為預防激素性ONFH 提供實驗依據。 方法 取成年健康昆明小鼠36 只，體重40 ～ 50 g，平均46 g，隨機分為3 組（n=12）：空白對照組（A 組）、馬血清/ 激素組（B 組）、馬血清/ 激素/ 六味地黃丸組（C 組）。B、C 組均2 次腹腔注射馬血清，2 次劑量分別為10 mL/kg 及5 mL/kg，間隔2 周；第2 次注射馬血清同時肌肉注射醋酸潑尼松龍45 mL/（kg·d），共5 d，制備激素性ONFH 小鼠模型。于應用激素同時B 組灌服生理鹽水10 mL/（kg·d），C 組灌服六味地黃丸2 g/（kg·d）；A 組同時間點肌肉注射及灌服等量生理鹽水。觀察小鼠一般情況，于第1 次激素注射后2、4、8 周處死小鼠，大體觀察股骨頭情況，取雙側股骨頭及肝臟行組織學及免疫組織化學染色觀察，TUNEL 法檢測細胞凋亡情況。 結果 B、C 組分別于第2 次腹腔注射馬血清后死亡2 只及1 只小鼠，余小鼠均存活至實驗完成。3 組各時間點股骨頭外觀、形態及關節軟骨面均正常。組織學觀察示A 組各時間點肝臟及股骨頭均正常。B 組第1 次激素注射后2 周肝細胞腫脹，細胞內可見小脂肪空泡，肝索結構不清，肝竇變窄；股骨頭區骨小梁纖細、稀疏，部分可見斷裂；且隨時間推移，變化愈顯著。C 組各時間點肝臟及股骨頭與A 組相似。B 組股骨頭空骨陷窩率高于A、C 組（P lt; 0.01），A、C 組間比較差異無統計學意義（P gt; 0.05）。免疫組織化學染色觀察，各時間點B 組與A、C 組比較，股骨頭骨保護素局部表達陽性率下降，骨保護素配體局部表達陽性率上升，差異均有統計學意義（P lt; 0.01）。細胞凋亡檢測示B 組較A、C 組骨細胞凋亡指數顯著升高，差異有統計學意義（P lt; 0.01），A、C 組間2、4 周比較差異有統計學意義（P lt; 0.05），8 周差異無統計學意義（P gt; 0.05）。 結論 六味地黃丸具有改善骨代謝、保護骨細胞、降脂等作用，可通過抑制小鼠股骨頭局部骨細胞凋亡、拮抗激素影響股骨頭內骨保護素/ 骨保護素配體表達，起到預防早期激素性ONFH 的作用。
目的 在人工全髖關節翻修術中發現假體周圍大量金屬離子聚集和NF-κB 受體活化因子配體（re ceptor activator of NF-κB ligand，RANKL）表達的增加，通過觀察Co2+、Cr3+ 對小鼠成骨細胞RANKL、骨保護素（osteoprotegerin，OPG）表達的影響，探討金屬離子與假體無菌性松動關系。 方法 取濃度為1 × 105 個 /mL 體外培養的小鼠成骨細胞，根據培養基不同分兩組：實驗組采用含10 mg/L CoCl2 及150 mg/L CrCl3 溶液的培養基；對照組采用不含金屬離子的培養基。培養24、48 h，采用RT-PCR 和ELISA 法檢測RANKL、OPG mRNA 及蛋白表達。 結 果 RT-PCR 檢測示培養24、48 h 兩組均見RANKL、OPG mRNA 的表達，實驗組表達量較對照組高，以RANKL 增加顯著，差異有統計學意義（P lt; 0.05）；培養24、48 h，實驗組RANKL/OPG mRNA 的比值分別為0.860、1.232，較對照組0.695、0.688 明顯增加，差異有統計學意義（P lt; 0.05）。ELISA 檢測顯示，實驗組RANKL、OPG 蛋白表達量較對照組明顯增多，差異有統計學意義（P lt; 0.05）。 結論 Co2+、Cr3+ 可刺激小鼠成骨細胞RANKL、OPG mRNA 的表達并促進其蛋白的分泌，以RANKL 增加顯著，從而促進破骨細胞的形成與活化以及假體無菌性松動的發生。
目的 不同強度和持續時間下FGF 信號的生物效應可能不同，探討FGF 信號持續增強對體外培養小鼠骺板生長的影響及可能機制。 方法 取胚胎期15 d 的C57BL/6J 小鼠掌骨建立體外培養模型，分為3 組（各40 只掌骨）。對照組加入0.1% DMSO，bFGF 組加入100 μg/L bFGF 和0.1% DMSO，PD98059 組加入100 μg/L bFGF 和50μmol/ L PD98059（含0.1% DMSO）。培養6 d 后用Calcein 溶液對掌骨的鈣化組織染色，測量其總長度（total length，TL）和鈣化組織長度（ossified tissue length，OSL）的增加百分率。培養7 d 提取骺板軟骨細胞的RNA，實時熒光定量PCR 儀檢測Ⅱ型膠原（collagen type Ⅱ，Col Ⅱ）、Col Ⅹ、Ihh（Indian hedgehog）基因表達的變化。 結 果 胚胎小鼠的掌骨在體外培養條件下繼續生長發育。培養6 d 后，bFGF 組掌骨TL 增加百分率與對照組比較差異無統計學意義（P gt; 0.05），OSL增加百分率顯著小于對照組（P lt; 0.05）；PD98059 組掌骨TL 增加百分率和OSL 增加百分率與對照組比較差異均無統計學意義（P gt; 0.05），但均較bFGF 組顯著提高（P lt; 0.05）。培養7 d，bFGF 組Ihh、Col Ⅱ和Col Ⅹ基因表達的相對含量均較對照組顯著降低（P lt; 0.05）；PD98059 組Col Ⅱ和Col Ⅹ基因表達的相對含量與對照組比較差異無統計學意義（P gt; 0.05），但顯著高于bFGF 組（P lt; 0.05），Ihh 基因表達的相對含量均顯著高于對照組和bFGF 組（P lt; 0.05）。 結論 持續的FGF 信號增強可能通過Ihh 下調來影響Col Ⅱ和Col Ⅹ表達，使體外培養的骺板生長遲滯。細胞外信號調節激酶信號通路可能在上述機制中發揮重要作用。
目的 采用簡單貼壁培養方法誘導胚胎干細胞（embryonic stem cell，ESC）分化為內皮樣細胞，為組織工程血管及細胞替代治療提供新的種子細胞。 方法 小鼠ESC 株SV129 按2 × 104 個/cm2 密度傳代培養，采用ESC培養基添加1 000 U/mL 白血病抑制因子（leukaemia inhibitory factor，LIF）維持其未分化狀態。撤除LIF，ESC 懸浮培養形成擬胚體（embryoid body，EB），將培養第4 天的EB 置于含VEGF 的培養基中貼壁培養，誘導分化。采用免疫組織化學染色、流式細胞儀分析、DiI 標記的乙酰化低密度脂蛋白（1，1-dioctadecyl-3，3，3，3-tetramethylindocarbocyanine-labeled acetylated low density lipoprotein，DiI-Ac-LDL）攝取實驗以及透射電鏡檢查鑒定分化細胞的性質。 結果 分化產生的內皮樣細胞具有內皮細胞形態特征，能攝取DiI-Ac-LDL。ESC 誘導分化培養產生的第15 代細胞免疫組織化學染色呈Flk-1 和CD31 陽性；流式細胞儀檢測ESC 傳至9 代后CD31 陽性細胞gt; 90%；透射電鏡可見懷布爾- 帕拉德體及內皮細胞間緊密連接。 結論 采用簡單貼壁培養的方法，單獨使用VEGF 即可誘導ESC 分化為內皮樣細胞。誘導培養方法操作簡便，經濟實用，可為組織工程血管及細胞替代治療提供所需內皮樣細胞
目的 探討熱休克蛋白60（heat shock protein 60，HSP60）對小鼠移植皮片成活的影響及其機制。 方 法 選用60 只C57BL/6（H-2b）小鼠為受體，45 只BALB/C（H-2d）小鼠、15 只CBA/N（H-2k）為供體，均為8 ～ 12周齡近交系雌性小鼠。受體小鼠剪下1 cm × 1 cm 全層皮膚，干紗布清創，即為植床；隨機分為4 組，每組15 只。A 組：無菌取供體BALB/C（H-2d）小鼠背部1 cm × 1 cm 全層皮片，刮去皮下組織后移植至受體小鼠背部；B 組：受體小鼠背部皮下注射0.1 mL 不完全弗氏佐劑（imcompleted Freund’s adjuvant，IFA），2 周后行BALB/C（H-2d）小鼠皮膚移植；C 組：受體小鼠背部皮下注射經0.1 mL IFA 乳化后的50 μg HSP60，2 周后行BALB/C（H-2d）小鼠皮膚移植；D 組：受體小鼠背部皮下注射經0.1 mL IFA 乳化后的50 μg HSP60，2 周后行CBA/N（H-2k）小鼠皮膚移植。B、C、D 組供體皮膚移植方法同A 組。術后觀察移植皮片成活時間；移植術后7、25 d 行單向混合淋巴細胞反應及混合淋巴細胞培養上清液細胞因子檢測；術后7 d 行遲發型超敏反應測定。 結果 A、B、C、D 組移植皮片成活時間分別為（12.4 ± 0.5）、（11.6 ± 0.8）、（29.3 ± 2.6）及（27.6 ± 2.1） d；A、B 組與C、D 組比較，差異有統計學意義（P lt; 0.05），A、B 組間及C、D 組間比較，差異無統計學意義（P gt; 0.05）。皮膚移植術后7 d，A、B、C、D 組混合淋巴細胞反應每分鐘放射脈沖數（counts of per minute impulse，cmp）值分別為12 836 ± 1 357、11 876 ± 1 265、6 581 ± 573 及6 843 ± 612；A、B 組與C、D 組比較，差異有統計學意義（P lt; 0.05）；A、B 組間及C、D 組間比較差異無統計學意義（P gt; 0.05）；術后25 d，各組cpm 值分別為13 286 ± 1 498、12 960 ± 1 376、11 936 ± 1 265 及12 374 ± 1 269，各組間差異無統計學意義（P gt; 0.05）。皮膚移植術后7 d，C、D 組混合淋巴細胞培養上清液IL-10 高于A、B 組，IL-2、干擾素γ（interferon γ，IFN-γ）低于A、B 組（P lt; 0.05），A、B 組間及C、D 組間差異均無統計學意義（P gt; 0.05） ；術后25 d，各組IL-2、IL-10 及IFN-γ 差異無統計學意義（P gt; 0.05）。皮膚移植術后7 d，A、B、C、D組受體小鼠對供體小鼠脾細胞的遲發型超敏反應為（0.84 ± 0.09 ）、（0.81 ± 0.07）、（0.43 ± 0.05）及（0.46 ± 0.03）mm；A、B組與C、D 組比較，差異有統計學意義（P lt; 0.05），A、B 組間及C、D 組間差異無統計學意義（P gt; 0.05）。 結論 HSP60對免疫耐受的誘導和維持有一定作用。
目的 觀察米諾環素對視網膜色素變性（RP）的rd小鼠［C3H/HeN (Pde6brd-/rd-)］RP過程的影響。方法 40只新生rd小鼠隨機分為10組，5組為實驗組，5組為對照組，每組4只小鼠。實驗組，出生后每日腹腔注射米諾環素22.5 mg/kg；對照組，出生后每日腹腔注射生理鹽水10 ml/kg。在出生后1、7、14、21、28 d各處死一組實驗組和對照組小鼠，取眼球做組織學觀察并行凋亡細胞檢測，并對兩組視網膜光感受器細胞數、外核層厚度以及凋亡細胞數目進行統計分析。結果 （1）rd小鼠出生后7 d光感受器細胞開始凋亡，14 d達高峰，28 d光感受器細胞完全消失；（2）出生后7 d實驗組光感受器細胞數目和外核層厚度與對照組比較差異無統計學意義；（3）出生后14、21 d實驗組光感受器細胞數目和外核層厚度多于對照組相應時間點，差異有統計學意義（14 d：t=-3.03、P=0.016，t=-4.469，P=0.004；21d: t=-8.782、P＜0.001，t=-3.497、P=0.004）；（4）出生后7、14 d實驗組外核層凋亡細胞數目少于對照組相應時間點，差異有統計學意義（t=-3.497、P=0.004，t=-8.782、P＜0.0001）。結論 米諾環素在rd小鼠RP早期可以延緩光感受器細胞丟失，但不能完全阻止RP的發生。
目的觀察抗血管內皮生長因子單克隆抗體Bevacizumab眼內注射對非肥胖糖尿病小鼠視網膜微血管增生的預防作用。方法選取30只非肥胖糖尿病小鼠，左眼為實驗眼，右眼為對照眼。實驗眼眼內注入1 mu;l Bevacizumab(25 mg/1 ml)溶液， 對照眼眼內注入等量生理鹽水。分別在注射后1周，1、2個月時隨機各選取10只鼠，取出雙側眼球，行視網膜微血管內皮細胞超微結構觀察以及視網膜CD34和血管內皮生長因子（VEGF）免疫組織化學測定，計算機圖像分析對比兩組間陽性染色密度的差異。結果 VEGF和CD34陽性表達均為棕黃色著色，CD34的染色定位在血管內皮細胞上。在注射后1周、1個月時，兩組間VEGF表達比較，差異有統計學意義（t=21.6, t=13.5; P＜0.01 ）；注射后2個月時，兩組間VEGF表達比較，差異無統計學意義（t=0.9, P＞0.05）。注射后1周時，兩組間CD34表達比較，差異無統計學意義（t=1.3, P＞0.05）；注射后1、2個月時，兩組間CD34表達比較，差異有統計學意義（t= 3.2, P＜0.01; t=2.7, P＜0.05）。注射后各時間段，視網膜血管內皮細胞的微觀結構都未發生明顯改變。結論 Bevacizumab眼內注射可預防非肥胖糖尿病小鼠視網膜微血管的異常增生。 （中華眼底病雜志，2008，24：180-183）
目的 構建在視網膜組織特異性表達的人血管內皮生長因子（VEGF）165基因。 方法 用聚合酶鏈反應(PCR)方法從BLAB/C鼠全基因組擴增能在視網膜組織特異性表達的rho啟動子，經限制性內切酶純化后克隆于質粒pcDNA3.1+-VEGF165中，建立重組質粒pcDNA3.1+-rho-VEGF165，通過限制性內切酶酶切分析及PCR鑒定篩選出正確重組質粒pcDNA3.1+-rho-VEGF165,由jetPEI介導轉染人視網膜色素上皮細胞和人臍靜脈內皮細胞，并通過免疫組織化學染色以及繪制細胞生長曲線檢測在人視網膜色素上皮細胞和人臍靜脈內皮細胞中VEGF蛋白的表達。 結果 在人視網膜色素上皮細胞中，重組質粒pcDNA3.1+-rho-VEGF165比質粒pcDNA3.1+-rho-VEGF165的VEGF蛋白表達強，在人臍靜脈內皮細胞，兩者的表達量無明顯差別。 結論 pcDNA3.1+-rho-VEGF165載體的構建為進一步研究VEGF在視網膜新生血管形成中的致病機理提供基礎材料，并為進一步建立視網膜特異性表達VEGF轉基因鼠模型建立了基礎。 (中華眼底病雜志,2005,21:106-109)
目的研究晶狀體特異性表達的制瘤素（OSM）誘發視網膜變性的信號途徑。方法將去除部分序列的小鼠OSM cDNA（661堿基對）連接到αA晶狀體蛋白（αA-crystallin）啟動子上，然后用顯微注射的方法將其導入單細胞胚胎內，建立OSM轉基因鼠。采用逆轉錄多聚酶鏈反應（RT-PCR）檢測非轉基因鼠和OSM轉基因鼠視網膜中OSM受體gp130/OSMRβ mRNA的表達，兔抗磷酸化的轉錄信號傳遞和激活因子-3（STAT-3）抗體檢測磷酸化的STAT-3蛋白質的表達，鼠抗細胞色素C抗體檢測視網膜中細胞色素C的分布。結果在新生的非轉基因鼠視網膜中有gp130/OSMRβ mRNA的表達。胚胎期17.5 d，OSM轉基因鼠視網膜細胞核中有大量的磷酸化的STAT-3的積聚。出生后1 d，OSM轉基因鼠視網膜中有大量細胞色素C分布。結論晶狀體特異性表達的OSM可能作用于視網膜中gp130/OSMRβ受體，激活STAT-3，引起細胞色素C從線粒體中大量釋放，誘發廣泛的視網膜變性。(中華眼底病雜志,2005,21:167-169)