構建含人IL-1 受體拮抗蛋白（IL-1 receptor antagonist，IL-1Ra）逆轉錄病毒表達載體（PLXRNIL-1Ra），體外轉染人骨關節炎（osteoarthritis，OA）軟骨細胞，研究其相關特性。 方法 利用細菌內同源重組技術快速構建PLXRN-IL-1Ra 逆轉錄病毒重組質粒，經測序及酶切鑒定正確后轉染PT67 細胞，包裝成為重組PLXRN-IL-1Ra 逆轉錄病毒，并使用小鼠腎成纖維細胞系NIH/3T3 對病毒進行滴度測定。實驗分為3 組：未轉染組（A 組）、PLXRN 空質粒轉染組（B 組）、PLXRN-IL-1Ra 轉染組（C 組），病毒感染人OA 軟骨細胞后，RT-PCR 檢測細胞內IL-1Ra 基因的轉錄和表達；ELISA 法檢測細胞培養上清液中人IL-1Ra 蛋白表達。 結果 酶切鑒定及基因測序證實重組逆轉錄病毒質粒中含有人IL-1Ra cDNA，測定包裝的病毒滴度為3 × 104 CFU/mL。原代軟骨細胞體外培養呈多角形或梭形，甲苯胺藍染色見細胞內有紫色異染顆粒。RT-PCR 結果顯示在C 組出現311 bp 人IL-1Ra mRNA 片段，A、B 組未見人IL-1Ra mRNA 的表達帶，GAPDH 在各組均有表達。ELISA 檢測發現C 組細胞上清有一定量的人IL-1Ra 表達，蛋白濃度為（60.47 ± 15.13）ng/L，A 組和B 組均無人IL-1Ra 表達。 結論 構建的IL-1Ra 逆轉錄病毒表達載體成功地感染人OA 軟骨細胞，并在體外獲得穩定表達，為將表達人IL-1Ra 基因的人OA 軟骨細胞用于OA 基因治療提供了實驗依據。
目的系統評價白細胞介素1β（IL-1β）基因-511C/T多態性與慢性阻塞性肺疾病（COPD）發病風險的相關性。 方法計算機檢索PubMed、EMbase、CNKI、CBM、VIP和WanFang Data數據庫，納入關于IL-1β基因-511C/T多態性與COPD發病風險相關性的病例-對照研究，檢索時限均為建庫至2014年5月。由2位研究者按納入與排除標準獨立篩選文獻、提取資料并評價納入研究的方法學質量后，采用RevMan 5.0軟件進行Meta分析。 結果共納入來自9篇文獻的10個病例-對照研究，包括1 171例COPD患者和1 268例對照。Meta分析結果顯示，IL-1β基因-511C/T多態性與COPD發病風險無相關性[TT+CT vs.CC：OR=1.06，95% CI（0.66，1.70），P=0.82；TT vs.CT+CC：OR=0.87，95% CI（0.60，1.26），P=0.32；TT vs.CC：OR=0.95，95% CI（0.51，1.75），P=0.86；CT vs.CC：OR=1.10，95% CI（0.71，1.70），P=0.15；T vs.C：OR=0.97，95% CI（0.72，1.30），P=0.84]。亞組分析結果顯示，IL-1β-基因-511C/T多態性與亞洲人和白種人COPD發病風險均不相關。 結論IL-1β基因-511C/T多態性可能不是COPD發病的危險因素。
目的 研究 NOD 樣受體熱蛋白結構域相關蛋白 3（NLRP3） 炎性小體及其下游炎癥因子在慢性阻塞性肺疾病（簡稱慢阻肺）患者和健康人之間表達的差異，揭示 NLRP3 炎性小體在慢阻肺發病機制中的可能作用。 方法 選取 2016 年 11 月至 2017 年 5 月住院的 40 例慢阻肺患者納入急性加重期組，其經過治療進入穩定期后納入穩定期組，選取 40 例健康體檢者納入對照組。采集各組一般資料和外周血，熒光定量 PCR 法測定外周血單個核細胞中 NLRP3 mRNA 水平，酶聯免疫法檢測血漿白細胞介素-18（IL-18）和白細胞介素-1β（IL-1β）水平。 結果 急性加重期組慢阻肺患者的 NLRP3 mRNA、IL-18 和 IL-1β 水平顯著高于穩定期組［2.11±0.77，12.79（7.10，43.13）pg/ml，17.02（8.36，52.21）pg/ml 比1.60±0.44，10.66（6.32，18.59）pg/ml，13.34（7.07，16.89）pg/ml，P<0.05］。急性加重期組慢阻肺患者的 NLRP3 mRNA、IL-18 和 IL-1β 水平顯著高于對照組［2.11±0.77，12.79（7.10，43.13）pg/ml，17.02（8.36，52.21）pg/ml比 1.00±0.49，6.29（4.73，7.93）pg/ml，5.93（4.81，9.67）pg/ml，P<0.05］。穩定期組慢阻肺患者的 NLRP3 mRNA 、IL-18 和 IL-1β 水平顯著高于對照組 ［1.60±0.44，10.66（6.32，18.59）pg/ml，13.34（7.07，16.89）pg/ml 比 1.00±0.49，6.29（4.73，7.93）pg/ml，5.93（4.81，9.67）pg/ml，P<0.05］。急性加重期組血漿 IL-18 水平和白細胞計數、中性粒細胞百分比呈正相關 （r=0.372，P<0.05；r=0.386，P<0.05）；急性加重期組 NLRP3 mRNA 表達量和穩定期組 NLRP3 mRNA 表達量均與 CAT 評分正相關（r=0.387，P<0.05；r=0.399，P<0.05）。 結論 NLRP3 炎性小體參與慢阻肺患者的機體炎癥反應。
目的 探討 CD19+IL-10+ B 細胞及其亞群在結直腸癌患者外周血及其癌組織中的表達差異及臨床意義。方法 納入在西南醫科大學附屬醫院 2017 年 11 月至 2018 年 11 月期間確診為結直腸癌并行手術患者共 38 例，用流式細胞術檢測結直腸癌患者外周血、癌組織及其相應癌旁組織中 CD19+IL-10+ B 細胞及其3 種亞群 CD19+IL-10+CD24hiCD38hi B 細胞、CD19+IL-10+CD24intCD38int B 細胞及 CD19+IL-10+CD24hiCD38– B 細胞占 CD19+ B 細胞的百分比；另外納入同時間段在西南醫科大學附屬醫院健康體檢者共 37 例，僅抽取外周血同法分離細胞。比較 CD19+IL-10+ B 細胞及其亞群含量在結直腸癌和健康對照者外周血中以及在結直腸癌患者癌組織及其相應癌旁組織中的表達差異，并分析其與結直腸癌患者臨床病理特征的關系。結果 ① 結直腸癌患者外周血中 CD19+IL-10+ B 細胞和 CD19+IL-10+CD24hiCD38hi B 細胞含量明顯高于健康對照組（分別為：t=9.09，P<0.01；t=9.36，P<0.01），CD19+IL-10+CD24hiCD38– B 細胞含量明顯低于健康對照組（t=6.15，P<0.01），而 CD19+IL-10+CD24intCD38int B 細胞含量在 2 組間比較差異無統計學意義（t=1.78，P=0.08）。② CD19+IL-10+ B 細胞和 CD19+IL-10+CD24hiCD38hiB 細胞含量在結直腸癌患者的癌組織中明顯高于在其相應的癌旁組織中（分別為：t=11.67，P<0.01；t=19.64，P<0.01），而 CD19+IL-10+CD24intCD38int B 細胞和 CD19+IL-10+CD24hiCD38– B 細胞含量在二者間比較差異無統計學意義（分別為：t=1.72，P=0.09；t=1.57，P=0.12）。③ CD19+IL-10+ B 細胞及其亞群 CD19+IL-10+CD24hiCD38hi B 細胞含量在Ⅲ+Ⅳ期結直腸癌患者外周血中明顯高于Ⅰ+Ⅱ期者（t=5.39，P<0.01；t=3.13，P<0.01），而其他均未發現差異有統計學意義（P>0.05）。結論 CD19+IL-10+ B 細胞在結直腸癌患者的外周血和癌組織以及中晚期結直腸癌患者的外周血中均明顯增高，且其以 CD19+IL-10+CD24hiCD38hi B 細胞亞群升高為主，結果提示，CD19+IL-10+ B 細胞及其亞群 CD19+IL-10+CD24hiCD38hi B 細胞可能與結直腸癌的發生及進展有關。
目的 檢測單一免疫球蛋白白細胞介素1 受體相關蛋白( SIGIRR) 在正常肺組織及脂多糖( LPS ) 誘導的肺泡上皮細胞急性損傷中的表達。方法 收集手術切除的正常肺組織標本20 例,分別采用免疫組織化學、Western blot、RT-PCR 法檢測SIGIRR 的表達。以終濃度10 μg/mL的LPS 刺激人Ⅱ型肺泡上皮細胞來源的A549 細胞, 于刺激前, 刺激后3、6、12 及24 h 分別以Western blot 法檢測SIGIRR 表達的變化。將含有SIGIRR cDNA 全長的表達載體瞬時轉染A549 細胞, 使SIGIRR 在A549 細胞過表達。通過MTT 法檢測LPS 對A549 細胞的損傷作用。結果 不同檢測方法發現SIGIRR 在正常肺組織中均有表達; 免疫組織化學檢測可見SIGIRR 表達于肺泡上皮細胞。LPS 刺激后3、6 及12 h 時SIGIRR 表達較刺激前均下調, 24 h后回升至刺激前水平。MTT 試驗表明過表達SIGIRR 的A549 細胞在接受LPS 刺激后生長抑制率顯著低于對照組。結論 SIGIRR 能夠表達于正常肺組織, 且能夠減輕LPS 刺激導致的肺泡上皮細胞損傷。提示SIGIRR 可能參與了LPS 誘導的ALI的調節。
目的 比較乳酸乳球菌及植物乳桿菌對塵螨致變應性氣道炎癥小鼠的免疫調節作用,對其脾細胞MAPK 通路的影響及可能機制。方法 將實驗小鼠分對照組( N組) 、塵螨組( 單純塵螨致敏激發, M組) 、塵螨+ 乳酸乳球菌組及塵螨+ 植物乳桿菌組[ 塵螨致敏激發同時分別用乳酸乳球菌灌胃( L組) , 植物乳桿菌灌胃( P 組) ] , 末次激發后3 d 行肺組織病理學檢查, ELISA 法檢測脾細胞培養上清IL-10 水平, 流式細胞術檢測CD3 + CD4 + 脾細胞分泌IL-4 / IFNγ水平,Western blot 法檢測脾細胞中總的及磷酸化P38、ERK 和JNK 蛋白水平。結果 口服乳酸菌明顯減輕塵螨致敏激發導致的嗜酸細胞性氣道炎癥, 以喂服乳酸乳球菌更顯著。L 組及M組脾細胞培養上清IL-10 的生成顯著增加( P lt;0. 05) , 并以L組更明顯, 且其IL-10 的釋放率亦明顯高于其余三組( P lt;0. 05) ; 流式細胞術顯示L組和P組分泌IL-4 的CD4 + 細胞減少的同時, 總CD4 + 細胞比例反而增高, 以L 組為明顯。M組與P組磷酸化P38 表達水平較N組顯著增高, L 組與N組比較基本無變化, 各組間的磷酸化ERK 及JNK 無明顯差異。結論 口服乳酸乳球菌可改善塵螨所致小鼠嗜酸粒細胞性氣道炎癥, 其免疫調節可能與誘導CD4 + 調節T細胞, 分泌抑制性細胞因子IL-10, 下調P38 MAPK 通路活性, 從而下調Th2炎癥相關。
目的 觀察單免疫球蛋白白細胞介素1受體相關蛋白（SIGIRR）對高遷移率族蛋白B1（HMGB1）誘導的人肺泡上皮細胞株A549炎性反應的影響。方法 構建含有SIGIRR cDNA全長的真核表達載體pCDNA3.1（+），瞬時轉染人Ⅱ型肺泡上皮細胞來源的A549細胞，使SIGIRR在A549細胞中過表達，采用Western blot和RT-PCR法檢測其表達。HMGB1刺激A549細胞后，雙熒光素酶報告基因系統檢測轉染前后核轉錄因子κB（NF-κB）轉錄活性的改變，ELISA檢測轉染前后炎癥因子腫瘤壞死因子α（TNF-α）、白細胞介素1β（IL-1β）蛋白表達水平的變化。結果 轉染SIGIRR表達載體的A549細胞，其SIGIRR表達量顯著上升。HMGB1刺激后，雙熒光素酶報告系統檢測發現，NF-κB轉錄活性明顯升高，而轉染SIGIRR表達載體后NF-κB轉錄活性下降。ELISA實驗結果表明，過表達SIGIRR的A549細胞在接受HMGB1刺激后其炎癥因子TNF-α及IL-1β蛋白表達水平明顯低于對照組。結論 SIGIRR表達上調可以抑制HMGB1誘導的A549細胞產生炎癥因子TNF-α和IL-1β。A549細胞轉染前后NF-κB轉錄活性的改變提示SIGIRR的抗炎作用可能與其參與NF-κB轉錄活性的調控有關。
目的 骨性關節炎主要病理變化為關節軟骨的破潰丟失，鹽酸氨基葡萄糖（glucosamine hydrochloride capsules，OTL）可促進關節軟骨的修復。探討OTL 對兔骨性關節炎關節軟骨的作用機制，為臨床應用提供實驗依 據。 方 法 健康成年新西蘭大白兔36 只，雌雄各半，體重2.2 ～ 2.6 kg。隨機分為3 組（n=12）：假關節組（A 組）、前交叉韌帶切斷術（anterior cruciate ligament transection，ACLT）/ 生理鹽水組（B 組）、ACLT/OTL 組（C 組）。B、C 組行右膝ACLT 制備骨性關節炎模型；A 組只打開右側膝關節腔，不切斷前交叉韌帶。C 組于造模術后第2 天開始每天灌胃OTL（150 mg/kg），連續12 周；B 組于同一時間點給予等量生理鹽水灌胃；A 組自由飲食。術后觀察動物一般情況；12 周后處死動物，大體觀察膝關節軟骨面、關節囊和滑膜，取股骨髁脫鈣后，行HE 染色以及TGF-β1 和IL-1β 免疫組織化學觀察，并行Mankin 法評分。 結果 各組動物均存活至實驗完成，切口愈合良好。大體觀察，A 組關節滑液增多，關節面光滑完整；B 組關節面可見大小不等潰瘍；C 組膝關節面較光滑完整；3 組軟骨評分比較差異均有統計學意義（P lt; 0.05）。組織學觀察，A 組關節軟骨結構正常，細胞排列整齊；B 組關節軟骨層變薄，軟骨有碎裂現象，細胞排列紊亂；C 組軟骨細胞分層清晰有序，細胞形態較規則；A、B、C 組Mankin 評分分別為（1.04 ± 0.13）、（7.97 ± 0.12）、（2.81 ± 0.36）分，3 組評分比較差異有統計學意義（P lt; 0.05）。免疫組織化學染色觀察：A、B、C 組TGF-β1 評分分別為（50.62 ± 1.51）、（24.81 ± 1.28）、（41.57 ± 1.69）分；IL-1β 分別為（13.12 ± 1.21）、（62.53 ± 2.37）、（30.67 ± 1.28）分；3 組評分比較差異均有統計學意義（P lt; 0.05）。 結論 OTL150 mg/（kg·d）灌胃能部分阻止兔骨性關節炎關節軟骨退變，其作用機制可能是下調IL-1β 的表達，上調TGF-β1 的表達，從而延緩骨性關節炎的進展。
目的 褪黑素可提高軟骨生長因子的表達，刺激軟骨基質的合成；通過觀察注射褪黑素后大鼠骨性關節炎（osteoarthritis，OA）關節軟骨中BMP-2 和IL-1β 的表達，探討褪黑素對損傷軟骨的防治作用。 方法 SPF 級4 周齡SD 雄性大鼠40 只，體重120 ～ 150 g，隨機分為4 組，每組10 只。正常對照組（A 組）大鼠不作任何處理。OA 模型組（B組）、OA 模型/ 去松果體模型組（C 組）、OA 模型/ 去松果體模型/ 褪黑素治療組（D 組）于大鼠左膝關節腔內注射0.2 mL濃度為4% 的木瓜蛋白酶溶液，每2 天1 次，共2 周，制備大鼠OA 模型。木瓜蛋白酶注射2 周后，將C、D 組大鼠置于持續24 h（光照度為500 lx）光照環境中，制備去松果體模型。D組于制備去松果體模型第2 天開始于左膝關節腔內注射0.2 mL濃度為20 mg/mL 的褪黑素溶液，每周4 次，共4 周。在最后1 次注射褪黑素1 周后，抽取A、B、C 組大鼠心尖處血液應用ELISA 法檢測血清褪黑素水平；之后處死各組動物，取材行大體觀察、組織學及免疫組織化學染色觀察。 結果 模型制備后大鼠均存活。A、B、C 組相同時間點血清中褪黑素水平比較以及同組各時間點比較，差異均有統計學意義（P lt; 0.05）。A 組關節軟骨表面光滑平整，有彈性；軟骨細胞排列整齊。B、C 組關節軟骨表面粗糙，局部區域軟骨面可見缺損及軟骨下骨外露現象；軟骨細胞排列及結構較紊亂。D 組關節軟骨表面較B、C 組平整，軟骨缺損及外露現象減少；軟骨細胞排列及結構較整齊。各組組織學及BMP-2、IL-1β 免疫組織化學染色觀察Mankin 評分及積分吸光度值比較，差異均有統計學意義（P lt; 0.05）。 結論 持續光照能加速大鼠OA 關節軟骨的退變。采用0.2 mL 濃度為20 mg/mL 的褪黑素溶液于關節腔注射4 周后能夠延緩大鼠OA 的進一步退變，其作用機制可能與上調軟骨生長因子BMP-2 及下調炎性因子IL-1β 表達有關。
目的 評價痰熱清注射液對慢性阻塞性肺疾病(COPD)急性加重期患者的臨床療效、安全性及其對血漿細胞因子白介素-17(IL-17)、白介素-8(IL-8)及白三烯B4表達的影響.方法 按中華醫學會呼吸病學會2002年lt;慢性阻塞性肺疾病診治指南gt;和國家中醫藥管理局1994年發布的lt;中醫病證診斷療效標準gt;,將60例COPD急性加重期患者隨機分為治療組和對照組,每組各30例,進行隨機對照臨床試驗.中醫痰熱阻肺癥診斷標準為:咳嗽氣粗,痰多質粘厚或稠黃,咳吐不爽,或有身熱,口干欲飲,舌紅苔黃,脈滑數.治療組在基礎治療的基礎上,用痰熱清注射液20ml+5%糖水250 ml,iv gtt,q 24 h治療;對照組在基礎治療的基礎上,給予生理鹽水20 ml+5%糖水250 ml,iv gtt,q 24 h治療,兩組療程均為12 d.結果 ITT和PP分析,治療組總有效率分別為96.67%和96.55%,總顯效率分別為70.00%和72.41%;對照組總有效率分別為86.67%和89.65%,總顯效率分別為46.67%和48.28%,兩組間療效比效有統計學意義(P＜0.05),且治療后治療組血漿細胞因子IL-17、IL-8水平明顯低于對照組(P＜0.05).結論 痰熱清注射液治療COPD急性加重期患者的臨床療效明顯優于對照組,且未發現明顯毒副作用.其作用機理可能與痰熱清注射液能有效降低COPD急性加重期患者血漿IL-17和IL-8的水平有關.