目的通過 shRNA 干擾技術，探討靶向沉默 RNA 解旋酶 DDX46 基因對食管鱗癌 TE-1 細胞增殖及凋亡的影響。 方法以人永生化食管鱗狀上皮細胞 Het-1A 為對照，實時定量聚合酶鏈反應（qRT-PCR）檢測 DDX46 基因 mRNA 在 TE-1 細胞中的相對表達；DDX46 基因 RNAi 靶點序列慢病毒感染的 TE-1 細胞為實驗組，陰性對照序列慢病毒感染的TE-1細胞為對照組，進行細胞計數、克隆形成和細胞凋亡實驗；Stress and Apoptosis Signaling Antibody Array Kit 檢測 DDX46 基因靶向沉默前后信號通路關鍵分子的變化。 結果與對照組相比，靶向沉默 DDX46 基因后細胞計數顯示 TE-1 細胞生長被顯著抑制（P<0.01），克隆形成實驗顯示細胞克隆形成能力被顯著抑制（P<0.001），Annexin V-APC 單染法流式細胞儀凋亡檢測顯示細胞凋亡顯著增加（P<0.001）。PathScan® Antibody Array 檢測發現 Akt（Ser473，phosphorylation）和 IκBα（total, N/A）表達水平顯著下降（P<0.01），Caspase-3（Asp175，cleaved）表達水平升高（P<0.05）。 結論DDX46 基因在食管鱗癌 TE-1 細胞中高表達；RNAi 靶向沉默 DDX46 基因可抑制 TE-1 細胞增殖、誘導細胞凋亡；DDX46 基因沉默可能是通過下調 Akt/NF-κB 信號轉導通路，進而發揮抑制腫瘤細胞增殖、誘導細胞凋亡的作用。
目的 觀察 DDX46 基因沉默后食管鱗癌 Eca-109 細胞裸鼠皮下移植瘤的生長變化，在活體動物模型中進一步研究 DDX46 在食管鱗癌發生發展中的作用。 方法 4 周齡健康雌性 BALB/c 裸鼠 25只隨機分為 3 組。應用 RNA 干擾技術通過慢病毒載體構建獲得 DDX46 基因沉默的慢病毒顆粒（實驗組：DDX46-shRNA-LV，n=10）及空載體慢病毒顆粒（對照組：Control-LV，n=10），分別感染食管鱗癌 Eca-109 細胞株，每只 4×106個細胞量注射至 BALB/c 裸鼠右腋皮下；以人永生化食管鱗狀上皮細胞 Het-1A 為空白對照組（n=5），每側 4×106 個細胞量分別注射至 BALB/c 裸鼠雙側腋皮下。檢測各組移植瘤生長情況，活體成像儀觀察各組熒光表達量。Western blotting 檢測 DDX46 基因沉默后移植瘤組織凋亡信號通路關鍵分子表達的變化。 結果 與對照組相比，沉默 DDX46 基因使裸鼠移植瘤體積減小、重量減輕，生長減緩（P<0.001）；小動物活體成像顯示 DDX46-shRNA-LV 組熒光區總熒光表達量和平均熒光表達量均明顯低于 Control-LV 組（P<0.001）；Het-1A 細胞接種裸鼠不成瘤。Western blotting 檢測顯示，與對照組比較，沉默 DDX46 基因使移植瘤 DDX46 蛋白表達水平顯著下降（P<0.01），而 cleaved Caspase-3 和 cleaved PARP-1 蛋白表達水平顯著上升（P<0.01）。 結論 沉默 DDX46 基因可顯著抑制裸鼠移植瘤的生長，其機制可能是通過激活細胞凋亡信號通路而發揮抑瘤作用。
目的探討 DDX46 基因對食管鱗癌發生發展的作用機制。方法應用基因芯片技術檢測 DDX46 基因敲減前后食管鱗癌 TE-1 細胞中全基因 mRNA 表達豐度，篩選差異表達的基因，并對其進行生物信息學分析。對表達譜篩選的其中 6 個差異基因進行實時定量聚合酶鏈式反應（qRT-PCR）定量分析以驗證結果的可靠性。結果按照表達差異倍數之絕對值≥2，且 P<0.05 的篩選條件，篩選出差異基因 1 006 個，其中表達下調基因 644 個，表達上調基因 362 個。生物信息分析顯示，差異基因主要涉及細胞周期、增殖、凋亡、黏附、能量代謝及免疫應答等生物學過程，磷脂酰肌醇-3激酶（PI3K）為重要節點分子。qRT-PCR 檢測結果與基因芯片結果的驗證符合率為 100％。結論利用生物信息學方法能有效挖掘 DDX46 敲減后食管鱗癌基因芯片數據，為進一步研究 DDX46 與食管鱗癌發生發展的關系，以及尋找潛在的治療靶點提供有價值的線索。
目的探索DDX46基因與TE-1食管鱗狀細胞癌（鱗癌）細胞侵襲和轉移行為的相關性及可能的分子機制。方法熒光標記shRNA慢病毒轉染TE-1食管鱗癌細胞敲減DDX46基因為實驗組（shDDX46組），空載體轉染為對照組（shCtrl組）。鏡下綠色熒光蛋白表達率評價細胞轉染效率，實時熒光定量聚合酶鏈式反應和蛋白質印跡法（Western blotting，WB）分別檢測DDX46基因在mRNA和蛋白表達水平的敲減效率。采用劃痕實驗、侵襲實驗、Transwell小室實驗檢測DDX46基因敲減前后TE-1食管鱗癌細胞侵襲和轉移能力的變化。采用生物信息學方法進行經典通路分析探討信號通路的變化，進一步通過WB檢測纖連蛋白表達，探討DDX46在食管鱗癌細胞侵襲和轉移過程中可能存在的作用機制。結果shRNA慢病毒轉染TE-1食管鱗癌細胞后DDX46基因在mRNA和蛋白水平上的表達受到顯著抑制。劃痕實驗提示shDDX46組TE-1食管鱗癌細胞在劃痕后8 h細胞遷移率相比shCtrl組明顯降低（P=0.001）。侵襲實驗表明shDDX46組TE-1食管鱗癌細胞在培養24 h后侵襲細胞數量低于shCtrl組（P<0.001）。Transwell實驗結果顯示shDDX46組在24 h觀察點的轉移細胞數少于shCtrl組（P<0.001）。經典通路分析結果表明整合素信號通路活性被抑制，進一步探究其作用機制發現，敲減DDX46基因后與細胞黏附相關的纖連蛋白表達下降11%。結論DDX46基因與TE-1食管鱗癌細胞的侵襲和轉移行為相關，敲減DDX46基因可能是通過下調整合素通路信號，降低細胞黏附性及細胞骨架重構，從而抑制食管鱗癌細胞侵襲和轉移過程。