目的觀察重組腺相關病毒(rAAV)-多聚嘧啶序列結合蛋白相關剪接因子(PSF)對氧誘導視網膜新生血管的抑制作用。 方法7日齡C57BL/6J小鼠18只,隨機分為正常組、rAAV-PSF注射組、rAAV注射組,各組均6只。蛋白免疫印跡法(Western blot)檢測各組小鼠視網膜組織中PSF的表達。7日齡C57BL/6J小鼠48只隨機分為正常組、氧誘導視網膜病變 (OIR)模型組、OIR rAAV-PSF治療組、OIR rAAV治療組,各組均為12只。除正常組外,其余各組小鼠與哺乳母鼠共同置于氧濃度為(75±2)%的氧箱內飼養5 d后轉移至正常環境中飼養5 d,建立OIR模型。12日齡時,OIR rAAV-PSF治療組小鼠玻璃體腔注射病毒滴度為5×1013 pfu/ml的rAAV-PSF重組載體2 μl;OIR rAAV治療組小鼠玻璃體腔注射相同病毒滴度的單純rAAV載體2 μl。OIR模型組小鼠出氧箱后不作任何處理。石蠟切片蘇木精-伊紅染色并計數突破視網膜內界膜的血管內皮細胞核;Western blot檢測視網膜中VEGF蛋白表達含量。 結果正常組小鼠視網膜PSF蛋白表達與rAAV-PSF注射組比較,差異有統計學意義(F=16.05,P=0.001),與rAAV注射組比較,差異無統計學意義(F=16.05,P=0.890)。正常組、OIR模型組、OIR rAAV-PSF治療組、OIR rAAV治療組突破內界膜的視網膜新生血管內皮細胞核數比較,正常組與OIR模型組差異有統計學意義(F=101.00,P=0.007);rAAV-PSF治療組與OIR模型組差異有統計學意義(F=101.00,P=0.002);OIR rAAV治療組與OIR模型組差異無統計學意義(F=101.00,P=0.550)。各組視網膜VEGF蛋白表達比較,正常組與OIR模型組差異有統計學意義(F=13.20,P=0.005),OIR模型組與OIR rAAV-PSF治療組差異有統計學意義(F=13.20,P=0.001);OIR模型組與OIR rAAV組差異無統計學意義(F=13.20,P=0.071)。 結論rAAV-PSF玻璃體腔注射可以抑制OIR小鼠視網膜VEGF表達,從而抑制其新生血管生成。
目的 觀察聚嘧啶束結合蛋白相關剪接因子（PSF）高表達對過氧化氫（H2O2）誘導下視網膜色素上皮（RPE）細胞凋亡的影響。 方法 體外培養的人RPE細胞分為正常細胞組、損傷組（N+H2O2組）、空載體對照組（Vec+H2O2組）、PSF高表達組（PSF+H2O2組）。應用脂質體2000將pEGFP空載體、pEGFP-PSF真核表達質粒分別導入Vec+H2O2組、PSF+H2O2組；N+H2O2組僅作轉染處理；正常細胞組為正常培養細胞。細胞轉染24 h后，以200 μmol/L H2O2刺激細胞2 h。蘇木精-伊紅染色觀察各組細胞形態；噻唑藍比色法檢測N+H2O2組、Vec+H2O2組、PSF+H2O2細胞活性，以酶聯免疫檢測儀測量波長490 nm處各組細胞的吸光度[A，舊稱光密度（OD）]值表示；LIVE/DEAD?細胞活性/細胞毒性試劑盒檢測各組細胞生存力；細胞凋亡檢測試劑盒檢測N+ H2O2組、Vec+H2O2組、PSF+H2O2組細胞凋亡；二氯熒光素二乙酸酯檢測各組細胞內活性氧（ROS）水平。 結果 N+H2O2組、Vec+H2O2組細胞體積縮小，胞質致密濃縮、嗜酸性染色增強；PSF+H2O2組細胞形態尚飽滿，胞質染色較均勻，偶見體積縮小。與PSF+H2O2組比較，N+H2O2組、Vec+H2O2組細胞活性下降，差異有統計學意義（F=46.98，P=0.000）。正常細胞組細胞呈綠色，偶見紅色熒光；N+H2O2組、Vec+H2O2組細胞中呈紅色熒光的死亡細胞數量明顯增多，呈綠色熒光的活細胞數量顯著減少；PSF+H2O2組活細胞數量明顯增多，死亡細胞數量顯著減少。與N+H2O2組、Vec+H2O2組細胞凋亡比較，PSF+ H2O2組細胞凋亡下降，差異有統計學意義（F=62.24，P=0.000）。與N+H2O2組、Vec+H2O2組比較，PSF+H2O2組細胞中ROS表達量下降，差異有統計學意義（F=295.235，P=0.000）。 結論 高表達PSF通過抑制ROS的產生緩解H2O2誘導的人RPE細胞凋亡。
目的高表達多聚嘧啶序列結合蛋白相關剪接因子（PSF）對糖基化終產物（AGEs）誘導下視網膜Müller細胞凋亡的影響。方法實驗研究。體外培養的人Müller細胞分為正常細胞組（N組）、空白對照組（N+AGEs組）、空載體對照組（Vec+AGEs組）及PSF高表達組（PSF+AGEs組）。N組為常規培養的Müller細胞；N+AGEs組僅做轉染處理并聯合AGEs誘導；Vec+AGEs組、PSF+AGEs組利用轉染試劑脂質體2000分別將增強型綠色熒光蛋白（pEGFP）空載體、pEGFP-PSF真核表達質粒導入Müller細胞并聯合AGEs誘導。細胞轉染24 h后應用AGEs（150 μg/ml）誘導72 h，采用HE、Hoechst 33258染色觀察各組細胞形態；分別采用MTT比色法、ELISA細胞凋亡試劑盒及2’,7’-二氯熒光素二乙酸酯法檢測N+AGEs組、Vec+AGEs組、PSF+AGEs組細胞生存力、細胞凋亡值及細胞內ROS水平。結果N組細胞形態飽滿，胞漿染色均一；N+AGEs組、Vec+AGEs組細胞體積縮小，胞質致密濃縮、嗜酸性染色增強；PSF+AGEs組細胞形態尚飽滿，胞漿染色較均勻，胞核染色均一。N+AGEs組、Vec+AGEs組、PSF+AGEs組細胞生存力分別為0.42±0.11、0.35±0.12、0.68±0.12；細胞凋亡值分別為1.08±0.16、0.96±0.20、0.44±0.08；細胞內ROS水平分別為28 833.67±3 550.06、28 356.67±4 854.81、18 616.00±3 382.54。與N+AGEs組、Vec+AGEs組比較，PSF+AGEs組細胞生存力明顯提高（F=20.65，P=0.000），細胞凋亡值（F=43.43，P=0.000）及細胞內ROS水平（F=18.86，P=0.000）明顯降低，差異均有統計學意義。結論高表達PSF通過抑制ROS產生來緩解AGEs誘導下人Müller細胞凋亡，從而發揮對Müller細胞的保護作用。