目的觀察抗血管內皮生長因子（VEGF）藥物治療后視網膜血管內皮細胞基因表達譜的RNA-Seq分析結果。方法體外培養視網膜血管內皮細胞，取對數生長期細胞用于實驗。將細胞分為VEGF組、VEGF聯合抗VEGF藥物組。VEGF組細胞采用50 ng/ml VEGF持續作用72 h，以模擬糖尿病視網膜病變中血管內皮細胞的高VEGF生存環境。VEGF聯合抗VEGF藥物組細胞采用50 ng/ml VEGF+2.5 μg/ml抗VEGF藥物持續作用72 h，以仿效抗VEGF藥物治療后細胞所處的微環境。應用RNA-Seq技術對兩組細胞進行全轉錄組測序，獲得生物學大數據，并在此基礎上分析差異表達基因；通過GO功能、Pathway顯著性富集分析對差異基因的功能及所在的信號通路進行解釋說明。結果分別獲得兩組細胞的基因表達譜信息。兩組細胞之間共存在328個差異表達基因，包括194個上調基因和133個下調基因。差異基因功能涉及分子生物學過程調控以及細胞的能量代謝、蛋白合成等諸多方面，其中SI、PRX、HPGD與蛋白合成相關，BIRC7與細胞凋亡相關，而ABLIM1、CRB2與視網膜發育相關，ABCG1、ABCA9、ABCA12與巨噬細胞膽固醇和磷脂轉運相關。GO功能顯著性富集分析結果顯示，差異基因的功能主要可以劃分為生物學行為調控、細胞組分形成以及分子功能三大板塊。Pathway顯著性富集分析結果顯示，Notch信號通路、細胞外基質受體通路、絲裂原活化蛋白激酶信號通路、轉化生長因子-β（TGF-β）信號通路、Wnt信號通路表達在兩組細胞間存在差異，而其中又以與纖維化進程調控密切相關的TGF-β信號通路中鈣/鈣調蛋白依賴性蛋白激酶Ⅱβ（CAMK2B）、膠原蛋白Ⅲ型α1鏈（COL3A1）、細胞球蛋白（CYGB）、前列腺素E受體2（PTGER2）、硫酸乙酰肝素6-O-磺基轉移酶2等基因的差異表達最為引人關注。結論抗VEGF藥物治療后可能導致CAMK2B、COL3A1、CYGB、PTGER2等TGF-β通路相關基因的表達上調進而加劇視網膜纖維化進程。
目的構建結締組織生長因子（CTGF）重組干擾載體（shRNA），觀察其對視網膜血管內皮細胞內源性CTGF表達的抑制作用。 方法構建人源CTGF shRNA，應用三質粒包裝系統獲得高滴度的CTGF shRNA慢病毒顆粒。感染視網膜血管內皮細胞，利用干擾載體中的紅色熒光標記示蹤并篩選慢病毒的最佳感染復數及起效時間。將細胞分為空白對照組（正常培養）、感染對照組（Scramble shRNA病毒感染）及CTGF敲低組（CTGF shRNA病毒感染）。通過Transwell細胞遷移實驗觀察3組細胞的遷移能力；實時定量聚合酶鏈反應（PCR）和蛋白免疫印跡法（Western blot）檢測3組細胞的結締組織生長因子（CTGF）、纖連蛋白（FN）、α-平滑肌肌動蛋白（α-SMA）、Ⅰ型膠原蛋白（ColⅠ）的mRNA和蛋白表達。3組間數據比較采用方差分析。 結果CTGF shRNA的最佳感染復數為20，最佳起效時間是72 h。Transwell細胞遷移實驗結果顯示，CTGF敲低組穿過小孔細胞數較空白對照組及感染對照組明顯降低，差異均有統計學意義（F=20.64，P=0.002）。實時定量PCR及Western blot檢測結果顯示，CTGF敲低組CTGF、FN、α-SMA、ColⅠ mRNA（F=128.83、124.44、144.76、1 374.44，P=0.000、0.000、0.000、0.000）和蛋白表達（F=22.55、41.60、25.73、161.68，P=0.002、0.000、0.001、0.000）較空白對照組、感染對照組明顯降低，差異均有統計學意義。 結論成功構建的CTGF shRNA慢病毒顆粒可有效抑制視網膜血管內皮細胞遷移并下調內源性CTGF的表達。
目的觀察特發性黃斑裂孔（IMH）患眼玻璃體切割聯合白內障超聲乳化IOL植入手術（聯合手術）后屈光狀態的變化。方法回顧性臨床研究。2016年1月至2019年6月于天津醫科大學眼科醫院行聯合手術的IMH患者51例56只眼納入研究。其中，男性17例，女性34例；平均年齡（66.79±4.33）歲。所有患眼均行BCVA、檢影驗光以及眼軸長度（AL）測量。根據SRK-T公式計算IOL度數，預測屈光度（預測值）。患眼平均BCVA為0.20±0.13；平均前房深度為（2.89±0.28）mm；平均△角膜散光度（0.73±0.43）D；平均AL為（22.92±0.70）mm；平均屈光度預測值為（0.10±0.66）D。所有患眼均行標準經睫狀體平坦部三通道25G聯合手術。手術后6個月，采用與手術前相同的設備和方法測量手術后屈光度實際值（實際值）。預測值與實際值差異比較采用配對t檢驗。結果手術后6個月，患眼平均屈光度實際值為（－0.19±0.64）D；與手術前屈光度預測值比較，差異無統計學意義（t=1.665，P=0.102）；實際值與預測值差值為（－0.33±0.81）D。結論IMH患眼聯合手術后屈光狀態發生近視漂移；手術前IOL度數預算時可適當預留+0.3 D左右遠視。
目的觀察增生型糖尿病視網膜病變（PDR）患者血清中卵泡抑素樣蛋白1（FSTL1）的變化。方法臨床檢查確診的PDR患者（PDR組）20例及正常人20名（正常組）納入研究。人視網膜血管內皮細胞（HRCEC）分為HRCEC空白對照組、缺氧3 h組、缺氧6 h組；人臍靜脈內皮細胞（HUVEC）分為HUVEC空白對照組、缺氧3 h組、缺氧6 h組。應用實時定量PCR（RT-PCR）及ELISA測定所有受檢者外周血和各組細胞中FSTL1、TGF-β、VEGF、結締組織生長因子（CTGF）mRNA和蛋白表達。受檢者血清中FSTL1、TGF-β1、CTGF、VEGF mRNA和蛋白比較行獨立樣本 t 檢驗；HRCEC空白對照組、缺氧3 h組、缺氧6 h組，HUVEC空白對照組、缺氧3 h組、缺氧6 h組細胞生存力、mRNA表達比較行單因素方差分析。結果PDR組患者血清中FSTL1、TGF-β1、CTGF、VEGF mRNA表達分別為1.79±0.58、0.97±0.21、1.85±0.69、1.38±0.44；FSTL1、TGF-β1蛋白表達分別為（1.19±0.50）、（0.71±0.24）ng/ml和（734.03±116.45）、（649.36±44.23）ng/L。與正常組比較，差異均有統計學意義（tmRNA=0.90、0.21、2.85、1.77，P=0.00、0.00、0.04、0.02；t蛋白=1.88、7.68，P=0.00、0.02）。HRCEC缺氧3 h組、缺氧6 h組細胞生存力分別為0.66±0.05、0.64±0.04；與空白對照組比較，差異有統計學意義（F=13.02，P=0.00）。HUVEC缺氧3 h組、缺氧6 h組細胞生存力分別為0.63±0.06、0.68±0.06；與空白對照組比較，差異有統計學意義（F=26.52，P=0.00）。HRCEC空白對照組、缺氧3 h組細胞中FSTL1、TGF-β1、CTGF、VEGF mRNA表達比較，差異有統計學意義（F=14.75、44.93、85.54、6.23，P=0.01、0.00、0.00、0.03）；與HRCEC空白對照組上清液中FSTL1、TGF-β1蛋白表達比較，缺氧3 h組，蛋白表達差異均有統計學意義（P＜0.05）；缺氧6 h組，TGF-β1蛋白表達差異有統計學意義（P=0.03），FSTL1蛋白表達差異無統計學意義（P=0.68）。HUVEC空白對照組、缺氧3 h組、缺氧6 h組細胞中FSTL1、TGF-β1、CTGF、VEGF mRNA表達比較，差異均有統計學意義（F=19.08、25.12、22.89、13.07，P=0.00、0.00、0.00、0.01）。免疫熒光染色結果顯示，缺氧3 h組、缺氧6 h組細胞中FSTL1、TGF-β1、CTGF、VEGF蛋白均呈陽性表達。結論PDR患者血清中FSTL1基因及蛋白表達較正常人顯著升高。