目的 探索體外構建人外泌汗腺樣結構的方法。 方法 取自愿捐獻的正常腋部全層皮膚，分離培養汗腺腺上皮細胞，倒置相差顯微鏡下觀察。將汗腺腺上皮細胞以2 × 105 個/cm2 密度接種至Matrigel 凝膠下（A 組）、凝膠上（B 組）、凝膠中（C 組），進行三維立體培養，激光掃描共聚焦顯微鏡、HE 染色及免疫組織化學染色觀察有無汗腺樣結構形成。 結果 原代汗腺分泌部上皮細胞接種后24 h 可見細胞貼壁，貼壁細胞呈梭形，2 ～ 3 d 后細胞呈多克隆麥粒樣生長，14 d 后細胞融合呈鋪路石樣生長，融合后的汗腺腺上皮細胞呈扁平多角形，中間有較大圓形核；第1 代細胞形態與原代極為相似；第2 代細胞形態不規則，多數伸出長偽足；第3 代細胞多呈星形狀，細胞體積大，與鄰近細胞相互融合。A 組汗腺腺上皮細胞三維立體培養11 d 形成管腔結構；B 組汗腺腺上皮細胞立體培養8 h，細胞胞漿伸長呈絲狀，與鄰近細胞相連呈管腔或半管腔形，但細胞增殖不明顯；C 組汗腺腺上皮細胞三維立體培養2 ～ 3 d，細胞分裂增生，增生細胞彼此緊密排列成管腔結構，中間可見明顯腔隙，隨新生細胞增多，管腔結構逐漸演變為不規則球形結構。激光掃描共聚焦顯微鏡觀察示C 組形成球形結構，細胞團中央有管腔結構；球形結構HE 染色示為管腔結構，免疫組織化學染色示角蛋白18、癌胚抗原表達陽性，與汗腺分泌部管狀結構極為相似。 結論 汗腺腺上皮細胞在Matrigel 凝膠中三維立體培養可形成汗腺樣結構。
研究肝細胞生長因子（hepatocyte growth factor，HGF）對培養的人外泌汗腺上皮細胞（human eccrine sweat gland epithelial cells，hESGc）的促增殖作用，以及細胞內磷酸化細胞外信號調節激酶（phosphorylated extracellular signal-regulated kinase 1/2，p-ERK1/2）蛋白的表達。 方法 在無血清角質形成細胞培養基（keratinocyte serum free medium，KSFM）中培養hESGc，取第1 代細胞進行實驗。免疫組織化學染色檢測C-met 表達。MTT 法檢測HGF 對hESGc 的促增殖作用，實驗分為3 組：空白組、對照組和實驗組。空白組僅含200 μL KSFM；對照組于96 孔板以2 × 103 個/ 孔接種hESGc，并加入200 μL KSFM；實驗組于96 孔板以2 × 103 個/ 孔接種hESGc 并加入200 μLKSFM 后，再分別加入不同濃度（2、20、40、80 ng/mL）HGF。實驗組于加入各濃度HGF 前以及加入后2、4 d，觀察細胞增殖情況。實驗組于加入40 ng/mL HGF 后即刻，5、30、90 和120 min，采用Western blot 方法檢測細胞內p-ERK1/2表達規律。 結 果 hESGc 抗-C-met 免疫組織化學染色胞漿可見陽性染色，細胞核染色為藍色。MTT 法檢測示40、80 ng/ mLHGF 對hESGc 具有顯著促增殖作用（P lt; 0.05）。在含40 ng/mL HGF 的KSFM中培養2 d，吸光度（A）值為0.239 3 ±0.070 9，增殖率為74.2%，對照組A 值為0.137 4 ± 0.029 0；培養4 d，40 ng/mL HGF 實驗組A 值為0.287 8 ± 0.074 3，增殖率為74.8%，對照組A 值為0.164 6 ± 0.035 0，兩組比較差異均有統計學意義（P lt; 0.05）。在含80 ng/mL HGF 的KSFM中培養2 d，A 值為0.212 3 ± 0.059 2，增殖率為54.5%；培養4 d，80 ng/mL HGF 實驗組A 值為0.231 0 ± 0.056 7，增殖率為40.3%；與對照組比較差異均有統計學意義（P lt; 0.05）。p-ERK1/2 在40 ng/mL HGF 刺激5 min 后表達達高峰，相對積分吸光度值（relative integral absorbance，RIA）為0.593 2 ± 0.192 2，較刺激后即刻增加8.1 倍（P lt; 0.01）；刺激30、90 及120 min 后RIA 與刺激后即刻比較，差異無統計學意義（Pgt; 0.05） 結論 HGF 可促進hESGc 增殖，并能引起ERK1/2蛋白磷酸化。
目的 探討外胚葉發育不全（ectodysplasin，EDA）基因信號途徑與汗腺發育及修復的關系。方法 通過對近期國內外相關文獻的回顧，了解EDA基因的生物學特性、信號傳導途徑和促進汗腺發育的分子機制。結果 大量實驗證實EDA基因在胎兒發育早期參與了胚胎皮膚汗腺的形態和功能發生。結論 EDA基因對皮膚汗腺的發生和結構的形成以及皮膚生理功能的維持具有重要意義，可為實現基因調控皮膚受損汗腺的完美修復找到一條新路。
目的總結肛周化膿性汗腺炎的臨床特點、診斷及治療方法。 方法回顧性分析我院肛腸外科2013年1月至2015年12月期間收治的13例肛周化膿性汗腺炎患者的臨床資料。 結果全部病例均行外科手術治療，術中切開所有瘺管，徹底清除瘺管壁，術后給予抗炎、換藥等治療。手術時間（50±6）min，住院時間平均16.3 d，傷口愈合時間平均45.6 d。隨訪半年，1例患者4個月后局部復發再次入院，以同樣手術方式治療后治愈。其余患者均治愈，未復發，無失禁，愈合后肛周切口形成瘢痕，無感染。 結論肛周化膿性汗腺炎診斷主要依據臨床表現及病理學檢查，誤診率高，治療以手術為主。早期診斷，及時治療，手術徹底，是治愈肛周化膿性汗腺炎、降低復發的關鍵。
目的探討人體外泌汗腺組織體外三維培養方法，并對構建的三維組織進行形態學分析。 方法取整形手術患者自愿捐贈的正常腹部全層皮膚，經Ⅱ型膠原酶消化分離人體外泌汗腺組織，以含5 ng/mL重組人EGF、25 mg/mL牛垂體提取物、100 U/mL青霉素和100 μg/mL鏈霉素的無血清角質細胞培養基進行培養。倒置相差顯微鏡下觀察細胞生長情況。待原代細胞達80%融合后，調整細胞濃度至1×105個/mL；取0.3 mL細胞懸液與0.3 mL Matrigel基底膜基質混勻培養，倒置相差顯微鏡下觀察細胞生長情況。培養14 d后，取標本行冰凍切片，HE染色觀察細胞形態結構，免疫組織化學染色檢測細胞角蛋白7（cytokeratin 7，CK7）和CK19抗原表達。 結果倒置相差顯微鏡觀察示，經Ⅱ型膠原酶消化后大量汗腺組織游離；貼壁后3～5 d長出汗腺細胞，細胞持續分裂達2～3周，形成圍繞汗腺組織塊的環狀單層；3～4周后細胞衰老。汗腺細胞接種于Matrigel基底膜基質中2～3 d，細胞開始分裂，隨后形成小細胞團、管狀結構以及類球狀結構；約2周時混合培養物開始液化，培養終止。HE染色示部分細胞形成中空管狀結構，管壁由1～2層細胞構成，類似于在體汗腺的分泌部和導管部；免疫組織化學染色見培養的汗腺細胞CK7和CK19表達均呈陽性。 結論人汗腺細胞接種于Matrigel基底膜基質三維培養，形成的組織結構模擬了在體汗腺的組織形態結構。
目的探討miRNA-203轉染誘導人表皮干細胞向汗腺細胞分化的可能性及機制。 方法取包皮環切術獲得的人正常包皮組織5例，采用0.25%胰蛋白酶-EDTA聯合消化法分離表皮和真皮，應用Ⅳ型膠原差速貼壁法純化人表皮干細胞，倒置相差顯微鏡下觀察細胞生長狀況，行β1整合素（integrin β1，ITGB1）、角蛋白19（cytokeratin 19，CK19）、CK1、CK10、CK18、癌胚抗原（carcinoembryonic antigen，CEA）免疫細胞化學染色鑒定。通過脂質體轉染將miRNA-203模擬物導入人表皮干細胞（實驗組），轉染對照miRNA模擬物作為對照組。免疫細胞化學染色法對轉染后細胞行ITGB1、CK19、CK1、CK10、CK18、CEA單克隆抗體檢測鑒定；實時熒光定量RT-PCR檢測轉染前及轉染后72 h的細胞中miRNA-203、P63、ITGB1、CK19、CK1、CK10、CK18、CEA mRNA相對表達量；Western blot法檢測P63、ITGB1、CK19、CK1、CK10、CK18、CEA蛋白相對表達量；并對miRNA-203的mRNA表達與P63的mRNA和蛋白表達分別行Pearson相關分析。 結果轉染前人表皮干細胞CK19、ITGB1陽性表達，轉染后CK1、CK10、CK18、CEA陽性表達。實驗組轉染后細胞miRNA-203 mRNA相對表達量顯著高于轉染前（P＜0.05）。實驗組轉染后細胞CK1、CK10、CK18、CEA mRNA及蛋白的相對表達量均高于轉染前及對照組，而P63、CK19、ITGB1 mRNA及蛋白的相對表達量均低于轉染前和對照組，比較差異均有統計學意義（P＜0.05）。上述指標對照組與轉染前比較差異均無統計學意義（P＞0.05）。轉染前后miRNA-203的mRNA表達量與P63的mRNA和蛋白相對表達量均成負相關，轉染前相關系數分別為—0.91（t=3.862，P=0.042）及—0.96（t=5.971，P=0.009）；轉染后相關系數分別為—0.92（t=4.283，P=0.031）及—0.95（t=5.842，P=0.011）。 結論miRNA-203能誘導人表皮干細胞分化為汗腺細胞，其作用可能是通過靶向抑制P63來實現的。
目的探討表皮干細胞（epidermal stem cells，ESCs）誘導分化為汗腺細胞（sweat gland cells，SGCs）過程中表型的改變及其通路的調控機制。 方法取健康成人包皮，采用中性蛋白酶消化后高濃度Ⅳ型膠原黏附法分離培養獲得ESCs，行β1整合素、角蛋白19（cytokeratin 19，CK19）及p63免疫熒光染色法鑒定；取健康成人全層皮膚，采用Ⅱ型膠原酶消化法分離提取汗腺組織，體外增殖培養SGCs，行CK7、CK18、CK19和癌胚抗原（carcinoembryonicantigen，CEA）免疫熒光法鑒定。取第2代ESCs分為4組：A組將ESCs及SGCs兩種細胞通過Ttranswell共培養系統共培養，B組通過單純添加汗腺上清液培養ESCs，C組在A組基礎上加入濃度為60 ng/mL的EGF，D組在A組基礎上加入濃度為10 mmol/L的PD98059。分別通過倒置相差顯微鏡進行細胞形態學觀察、流式細胞術檢測ESCs表型陽性率及Western blot檢測分化過程中的信號通路機制。 結果經細胞形態學觀察及免疫熒光染色鑒定，提示培養細胞為ESCs和SGCs。倒置相差顯微鏡觀察示，A、C、D組培養后細胞形態變化相似，9 d后細胞開始出現扁平多角形結構改變；B組形態變化較慢，培養12 d后與其他3組結構相似。流式細胞術結果示，與B組比較，A組Transwell共培養系統共培養后，ESCs的β1整合素陽性率顯著下調、CEA陽性率顯著上調（P<0.05）；C組加入EGF可降低共培養系統中ESCs的β1整合素下調和CEA上調，D組加入PD98059可增強共培養系統中ESCs的β1整合素下調和CEA上調，A、C、D組間比較差異均有統計學意義（P<0.05）。Western blot檢測示，4組均有較高水平細胞外信號調節激酶（extracellular signal regulated kinase，ERK）表達，但B組明顯低于其他3組（P<0.05）；磷酸化-ERK表達A組最高、C組最低，各組間比較差異均有統計學意義（P<0.05）。 結論處于SGCs生長環境中時，通過Transwell共培養系統共培養，ESCs可經誘導分化為SGCs，其表型發生相應改變；通過對絲裂原活化蛋白激酶/ERK通路的控制，可以調節ESCs的分化方向和程度。