目的探討天然水蛭素對大鼠背部隨意皮瓣早期斷蒂后成活的影響。 方法取成年Wistar大鼠38只，雌雄不限，體重220～280 g；隨機分成天然水蛭素組（實驗組）和生理鹽水組（對照組），每組19只。于兩組大鼠背部制備大小為9 cm × 3 cm的隨意皮瓣后，A組在距蒂部2、4、8 cm處選擇6個對稱注射點，每點注射0.5 mL（3 ATU）天然水蛭素；對照組對應注射等量生理鹽水；每天注射1次至實驗完成，術后4 d斷蒂。大體觀察大鼠皮瓣成活情況，并于斷蒂術后7 d測量皮瓣成活面積百分比。于皮瓣制備后即刻、斷蒂術前1 d及斷蒂術后3、7 d，取標本行組織學及免疫組織化學染色觀察，測量微血管密度（microvessel density，MVD），熒光定量RT-PCR檢測VEGF mRNA的表達。 結果兩組大鼠均存活至實驗完成。斷蒂術后實驗組皮瓣壞死范圍均小于對照組，7 d時實驗組皮瓣成活面積百分比為85.366% ± 2.872%，顯著高于對照組的75.252% ± 3.455%（t=7.117，P=0.000）。組織學觀察示皮瓣制備后即刻兩組毛細血管無顯著差異，但斷蒂術前1 d及斷蒂術后3、7 d實驗組毛細血管均明顯多于對照組。免疫組織化學染色示，兩組均有CD34陽性細胞表達；但斷蒂術前1 d及斷蒂術后3、7 d，實驗組MVD均顯著高于對照組，差異有統計學意義（P lt; 0.05）。斷蒂術后7 d，熒光定量RT-PCR 檢測示實驗組VEGF mRNA表達量為7.122 ± 0.503，對照組為5.655 ± 1.174，兩組比較差異有統計學意義（t=3.633，P=0.003）。 結論天然水蛭素可以通過提高VEGF的表達，促進大鼠背部隨意皮瓣血管生成，改善皮瓣血供，促進隨意皮瓣早期斷蒂并成活。
目的 探討局部應用天然水蛭素對豬隨意型皮瓣移植后靜脈淤血的影響。 方法 6 ～ 8 月齡廣西巴馬小型豬3 只，雌雄不限，體重10 ～ 15 kg。于每只豬背兩側制備6 個大小為14 cm × 4 cm 的隨意型皮瓣，共18 個皮瓣。根據術后注射藥物不同，皮瓣隨機分為3 組（n=6）。術后即刻、1、2、3 d，A 組：局部注射3 mL 生理鹽水，作為對照組；B 組：局部注射3 mL 天然水蛭素20 ATU；C 組：局部注射3 mL 天然水蛭素40 ATU。術后1、10 d 行大體觀察，1、7d 行組織學觀察，3、7 d 測定濕重/ 干重比值，5 d 測定皮瓣表面溫度，7 d 皮瓣局部血流彩色超聲檢測，12 d 測定皮瓣成活率。 結 果 術后即刻，3 組皮瓣均出現遠端2/3 范圍內輕度淤血，差異無統計學意義（P gt; 0.05）；術后1 d，A 組皮瓣淤血長度明顯長于B、C 組（P lt; 0.05），B、C 組間比較差異無統計學意義（P gt; 0.05）；術后10 d，A、C 組皮瓣壞死長度明顯長于B 組，差異有統計學意義（P lt; 0.05），A、C 組比較差異無統計學意義（P gt; 0.05）。組織學觀察：術后1 d，B 組真皮內毛細血管及微靜脈紅細胞淤滯現象較A 組明顯減輕；術后7 d，B 組皮下膠原及肉芽組織增生明顯優于A 組。術后3 d，A、B、C 組濕重/ 干重比值分別為3.94 ± 0.14、3.43 ± 0.14、3.60 ± 0.19，A 組與B、C 組比較，差異有統計學意義（P lt; 0.05），B、C 組間比較，差異無統計學意義（P gt; 0.05） ；術后7 d，A、B、C 組濕重/ 干重比值分別為3.61 ± 0.11、3.08 ± 0.13、3.34 ±0.21，A 組與B、C 組比較，差異有統計學意義（P lt; 0.05），B、C 組間比較，差異無統計學意義（P gt; 0.05）。術后5 d，A、B、C 組皮瓣表面溫度分別為（36.64 ± 0.70）、（38.61 ± 0.42）和（37.50 ± 0.46）℃，A 組與B、C 組比較差異有統計學意義（P lt;0.05），B、C 組間比較，差異無統計學意義（P gt; 0.05）。術后7 d，皮瓣局部血流彩色超聲檢測示A 組血流信號稀少，B 組見較完整的動靜脈回流信號，可見垂直于皮膚的動脈穿支，C 組可見動脈血流信號。術后12 d，A、B、C 組皮瓣成活率分別為45% ± 7%、67% ± 4%、52% ± 4%，B、C 組與A 組比較，差異有統計學意義（P lt; 0.05），B、C 組間比較差異有統計學意義（P lt; 0.05）。 結論 局部應用天然水蛭素對豬隨意型皮瓣移植后靜脈淤血有較明顯的改善作用。
目的探討天然水蛭素聯合高壓氧治療對大鼠隨意皮瓣成活的影響。方法取 72 只 SD 大鼠，于背部制備面積為 10.0 cm×2.5 cm 的隨意皮瓣移植模型后，隨機分為 4 組（n=18）。對照組術后即刻及之后 4 d 內注射生理鹽水，高壓氧組注射生理鹽水同時行高壓氧治療，水蛭素組僅注射天然水蛭素，聯合組注射天然水蛭素同時行高壓氧治療。術后大體觀察皮瓣成活情況，第 6 天計算皮瓣成活率；第 2、4 天取材，HE 染色觀察皮瓣組織學變化；免疫組織化學染色檢測皮瓣微血管密度（microvessel density，MVD）以及 TNF-α 表達水平。結果術后各組皮瓣均出現部分壞死，其中聯合組皮瓣成活最佳；術后第 6 天高壓氧組、水蛭素組及聯合組皮瓣成活率明顯高于對照組，聯合組高于水蛭素組、高壓氧組，比較差異有統計學意義（P<0.05）；水蛭素組與高壓氧組比較，差異無統計學意義（P>0.05）。組織學觀察示，術后第 2 天，水蛭素組、高壓氧組及聯合組微血管結構較對照組多，各組均見炎性細胞浸潤；第 4 天，高壓氧組、水蛭素組及聯合組中仍可見較多微血管形成，對照組中見大量炎性細胞浸潤，其余各組炎性細胞均較術后第 2 天時明顯減少。免疫組織化學染色觀察示，術后第 2 天，高壓氧組、水蛭素組及聯合組 MVD 均顯著高于對照組、TNF-α 蛋白表達量顯著低于對照組（P<0.05）；高壓氧組、水蛭素組及聯合組以上指標比較，差異無統計學意義（P>0.05）。術后第 4 天，高壓氧組、水蛭素組及聯合組 MVD 均顯著高于對照組，聯合組及水蛭素組高于高壓氧組，比較差異有統計學意義（P<0.05），聯合組及水蛭素組間比較差異無統計學意義（P>0.05）；高壓氧組、水蛭素組及聯合組 TNF-α 蛋白表達量顯著低于對照組，聯合組低于水蛭素組及高壓氧組，比較差異有統計學意義（P<0.05），水蛭素組及高壓氧組間比較差異無統計學意義（P>0.05）。結論高壓氧和天然水蛭素干預均能提高隨意皮瓣移植后成活率，且兩者聯合發揮協同效應，可能與促進血管生成和減輕炎性反應有關。
目的 研究天然水蛭素對人微血管內皮細胞（human microvascular endothelial cells，HMVECs）增殖的影響及其誘導血管再生的機制。 方法 取 HMVECs 接種至 Matrigel 基質膠培養 24 h，體外建立三維培養模型，于倒置相差顯微鏡下觀察細胞生長情況。然后將細胞三維培養模型隨機分為不同濃度天然水蛭素培養組（1、4、7 ATU/mL 組）以及單純含 10%FBS 的 DMEM 培養基培養組（對照組）。各組細胞三維培養模型加入對應培養基后，培養 24、48、72 h 采用細胞計數試劑盒 8（cell counting kit 8，CCK-8）檢測細胞增殖情況；培養 24 h 行成管實驗并采用免疫熒光染色法測定細胞 VEGF 及 Notch1 表達水平。 結果 細胞三維培養觀察示，HMVECs 于基質膠上貼附良好，24 h 時完全形成管腔樣結構。CCK-8 檢測示，各時間點 1、4 ATU/mL 組 A 值均高于對照組（P<0.05），其中 4 ATU/mL 組最高；而 7 ATU/mL 組A 值顯著低于對照組以及 1、4 ATU/mL 組（P<0.05）。細胞成管實驗示，1、4 ATU/mL 組成管數量較對照組及 7 ATU/mL 組明顯增多，且 4 ATU/mL 組多于 1 ATU/mL 組，差異有統計學意義（P<0.05）；7 ATU/mL 組與對照組比較，差異無統計學意義（P>0.05）。免疫熒光染色示，與對照組比較，1、4 ATU/mL 組 Notch1 表達量增高，7 ATU/mL 組降低；其中 4、7 ATU/mL 組與對照組比較差異有統計學意義（P<0.05）。1、4、7 ATU/mL 組 VEGF 表達量均較對照組增高，4 ATU/mL 組高于 1、7 ATU/mL 組，差異均有統計學意義（P<0.05）。 結論 低、中濃度天然水蛭素可促進 HMVECs 增殖使血管再生，高濃度天然水蛭素則對 HMVECs 增殖及血管再生起抑制作用；其作用機制可能與 VEGF-Notch 信號通路有關。
目的通過 Micro-CT 及三維重建技術觀察天然水蛭素對大鼠缺血皮瓣血管生成的影響。方法選取 32 只成年 SD 大鼠，在其背部制備一8.0 cm×1.8 cm 大小的缺血皮瓣模型，然后隨機分為水蛭素組和對照組（n=16）。水蛭素組術后即刻和術后 3 d 內每天皮下注射天然水蛭素 0.3 mL（含天然水蛭素 6 ATU），對照組皮下注射等量生理鹽水。術后 6 d，大體觀察皮瓣成活情況并測定皮瓣成活率，取材行 HE 染色觀察皮瓣組織學變化，行 Micro-CT 三維重建觀察并測量皮瓣血管容積、長度及數量。結果術后兩組大鼠均存活至實驗完成，無感染發生。術后 6 d，兩組皮瓣遠端均發生不同程度壞死，水蛭素組皮瓣成活率為 72.11%±8.97%，顯著高于對照組的58.94%±4.02%，差異有統計學意義（t=3.280，P=0.008）。組織學觀察示水蛭素組較對照組組織結構層次更清楚，有較多微血管生成，炎癥反應及炎癥細胞浸潤更輕。Micro-CT 三維重建示水蛭素組皮瓣血管更多、更加密集；血管容積、長度及數量均顯著大于對照組（P<0.05）。結論天然水蛭素可減輕組織炎癥反應、促進缺血皮瓣血管的新生與再通，從而提高皮瓣成活率。