目的 研究骨髓間質干細胞( BMSCs) 對博萊霉素A5( BLMA5) 所致的大鼠肺間質纖維化的治療作用。方法 收集、培養雄性SD 幼鼠( 鼠齡10 d) 的BMSCs, 并進行DAPI 標記。將70 只雌性SD 大鼠隨機分為4 組, A 組( n =21) : 生理鹽水對照組; B 組( n =21) : BLMA5 模型組; C組( n =21) : 氣管內注入BLMA5 后立即尾靜脈注射移植BMSCs; D 組( n=7) : 氣管內注入BLMA5 14 d 后移植BMSCs。分別于第7、14、28 d( D 組于第28 d) 處死大鼠, 取肺組織病理切片行HE 及Masson 染色觀察肺部炎癥和纖維化情況,熒光顯微鏡下檢測DAPI 標記細胞; PCR 法檢測睪丸決定因子( SRY) 基因; ELISA 法檢測肺組織內羥脯氨酸( HYP) 、TNF-α和TGF-β1 的含量。結果 ( 1) 在C、D 組7、14、28 d 肺組織冰凍切片中均見到DAPI 標記的BMSCs, PCR 檢測到雄性SD 大鼠SRY 基因。( 2) B 組第7 d 肺泡炎最明顯, 到28 d 時肺纖維化最嚴重,與其他三組比較差異均有統計學意義( P lt;0. 05 或0. 01) ; C、D 兩組肺泡炎及肺纖維化程度均較B 組顯著減輕( P lt;0. 05) , 但仍較A 組嚴重( P lt;0. 05 或0. 01) , 其中D 組較C 組嚴重( P lt;0. 05) 。( 3) B 組第7 dHYP 含量開始升高, 28 d 最高, 顯著高于其他三組( P lt;0. 05 或0. 01) , 各組變化趨勢與肺纖維化變化相一致; B組TNF-α在第7 d 最高, 此后開始下降, 在14 d 時仍高于A、C 兩組( P lt;0. 05) , 28 d 時四組之間無明顯差異; B組TGF-β1 在第28 d 達最高, 各組之間比較均有顯著差異( P lt;0. 05) 。結論 骨髓間質干細胞可定植于損傷肺組織, 并能有效阻止BLMA5 誘導的大鼠肺纖維化, 且早期治療效果優于晚期。
目的 通過觀察外源性骨髓間充質干細胞（MSC）的肺臟遷移及分化情況，探討MSC治療肺纖維化的細胞學機制。方法 體外分離、培養雄性Wister大鼠的MSC。將60只雌性Wistar大鼠隨機分為4組，A組制備博萊霉素致肺纖維化模型；B組和C組分別于博萊霉素注射后，立即和7 d后通過尾靜脈注入5-溴-2-脫氧尿苷（BrdU）標記的雄鼠MSC液0.5 mL（含細胞數2.5×106個）；D組造模后，立即注入未標記的等量雄鼠MSC液，作為陰性對照。提取肺組織的DNA，通過聚合酶鏈反應（PCR）檢測雄性鼠的性別決定基因（sry基因），以判斷外源性MSC是否存在于雌性鼠肺組織中；留取肺組織、新鮮提取的骨髓干細胞和培養至第5代的MSC行BrdU和肺表面活性蛋白C（SP-C）的雙重免疫熒光染色，通過逆轉錄PCR（RT-PCR）檢測其是否表達SP-C mRNA和水通道蛋白5（AQP-5）的mRNA，觀察MSC移植前后的分化情況。結果 造模后立即和7 d后移入雄性MSC的雌性鼠肺組織均可表達sry基因，且肺組織中的MSC可轉化為Ⅱ型肺泡上皮細胞（AECⅡ），并具備AECⅡ的形態學特征和分子生物學表型，但立即移入組明顯好于7 d后移入組（Plt;0.01）。新提取的骨髓干細胞和培養至第5代的MSC表達SP-C mRNA，而不表達AQP-5 mRNA，且SP-C的免疫熒光染色陰性。結論 外源性MSC可移入到損傷的肺組織內并轉化為AECⅡ，而且早期移入更顯著。這種分化潛能在骨髓階段已具備，但要到損傷的微環境下才能發生轉化。
目的研究激動素對博萊霉素A5(BLM-A5)誘導的大鼠肺纖維化的干預作用。 方法雌性Wistar大鼠60只隨機分為對照組、模型組和治療組,每組20只。模型組與治療組大鼠經穿刺向氣管內注入BLM-A5(5 mg/kg),對照組在相同條件下注入等體積生理鹽水。治療組于灌注BLM-A5的第1 d開始腹腔注入0.5%激動素(0.5 mL/100 g),每日1次。分別于第3、7、14、28 d處死大鼠,取肺組織病理切片行HE及Masson染色觀察肺部炎癥和纖維化情況,ELISA方法檢測肺組織羥脯氨酸(HYP)含量及肺組織和血漿中尿激酶型纖溶酶原激活物(u-PA)、組織型纖溶酶原激活物(t-PA)、PAI-1含量。 結果模型組第7 d肺泡炎最明顯,到28 d時肺纖維化最嚴重;治療組肺泡炎及肺纖維化程度均較模型組顯著減輕,但仍較對照組嚴重(P＜0.05)。模型組第7 d時HYP含量開始升高,28 d最高;各組變化趨勢與肺纖維化變化相一致。模型組肺組織u-PA在第3 d開始下降,至7 d時最低,14 d仍顯著低于其他兩組(P＜0.05),28 d時三組間無明顯差異(P＞0.05)。模型組血漿u-PA水平在第3 d開始下降,至7 d時最低,與其他兩組比較有顯著差異(P＜0.05),14 d后三組之間無明顯差異(P＞0.05)。三組t-PA在肺組織和血漿中的含量變化與u-PA基本一致,但在14 d時模型組血漿t-PA含量仍較對照組顯著降低(P＜0.05)。模型組肺組織PAI-1在第3 d開始升高,至7 d時最高,14 d時仍顯著高于其他兩組(P＜0.05),28 d時三組之間無明顯差異(P＞0.05);治療組肺組織PAI-1水平較模型組下降(P＜0.05),但仍高于對照組(P＜0.05),至14 d時無顯著差異(P＞0.05)。模型組血漿PAI-1在第3 d開始升高,至7 d時最高,顯著高于其他兩組(P＜0.05),但14 d后三組間無明顯差異(P＞0.05)。 結論激動素通過抑制肺組織PAI-1生成,使u-PA、t-PA含量升高,減輕了博萊霉素A5所致的大鼠肺纖維化。
目的 探討高糖對肺腺癌 A549 細胞血紅素加氧酶 -1（HO-1）表達的影響及機制。 方法 應用 Western blot 技術和逆轉錄 PCR 技術檢測高糖對人肺腺癌上皮細胞系 A549 細胞 HO-1 的表達。應用酶聯免疫吸附試驗檢測 HO-1 酶活性和氧化應激產物。 結果 用 25 mmol/L 高糖處理肺 A549 細胞 0、24、48、72 h，以及用 5、10、25、40 mmol/L 葡萄糖處理 A549 細胞 48 h，在蛋白水平和 RNA 水平，高糖誘導肺 A549 細胞 HO-1 表達呈濃度和時間依賴性。高糖誘導 A549 細胞活性氧（ROS）和轉化生長因子β1（TGF-β1）產生增加，并介導 HO-1 表達增加。伴隨 HO-1 表達增加，HO-1 酶活性也相應增加。抗氧化劑 N-乙酰半胱氨酸（NAC）和 PI3K/Akt 抑制劑可抑制高糖誘導的肺上皮細胞 HO-1 表達。 結論 高糖促進肺上皮細胞 ROS 和 TGF-β1 產生，介導 HO-1 表達增加，并伴隨 HO-1 酶活性增加。
目的探討甘草酸二銨對骨髓間充質干細胞（MSC）移植治療博來霉素（BLM）所致大鼠肺纖維化急性加重的干預作用。方法體外分離、培養雄性 Wistar 大鼠的 MSC 細胞，將 24 只雌性 Wistar 大鼠隨機分為 4 組：NC 組，氣管內注入生理鹽水；BLM 組，氣管內注入 BLM；MSC 組，氣管內注入 BLM 7 d 后，經尾靜脈注入雄性大鼠 MSC 液 0.5 mL（細胞數為 2.5×106 個）；DGMSC 組，在 MSC 組基礎上，按 150 mg·kg–1·d–1 劑量連續腹腔注射甘草酸二銨 21 d。于第 28 d 各組均處死 6 只大鼠，提取肺組織，行病理學檢查評估肺泡炎及肺纖維化的程度，免疫熒光法檢測 Ⅱ 型肺泡上皮細胞數量及分布。堿水解法測定肺組織羥脯氨酸（HYP）含量，硫代巴比妥酸法測定肺組織丙二醛（MDA）含量，比色法測定肺組織超氧化物歧化酶（SOD）的活性和總抗氧化能力（T-AOC），酶聯免疫吸附試驗檢測肺組織勻漿中腫瘤壞死因子-α（TNF-α）和轉化生長因子-β1（TGF-β1）表達水平。結果甘草酸二銨聯合 MSC 7 d 后移入可以減輕造模大鼠肺泡炎及肺纖維化的程度，其中肺組織勻漿中的 HYP 及 TGF-β1 含量較 MSC 組明顯下降，差異有統計學意義（P<0.05）。甘草酸二銨聯合 MSC 7 d 后移入可明顯增加造模大鼠的抗氧化能力，與單純 MSC 7 d 后移入比較，MDA 含量下降，SOD 活性及 T-AOC 能力改善明顯，差異有統計學意義（P<0.05）；Ⅱ 型肺泡上皮細胞較單獨 MSC 移入明顯增多，且細胞形態完整。結論甘草酸二銨對 MSC 治療肺纖維化急性加重有協同作用。其機制可能與抑制肺纖維化過程中的炎性因子、減弱氧化應激反應以及促進 MSC 向肺組織移入并向 Ⅱ 型肺泡上皮細胞轉化有關。