目的觀察探討音猬因子(Shh)信號轉導通路在缺氧誘導的人視網膜色素上皮(hRPE)細胞血管內皮生長因子(VEGF)表達中的作用。 方法hRPE-19細胞分為正常對照組(Cont組)、缺氧組。缺氧組加入100 μmol/L CoCl2再分為缺氧對照組(CoCl2組)、cyclopamine處理組(CYA組)、二甲基亞砜對照組(DMSO組)。CYA組于造成缺氧前1 h加入20 μmol/L的cyclopamine進行預處理; DMSO組加入1‰DMSO。各組細胞培養4、8、12、24 h。采用熒光定量PCR(RT-PCR)檢測細胞內Shh、VEGF mRNA的表達; 酶聯免疫吸附測定試驗(ELISA)檢測細胞培養上清液中VEGF蛋白含量。 結果RT-PCT檢測結果顯示, 缺氧刺激4、8、12、24 h, 缺氧組細胞內Shh、VEGF mRNA表達逐漸增高, 與Cont組細胞內Shh(F=45.260)、VEGF mRNA(F=264.938)表達比較, 差異有統計學意義(P=0.001)。CYA組細胞內Shh、VEGF mRNA表達與CoCl2組比較, 差異均有統計學意義(P＜0.01);DMSO組細胞內Shh、VEGF mRNA表達與CoCl2組比較, 差異均無統計學意義(P＞0.05)。ELISA檢測結果顯示, CoCl2組細胞培養上清液中VEGF蛋白含量與Cont組比較, 差異有統計學意義(F=3 156.676, P=0.001)。CYA組細胞培養上清液中VEGF蛋白含量較CoCl2組明顯降低, 差異均有統計學意義(P＜0.01)。 結論Shh信號轉導通路可能參與了缺氧引起的hRPE細胞中VEGF的表達。
目的 觀察缺氧狀態下人視網膜色素上皮（hRPE）細胞中音猥因子（Shh）與血管內皮生長因子（VEGF）表達的關系。 方法 傳代培養hRPE細胞，取對數生長期3～6代細胞用于實驗。將hRPE細胞分為正常對照組、缺氧實驗組及環巴明抑制組。缺氧實驗組加入100 μmol/L CoCl2，環巴明抑制組于制作缺氧狀態前1 h加入20 μmol/L的環巴明進行預處理。3組細胞培養4、8、12、24 h。采用熒光定量聚合酶鏈反應檢測3組hRPE細胞中Shh、VEGF mRNA表達。采用酶聯免疫吸附法檢測正常對照組、缺氧實驗組細胞培養上清液中Shh、VEGF蛋白表達。采用Pearson相關性分析法分析缺氧實驗組hRPE細胞中Shh、VEGF mRNA表達與蛋白表達之間的關系。 結果 正常對照組可見少量Shh、VEGF mRNA及蛋白表達。缺氧實驗組Shh、VEGF mRNA及蛋白表達較正常對照組明顯增加，差異有統計學意義（F=178.364、183.732、77.456、91.572，P＜0.01）。環巴明抑制組Shh、VEGF mRNA表達較缺氧實驗組明顯降低，差異有統計學意義（F=68.745、121.834，P＜0.01）。相關性分析結果顯示，缺氧實驗組hRPE細胞中Shh蛋白表達與VEGF蛋白表達呈正相關（r=0.942，P＜0.05）；Shh mRNA表達與VEGF mRNA表達呈正相關（r=0.970，P＜0.01）。環巴明抑制組hRPE細胞中Shh mRNA表達與VEGF mRNA表達無相關性（r=0.915，P＞0.05）。 結論 缺氧狀態下hRPE細胞中Shh與VEGF表達呈正相關。
目的 探究根皮素聯合透明質酸鈉預防大鼠術后腹腔粘連形成的效果及其可能的機制。方法將40只大鼠隨機分為5組，假手術組大鼠只行開關腹手術，其余4組行盲腸搔刮摩擦法造模成功后接受不同處理：對照組及根皮素組（PHL組）大鼠造模后關腹，透明質酸鈉組（HA組）及透明質酸鈉聯和根皮素組（PHL+HA組）大鼠采用2 mL透明質酸鈉凝膠涂抹受損腹壁及盲腸后關腹；術后使用根皮素治療的組別（PHL組和PHL+HA組）每日予以2 mL由0.5%羧甲基纖維素鈉溶解的40 mg/kg根皮素灌胃治療，其余組別均予以0.5%羧甲基纖維素鈉溶液2 mL灌胃。術后第7天全身麻醉后處死大鼠，采用Nair’s評分評估術后第7天大鼠的粘連情況；并收集粘連組織或者正常腹膜組織（假手術組收集盲腸及其對面的腹膜組織），行免疫組織化學染色評估Nrf2抗體染色程度，行HE染色評估炎癥評分，行天狼星紅染色評估膠原組織厚度，并檢測轉化生長因子β1（transforming growth factor β1，TGF-β1）、丙二醛（malondialdehyde，MDA）和超氧化物歧化酶（superoxide dismutase，SOD）水平。結果所有大鼠均順利完成實驗，與對照組相比較，PHL+HA組的Nair’s評分、炎癥評分和TGF-β1的表達水平、膠原組織厚度、MDA水平降低（P<0.05），SOD活性和Nrf2的表達水平升高（P<0.05）。結論根皮素聯和透明質酸鈉可預防大鼠模型中術后腹腔粘連形成，這可能與降低炎癥反應、減輕膠原沉積、激活Nrf2通路進而抑制氧化應激反應有關。
目的通過比較TNF-α誘導滑膜MSCs（synovium-derived MSCs，SMSCs）與BMSCs凋亡，探討SMSCs的抗凋亡能力。 方法取患者自愿捐贈的滑膜組織及骨髓，分別采用組織貼壁法和密度梯度離心法分離培養SMSCs和BMSCs并傳代，取第3～5代細胞行細胞免疫表型及三系分化鑒定后進行實驗。實驗分為4組，其中SMSCs、BMSCs凋亡誘導組（SMSCs、BMSCs實驗組）用20 ng/mL TNF-α和10 μg/mL放線菌酮對細胞進行凋亡誘導，其對應對照組以正常培養基培養。倒置相差顯微鏡下觀察凋亡誘導細胞形態變化；培養24 h取各組細胞，采用細胞計數試劑盒8及流式細胞術檢測細胞存活率及凋亡率，Western blot法檢測細胞半胱氨酶天冬氨酶蛋白酶降解產物8、3（Cleaved Caspase-8、3）的表達。 結果經細胞表型及三系分化鑒定培養獲得的細胞均符合MSCs鑒定標準。倒置相差顯微鏡觀察示，隨凋亡誘導培養時間延長，兩實驗組細胞形態及生長均較對應的對照組差。培養24 h，兩對照組細胞存活率均為100%，未見細胞凋亡；SMSCs、BMSCs實驗組細胞存活率分別降至60.13%±8.63%及46.55%±10.54%，均顯著低于對照組（P＜0.05），SMSCs實驗組細胞存活率顯著高于BMSCs實驗組（t=3.152，P=0.006）。SMSCs和BMSCs對照組細胞凋亡率分別為1.12%±0.24%和1.35%±0.31%，兩實驗組分別增高至36.54%±8.63%及53.77%±11.52%，均顯著高于對照組（P＜0.05），且SMSCs實驗組細胞凋亡率顯著低于BMSCs實驗組（t=3.785，P=0.001）。兩對照組細胞Cleaved Caspase-8、3蛋白幾乎不表達，且SMSCs實驗組和BMSCs組細胞Cleaved Caspase-8、3蛋白明顯高表達；其中BMSCs實驗組明顯高于SMSCs實驗組（t=13.870，P=0.000；t=7.309，P=0.000）。 結論經TNF-α誘導培養，SMSCs凋亡明顯少于BMSCs，具有更強的抗凋亡能力。