目的觀察藍光誘導人視網膜色素上皮（RPE）細胞外泌體對核苷酸結合寡聚化結構樣受體蛋白（NLRP3）炎性體相關因子表達的影響。方法人RPE細胞株貼壁細胞分為實驗組和對照組。實驗組細胞以藍光照射6 h建立光損傷模型；對照組細胞常規培養。分級低溫超速離心法獲得兩組細胞外泌體，透射電子顯微鏡觀察其形態；蛋白免疫印跡法（Western blot）檢測兩組細胞外泌體表面CD63及白細胞介素（IL）-1β、IL-18、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶（caspase-1）蛋白相對表達水平。將兩組細胞外泌體作用于正常RPE細胞，據此分為藍光誘導細胞外泌體+實驗組、正常細胞外泌體+對照組。培養24 h后，Western blot檢測兩組細胞外泌體中IL-1β、IL-18、caspase-1蛋白表達；熒光實時定量聚合酶鏈反應檢測兩組細胞中NLRP3 mRNA表達。結果實驗組細胞發生損傷失去原有形態；外泌體均呈雙凹托盤狀，直徑50～200 nm；實驗組細胞外泌體中IL-1β（t=18.04）、IL-18（t=12.55）、caspase-1（t=14.70）蛋白表達量明顯高于對照組，差異有統計學意義（P＜0.001）。藍光誘導細胞外泌體+實驗組細胞外泌體中IL-1β（t=18.59）、IL-18（t=23.95）、caspase-1（t=35.27）蛋白表達量明顯高于正常細胞外泌體+對照組，差異均有統計學意義（P＜0.001）；藍光誘導細胞外泌體+實驗組、正常細胞外泌體+對照組細胞內NLRP3 mRNA相對表達量分別為1.000±0.069、0.200±0.010，兩者比較，差異有統計學意義（t=12.20，P＜0.001）。結論藍光誘導RPE細胞外泌體可使RPE細胞內NLRP3炎性體相關細胞因子IL-1β、IL-18、caspase-1蛋白和NLRP3 mRNA表達上調。
目的觀察玻璃體腔注射人臍帶間充質干細胞（hUCMSC）誘導分化的神經干細胞（NSC）對糖尿病大鼠視網膜腦源性神經營養因子（BDNF）表達及視網膜神經節細胞計數（RGC）的影響。 方法成年雄性Sprague-Dawley大鼠52只，隨機數字表法將其分為正常對照組（A組）、假干預組（B組）、玻璃體腔注射hUCMSC組（C組）、玻璃體腔注射NSC組（D組），每組13只大鼠。B、C、D組大鼠腹腔注射鏈尿佐菌素建立糖尿病模型；并于建模后1個月，分別對其左眼行玻璃體腔注射無菌磷酸鹽緩沖液、hUCMSC、NSC各2 μl。干預后2、4、6、8周，免疫組織化學染色觀察視網膜BDNF和胸腺肽-1（Thy-1）陽性染色情況，圖像分析軟件分析視網膜染色區BDNF平均累積吸光度（IA）值，并計數Thy-1陽性染色RGC。對比分析視網膜陽性染色區BDNF平均IA值與Thy-1陽性RGC計數的關系。 結果免疫組織化學染色觀察發現，A組大鼠視網膜BDNF和Thy-1呈陽性染色；B組大鼠視網膜BDNF和Thy-1陽性染色隨干預后時間延長而逐漸減少；C、D組大鼠視網膜BDNF和Thy-1陽性染色隨干預后時間延長而逐漸增加，D組表現更為明顯。除干預后2周，B、C組大鼠視網膜染色區BDNF平均IA值、Thy-1陽性RGC計數間差異無統計學意義外（P>0.05）；其余各時間點各組大鼠視網膜染色區BDNF平均IA值、Thy-1陽性RGC計數比較，差異均有統計學意義（P<0.05）。相關性分析結果顯示，糖尿病大鼠視網膜染色區BDNF平均IA值與Thy-1陽性RGC計數呈明顯正相關（r=0.964，P=0.000）。 結論玻璃體腔注射hUCMSC誘導分化的NSC能促進糖尿病大鼠視網膜BDNF表達，提高RGC計數。
目的 觀察氧化應激下視網膜色素上皮細胞（RPE）外泌體對RPE細胞血管內皮生長因子（VEGF）-A 及絲氨酸/蘇氨酸激酶（Akt）表達的影響。 方法 培養人RPE（ARPE-19）細胞，細胞培養基中加入濃度為2.5 μmol/L魚藤酮誘導ARPE-19細胞發生氧化應激損傷。收集上清液，采取梯度超速離心法分離純化外泌體。應用透射電子顯微鏡觀察外泌體形態；蛋白免疫印跡法（Western blot）檢測 ARPE-19 細胞外泌體表面特異性標志蛋白CD63的表達。將氧化應激下ARPE-19細胞外泌體與ARPE-19細胞共培養作為實驗組，等量正常RPE細胞外泌體與ARPE-19細胞共培養作為對照組。采用噻唑藍比色法檢測ARPE-19細胞的細胞活力，以酶聯免疫檢測儀測量波長570 nm處各孔的吸光度[A，舊稱光密度（OD）]值表示；免疫熒光染色法和Western blot檢測ARPE-19細胞VEGF-A、Akt 蛋白表達；實時定量聚合酶鏈反應（RT-PCR）檢測ARPE-19細胞VEGF-A、Akt mRNA表達。 結果 透射電子顯微鏡觀察發現，ARPE-19細胞外泌體呈圓形或橢圓形膜性小囊泡，直徑50～150 nm。Western blot檢測結果顯示，ARPE-19細胞外泌體表面表達特異性標志蛋白CD63。噻唑藍比色法結果顯示，實驗組、對照組ARPE-19細胞在波長570 nm處的A 值分別為0.582±0.015、0.787±0.032。實驗組ARPE-19細胞在波長570 nm處的A 值較對照組明顯降低，差異有統計學意義（t=20.886，P＜0.05）。免疫熒光染色法檢測結果顯示，與對照組比較，實驗組ARPE-19細胞VEGF-A蛋白表達明顯增強，Akt蛋白表達明顯減弱。Western blot 檢測結果顯示，與對照組比較，實驗組ARPE-19細胞VEGF-A蛋白相對表達量明顯升高，Akt蛋白相對表達量明顯降低，差異均有統計學意義（t=3.822、6.527，P＜0.05）。RT-PCR 檢測結果顯示，與對照組比較，實驗組ARPE-19細胞VEGF-A mRNA相對表達量明顯升高，Akt mRNA 相對表達量明顯降低，差異均有統計學意義（t=8.805、?7.823，P＜0.05）。 結論 氧化應激下ARPE-19細胞外泌體可抑制正常AREP-19細胞增生，上調VEGF-A表達，下調 Akt 表達。
目的 觀察精氨酸酶（Arg）抑制劑N羥基-正-Ｌ精氨酸（nor-NOHA）對體外高糖培養的恒河猴視網膜微血管內皮細胞（RF/6A細胞）的保護作用。 方法 體外培養RF/6A細胞，并將其分為正常對照組（A組）、高糖對照組（B組）、高糖+nor-NOHA處理組（C組）、高糖+二甲基亞砜（DMSO）對照組（D組）。A組細胞以5.5 mmol/L葡萄糖繼續培養；B～D組以25.0 mmol/L葡萄糖繼續培養，C、D組分別加入125 mg/L的nor-NOHA及1%DMSO。采用噻唑藍比色法、Transwell小室法和體外成管實驗分別檢測各組RF/6A細胞增生、遷移和管腔形成能力。采用熒光定量聚合酶鏈反應（RT-PCR）檢測各組RF/6A細胞中ArgⅠ、內皮型一氧化氮（NO）合酶（eNOS）、誘導型NO合酶（iNOS）的mRNA相對表達量。采用酶鏈免疫吸附測定試驗（ELISA）檢測各組RF/6A細胞培養上清液中NO和白細胞介素（IL）-1b的分泌量。 結果 B組RF/6A細胞增生、凋亡及管腔形成能力較A組明顯降低，差異有統計學意義（t=2.367、5.633、7.045，P＜0.05）；C組RF/6A細胞增生、凋亡及管腔形成能力較B組提高，差異有統計學意義（t=5.260、6.952、8.875，P＜0.05）。RT-PCR檢測結果顯示，與A組比較，B組RF/6A細胞中ArgⅠ、iNOS mRNA相對表達量升高（t=6.836、3.342），C組RF/6A細胞中ArgⅠ、iNOS mRNA相對表達量降低（t=4.904、7.192），差異均有統計學意義（P＜0.05）；B組RF/6A細胞中eNOS mRNA相對表達量降低（t=4.165），C組RF/6A細胞中eNOS mRNA相對表達量升高（t=6.594），差異均有統計學意義（P＜0.05）。ELISA檢測結果顯示，與A組比較，B組RF/6A細胞培養上清液中NO分泌量減少（t=4.925），C組RF/6A細胞培養上清液中NO分泌量增多（t=5.368），差異均有統計學意義（P＜0.05）；B組RF/6A細胞培養上清液中IL-1b分泌量增多（t=5.032），C組RF/6A細胞培養上清液中IL-1b分泌量減少（t=7.792），差異均有統計學意義（P＜0.05）。 結論 nor-NOHA對體外高糖培養的RF/6A細胞有保護作用，可提高其增生、遷移及管腔形成能力；其機制可能是通過平衡Arg/NOS的表達從而抑制氧化應激反應。
目的 構建攜帶色素上皮衍生因子（PEDF）基因的慢病毒（LV）載體并轉染人臍帶間充質干細胞（hUCMSCs），初步探討基因修飾PEDF-間充質干細胞的可行性。 方法 采用基因重組方法構建LV-PEDF載體，測定其LV滴度，以感染復數（MOI）值為10、30、50 的LV體外轉染hUCMSCs，并據此分為相應MOI值實驗組；以不含PEDF基因的相同MOI值的重組LV載體[LV-綠色熒光蛋白（GFP）]轉染hUCMSCs，并據此分為 相應MOI值對照組。熒光顯微鏡觀察兩組細胞轉染效率并計算轉染率。采用細胞免疫熒光法、免疫細胞化學法、實時定量聚合酶鏈反應（RT-PCR）檢測50MOI實驗組、50MOI對照組細胞中PEDF、血管內皮生長因子（VEGF） 表達水平。 結果 經酶切以及基因測序鑒定證明LV載體構建成功。轉染96 h后，50MOI實驗組細胞可見大量GFP表達，轉染效率為72.1%。熒光顯微鏡觀察發現，轉染后96 h，50MOI實驗組細胞胞漿PEDF、VEGF表達增強。光學顯微鏡觀察發現，轉染后96 h，50MOI實驗組細胞胞漿PEDF表達較低，而VEGF表達較強。RT-PCR檢測結果發現，50MOI實驗組、50MOI對照組細胞中PEDF mRNA相對表達量分別為0.170±0.028、0.015±0.007；VEGF mRNA相對表達量分別為0.265±0.022、0.285±0.049。兩組細胞中PEDF mRNA相對表達量比較，差異有統計學意義（F=70.29，P＜0.001）；VEGF mRNA相對表達量比較，差異無統計學意義（F=9.57，P＞0.05）。 結論 成功構建攜帶PEDF基因LV表達載體，并在hUCMSCs中過表達PEDF基因。