目的 觀察靶向大鼠沉默信息調節因子1(Sirt1)基因的小干擾(si)RNA慢病毒載體對大鼠視網膜神經節細胞(RGC)中Sirt1表達的影響。 方法 設計4條靶向大鼠Sirt1基因的siRNA靶點序列,構建靶向大鼠Sirt1基因的siRNA慢病毒載體。采用菌落聚合酶鏈反應(PCR)和DNA測序鑒定陽性克隆。應用陽性重組質粒與包裝質粒共轉染293T細胞,進行慢病毒包裝及病毒滴度測定。將RGC分為空白對照組、轉染陰性對照病毒載體組(NC組)以及分別轉染4個帶有干擾序列的si-Sirt1-1組、si-Sirt1-2組、si-Sirt1-3組、si-Sirt1-4組。采用熒光定量PCR及蛋白免疫印跡法(Western blot)分別檢測各組RGC中Sirt1 mRNA、蛋白相對表達量。 結果 菌落PCR鑒定和DNA測序結果顯示,靶向大鼠Sirt1基因的siRNA慢病毒載體構建成功。在293T細胞中成功包裝后,其病毒滴度為8×108 TU/ml。熒光定量PCR和Western blot檢測結果顯示,與NC組比較,si-Sirt1-1組、si-Sirt1-2組、si-Sirt1-3組、si-Sirt1-4組RGC中Sirt1 mRNA、蛋白相對表達量均明顯下降,差異有統計學意義(F=27.682、1 185.206,P=0.000、0.000);其中,以si-Sirt1-2組Sirt1 mRNA、蛋白相對表達量下降幅度最為明顯。 結論 靶向大鼠Sirt1基因的siRNA慢病毒載體可降低大鼠RGC中sirt1 mRNA、蛋白表達。
目的探討胸腔鏡輔助下心房顫動(atrial fibrillation,房顫)射頻消融同期或單獨行左心耳夾閉手術效果的有效性與安全性。方法回顧性分析 2018 年 11 月—2020 年 8 月北京天壇醫院收治的 12 例孤立性房顫患者的臨床資料,其中男 7 例、女 5 例,平均年齡(65.2±5.3)歲。陣發性房顫 2 例,持續性房顫 1 例,永久性房顫 9 例。結果圍手術期無死亡,5 例行房顫射頻消融+左心耳夾閉,6 例行單獨左心耳夾閉,1 例行左心耳部分縫扎。射頻消融+左心耳夾閉平均手術時間(293±70)min,術后即刻轉竇性心律 2 例(2/5),2 例(2/5)電復律后轉竇性心律,1 例(1/5)未轉竇性心律。單獨左心耳夾閉手術時間(71±14)min,左心耳夾(11 例,100.0%)位置良好未見移位。術后無腦卒中發生。術后 1 例出現胸腔積液,1 例出現皮下氣腫,未見傷口愈合不良。結論胸腔鏡輔助下房顫射頻消融同時或單獨行左心耳夾閉,簡化了手術方法,減低了手術風險,但是需要大樣本研究證實其遠期效果。
目的比較全胸腔鏡與胸腔鏡輔助小切口兩種不同方式行左心耳夾閉的手術效果。方法回顧性分析北京天壇醫院2018年11月—2022年3月期間接受全胸腔鏡或胸腔鏡輔助小切口下行左心耳夾閉41例手術患者的臨床資料,其中男30例、女11例,平均年齡(66.6±6.1)歲。CHA2DS2-VASc評分(4.5±1.1)分,HAS-BLED評分(3.7±1.5)分。根據手術方式分為全胸腔鏡組(23例)和小切口組(18例),比較兩組患者術前臨床基線資料、術中情況、術后并發癥及手術效果。結果全組無死亡病例。兩組在手術時長、胸部并發癥、左心耳閉合成功率、左心耳殘留長度、心耳夾移位等方面差異均無統計學意義(P>0.05)。兩組術后出現腦梗死、左心房血栓各1例。胸腔鏡組術后總引流量明顯少于小切口組,差異有統計學意義(P=0.032)。結論全胸腔鏡左心耳夾閉比胸腔鏡輔助小切口手術創傷小,未增加手術并發癥風險。
目的構建沉默信息調節因子1(sirt1)過表達慢病毒載體, 觀察其在體外培養的視網膜神經節細胞(RGC)中的表達。 方法構建大鼠sirt1 cDNA的過表達慢病毒載體, 采用PCR鑒定其是否構建成功。同時將其與GenBank上sirt1 cDNA標準序列進行對比分析。將鑒定后的慢病毒重組表達質粒pLV5-sirt1與包裝質粒共轉染293T細胞, 制備攜帶sirt1的慢病毒pLV5-sirt1。體外培養Sprague-Dawley大鼠的RGC, 應用pLV5-sirt1感染細胞設為sirt1過表達慢病毒組, 同時設未感染組和空載體感染組。采用熒光顯微鏡觀察細胞感染效率, 實時PCR和蛋白免疫印跡法(Western blot)檢測sirt1 mRNA和蛋白表達水平。 結果PCR鑒定結果顯示, 在1680堿基對處有擴增條帶, 表達的DNA條帶與sirt1目的片段大小一致。與GenBank上sirt1 cDNA標準序列進行對比分析, 測序結果顯示其含有與設計相同的靶序列。熒光顯微鏡觀察發現, 空載體感染組和sirt1過表達慢病毒組均可看到綠色熒光, 感染效率在90%以上。實時PCR檢測結果顯示, sirt1過表達慢病毒組sirt1 mRNA表達水平較未感染組、空載體感染組均明顯升高, 差異有統計學意義(P<0.05)。Western blot檢測結果顯示, sirt1過表達慢病毒組sirt1蛋白表達水平較未感染組、空載體感染組均明顯升高, 差異有統計學意義(P<0.05)。 結論成功構建的大鼠sirt1過表達慢病毒載體能夠在體外有效感染大鼠RGC, 提高sirt1在RGC中的表達水平。
目的 探討達芬奇機器人在乳腺癌根治及一期假體重建中的臨床應用。方法回顧性分析2022年3月至 2022 年4月期間于空軍軍醫大學第一附屬醫院甲乳血管外科接受保留乳頭乳暈的皮下腺體切除并一期假體重建的5例乳腺癌患者的臨床資料,包括操作要點、手術時間、術后并發癥及患者報告結局情況。結果5例患者中,2例接受了胸肌后無補片的假體重建,其中1例同時接受了機器人下甲狀腺癌根治術;3例接受胸肌前聯合生物補片的假體重建,其中2例患者接受了雙側乳房重建手術。5例患者的手術時間為240~320 min,平均291 min;術中出血10~30 mL,平均18 mL,未出現術中出血導致腔鏡手術被迫轉為開放手術的情況;術后前3天平均引流量約為78 mL/d(60~100 mL/d),術后3~7 d平均引流量為38 mL/d(30~50 mL/d);引流管拔除時間為術后10~18 d,平均13.2 d;平均手術費用為45 072元(43 420~47 524元);術后無感染及乳頭乳暈復合體缺血壞死發生;住院時間1~3 d,平均1.8 d。術后1個月乳房滿意度評分為64~82分,平均為76.20分。結論機器人輔助下進行乳腺癌根治及一期假體重建具有更好的顯露空間,術后無特殊并發癥,患者滿意度較高,安全可行,但手術時間較長,費用昂貴,在手術選擇時仍需個性化對待。