自體和非自體的生物血管不能滿足臨床血管外科的需要。使用理化方法或單純種植內皮細胞的方法處理人工血管因腔內血栓形成而效果小理想。為了增加人工血管的抗血栓活性,利用基因工程的方法對內皮細胞進行改造,可使其獲得穩定表達抗凝血因子的能力。用這種基因工程改造的內皮細胞種植于人工血管,有可能獲得較理想的效果。而最終要獲得理想的血管移植物,尚有許多需要解決的問題。
目的 觀察小干擾RNA(small interference RNA, siRNA)對肝癌HepG2細胞血管內皮生長因子(VEGF)表達的抑制作用。方法 將VEGF siRNA經LipofectamineTM 2000脂質體轉染肝癌HepG2細胞后,實時熒光定量PCR和Western blot方法分別檢測VEGF mRNA和蛋白的表達,ELISA檢測細胞培養上清液中VEGF蛋白濃度。 結果 細胞培養6 h后siRNA的轉染效率為(90.4±2.9)%,轉染后肝癌HepG2細胞中VEGF mRNA和蛋白的表達明顯減少,細胞培養上清液中VEGF蛋白表達下降。結論 運用RNA干擾技術,可以有效地干擾肝癌HepG2細胞VEGF的表達并能降低VEGF的生成。
目的探討攜帶BMP-12基因的腺病毒載體轉染誘導外周血MSCs向肌腱/韌帶細胞分化的效果。 方法取3~4月齡新西蘭兔外周血,體外分離培養外周血MSCs至第3代。采用AdEasy腺病毒載體系統制備BMP-12重組腺病毒載體。將BMP-12重組腺病毒體體外轉染第3代外周血MSCs,轉染后24 h通過流式細胞術(flow cytometry,FCM)檢測轉染效率,倒置相差顯微鏡觀察細胞形態變化,轉染后8、24 h在熒光顯微鏡下觀察綠色熒光蛋白(green fluorescent protein,GFP)表達;轉染后0、7、14 d,采用免疫組織化學染色觀察I型膠原表達情況;實時定量PCR檢測肌腱/韌帶特異基因Tenomodulin、Tenascin-C和Decorin mRNA表達水平,并設未轉染細胞作為對照組。 結果轉染后24 h,倒置相差顯微鏡觀察示細胞生長增殖緩慢,細胞形態清晰;FCM檢測示,轉染組轉染效率為99.57%,未轉染組為2.46%;轉染后8 h,熒光顯微鏡下即可見GFP表達,隨培養時間延長GFP表達逐漸增多,24 h時幾乎所有細胞均可見GFP表達。免疫組織化學染色示,隨轉染時間延長,Ⅰ型膠原表達逐漸增強;轉染組轉染后14 d,肌腱/韌帶特異基因Tenomodulin、Tenascin-C和Decorin mRNA表達水平分別為0.061±0.013、0.029±0.008、0.679±0.067,均顯著高于未轉染組的0.004±0.002、0.003±0.001、0.142±0.024,差異有統計學意義(t=—7.700,P=0.031;t=—5.741,P=0.020;t=—12.998,P=0.000)。 結論BMP-12重組腺病毒載體可明顯促進外周血MSCs向肌腱/韌帶成纖維細胞表型分化,并促進肌腱/韌帶特異基因表達和細胞外基質產生,為外周血MSCs用于肌腱/韌帶再生提供了依據。
目的 構建并驗證一種與臨床散發性結直腸癌類似且同時表達 KrasLSL-G12D/-和 Smad4loxp/loxp的雙轉基因小鼠模型。 方法 將 Krastm4Tyj/J 小鼠與 Smad4tm2.1Cxd/J 小鼠轉換遺傳背景后進行雜交建系,通過聚合酶鏈式反應技術鑒定子代小鼠基因型,獲得基因型為 KrasLSL-G12D/-+Smad4loxp/loxp的雙轉基因小鼠模型。通過向雙轉基因模型小鼠的腸黏膜下注射 LentivirusCre-IRES-Luciferase,在 IVIS 系統下觀察并統計雙轉基因模型小鼠的成瘤情況,對其瘤變組織進行取樣并行蘇木精-伊紅染色法染色,以驗證雙轉基因模型小鼠的成瘤能力。 結果 經培育篩選獲得了能夠同時表達 KrasLSL-G12D/-和 Smad4loxp/loxp的雙轉基因小鼠模型;通過構建的病毒載體利用 Cre 重組酶成功感染并誘導小鼠腸上皮細胞突變而形成癌灶。 結論 本研究構建的 KrasLSL-G12D/-+Smad4loxp/loxp雙轉基因模型小鼠的結腸上皮細胞能在 Cre 重組酶作用下誘導癌變,模擬了人類散發性結直腸癌的病理過程。
臨床上,骨折不愈合常導致患者遭受疼痛的困擾甚至殘疾,而且往往需要額外的手術治療來恢復骨骼肌肉功能,因此骨折不愈合的治療一直是骨科領域的難點。近些年,隨著基因工程的發展,利用基因治療骨折不愈合的技術得以廣泛研究。大量實驗證實,將編碼骨折愈合相關生長因子的目的基因通過體內或體外不同的傳遞方式導入至靶細胞,從而表達出特定的生長因子,可以促進骨折修復,這為治療骨折不愈合提供了新途徑。該文將討論成骨基因不同傳遞方式的研究現狀,以及各自的優缺點,旨在為目的基因治療骨折不愈合提供理論基礎。
近年來,基因工程(genetic engineering,GE)和克隆技術的突破性進展使得 “無指定病原體(designated pathogen free,DPF)異種移植(xenotransplantation,XENO)醫用(medical,M)豬” (以下簡稱:GE-DPF-XENO-M豬)培育成功。以GE-DPF-XENO-M豬為基礎,大量以非人類靈長類動物(non human primates,NHPs)為受體的異種移植實驗基本上回答了人們最為關心的問題: ① 克服超急性排斥反應;② 克服跨物種感染。這些成就直接催生了新型“異種移植亞臨床研究模型”的問世。2021年底,美國Montgomery及Porrett團隊先后將GE豬腎移植到3例腦死亡遺體,48~72 h觀察沒有超急性排異反應發生。這3例亞臨床研究為異種移植進入臨床研究提供了科學依據。 2022年1月7日,美國馬里蘭Griffith等將一顆GE豬心移植給一位嚴重心臟功能衰竭的患者,并存活59 d。以上進展表明異種移植向臨床研究階段邁出了關鍵性一步,值得我國同行關注和借鑒。
新型冠狀病毒肺炎(COVID-19)疫情在全球的肆虐,不僅對公眾的健康造成了重大威脅,也對全球衛生醫療系統和社會經濟發展帶來了巨大沖擊。因此,加快疫苗和抗體藥物的研發,為人們提供有效的保護和治療措施,成為廣大科學研究人員和醫療機構的首要任務。目前全球已有多款新冠疫苗和抗體藥物進入臨床研究或獲批上市,本文對多款利用基因工程技術研發的基于S蛋白的新冠疫苗和抗體(包括亞單位疫苗、病毒載體疫苗、DNA疫苗、mRNA疫苗以及一些中和抗體藥物)進行了簡要闡述,同時也對疫苗和抗體藥物的未來發展進行了探討。