本研究目的為構建攜帶針對大鼠環磷酸腺苷反應元件結合因子的結合蛋白(CBP)基因的siRNA重組慢病毒,感染原代海馬神經元并檢測其對乙酰化組蛋白表達的抑制作用。本文構建了4種siCBP,并檢測其對神經元中CBP表達的抑制作用,選擇效果最好的一種檢測神經元中HAT活性及乙酰化組蛋白Ac-H3、Ac-H4的表達。酶切及測序鑒定證實siCBP正確克隆至慢病毒質粒中,4種siCBP感染原代海馬神經元后CBP mRNA和蛋白表達有不同程度降低,效果最佳的GR806對神經元的HAT活性及Ac-H3、Ac-H4表達均有顯著抑制作用。本研究為后續應用siCBP闡明CBP依賴的組蛋白乙酰化對海馬區學習記憶功能調節的相關分子機制提供了實驗工具。
目的 探討用小RNA 干擾抑制Ku80 基因表達以提高A549 肺癌細胞的放射敏感性。方法 設計并化學合成Ku80 siRNA, 轉染體外培養的A549 肺癌細胞。利用RT-PCR 和Western blot分別從mRNA 和蛋白質水平對轉染后的細胞Ku80 基因表達情況進行測定, 同時上述轉染的細胞分別照射2、4、6、8 及10 Gy, 利用克隆形成實驗測定放射敏感性的變化。結果 RT-PCR 檢測顯示在A549 肺癌細胞轉染Ku80 siRNA 后24、48 和72 h 三個時間點Ku80 mRNA 含量減少, Western blot 分析顯示在轉染48 和72 h 兩個時間點Ku80 蛋白含量減少, 與對照組比較有統計學差異( P lt;0. 05) 。克隆形成實驗提示A549 肺癌細胞轉染Ku80 siRNA 后放射敏感性增強。結論 Ku80 siRNA 轉染A549 肺癌細胞后能夠有效抑制Ku80 基因表達, 提高其放射敏感性。
目的探討沉默PTEN基因后對結腸癌細胞增殖和侵襲影響的機理。 方法RT-PCR和Westernblot法分析PTEN在4種結腸癌細胞株（HT-29、WiDr、CaCo-2、Colo320細胞）中的表達，應用短基因干擾RNA（siRNA）技術合成PTEN siRNA并轉染結腸癌細胞，Western blot法再次檢測PTEN蛋白在結腸癌細胞株的表達。細胞增殖和侵襲實驗分別檢測PTEN基因沉默后對結腸癌細胞自身增殖和侵襲能力的影響。 結果PTEN在4種結腸癌細胞株中均有表達；4種結腸癌細胞轉染PTEN siRNA后，Western blot法證實PTEN蛋白表達明顯被抑制（P＜0.01），結腸癌細胞的增殖和侵襲能力明顯增強（P＜0.01）。 結論PTEN基因的沉默能夠明顯增強結腸癌細胞的增殖和侵襲能力，增強PTEN基因可為臨床靶向治療結腸癌的轉移提供新途徑。