建立人結腸癌細胞株SW480裸鼠移植瘤模型，觀察8肽生長抑素(SMS 201-995，SMS)對移植瘤的作用及機理。結果∶SMS組及SMS+PG(5肽胃泌素)組移植瘤的體積、重量、瘤細胞內cAMP、DNA、蛋白質含量、S期和G2M期細胞數及增殖指數均顯著低于PG組及對照組，PG組顯著高于對照組；而G0/G1期細胞數則顯著高于PG組及對照組，PG組顯著低于對照組。本實驗結果提示：生長抑素具有直接抑制人結腸癌細胞株SW480移植瘤生長的作用，又可抑制胃泌素對移植瘤的促增殖作用。這種作用機理是通過抑制瘤細胞內cAMP、DNA和蛋白質的合成，從而抑制瘤細胞從G0/G1期進入到S期和G2M期。這為大腸癌患者應用生長抑素類似物進行內分泌治療提供了實驗依據。
為探討新城疫病毒(簡稱NDV)聯合熱固化瘤苗對小鼠腫瘤的抑瘤作用和免疫調節作用，實驗檢測了荷瘤小鼠的抑瘤率和細胞免疫功能。實驗將接種上SP2/0及H22瘤細胞的荷瘤小鼠分為單純NDV治療組(實驗Ⅰ組)和NDV+熱固化瘤苗治療組(實驗Ⅱ組)。結果顯示： 實驗Ⅰ組與實驗Ⅱ組抑瘤率分別為24.8%和41.1%，兩組的平均瘤重明顯小于對照組，且實驗Ⅰ組和實驗Ⅱ組在不同時段的自然殺傷(NK)細胞活性均高于對照組(Ｐ＜0.01)，實驗Ⅱ組的抑瘤率和NK細胞活性比實驗Ⅰ組更高。提示NDV聯合熱固化瘤苗對荷瘤小鼠的抑瘤作用和增強NK細胞活性均比單獨應用NDV的效果好。
目的探討連續多次注射富血小板血漿（platelet-rich plasma，PRP）對脂肪移植成活率及移植質量的影響，為臨床應用提供實驗依據。 方法取接受吸脂手術的1名25歲健康女性自愿捐贈的大腿后外側區脂肪，采用靜置法純化脂肪顆粒；抽取其外周靜脈血，經兩次200 × g離心10 min收集PRP；將PRP與10%CaCl2溶液以10∶1混合。選取5周齡雌性裸鼠24只，體重（20 ± 3）g，隨機分為實驗組與對照組（n=12）。實驗組于裸鼠左、右側背部皮下各注射脂肪顆粒與PRP（10∶2）混合物0.8 mL，對照組注射相同劑量脂肪顆粒與生理鹽水（10∶2）混合物。在首次移植后5、10 d，兩組再次分別注射PRP與生理鹽水0.14 mL。移植后觀察裸鼠存活情況；于首次移植后15、30、90、180 d，兩組取標本進行大體觀察，測定組織塊重量與體積；組織學觀察組織與細胞形態特征，計算壞死面積比與微血管計數。結果裸鼠均成活至實驗完成，兩組移植部位均未出現感染及破潰。各時間點實驗組組織塊表面血管生成以及橫切面液化、壞死情況均好于對照組。首次移植后15、30、90 d實驗組組織塊重量及體積均顯著大于對照組（P lt; 0.05），180 d時兩組組織塊重量及體積相似（P gt; 0.05）。組織學觀察示實驗組各時間點脂肪細胞形態結構均清晰，中心區空泡逐漸增大，無明顯壞死物質及鈣化發生；對照組脂肪細胞形態結構逐漸紊亂，且出現大量壞死物質，鈣化明顯。實驗組15、180 d時壞死面積比均小于對照組，微血管計數均多于對照組，差異均有統計學意義（P lt; 0.05）。 結論180 d內連續多次注射PRP輔助脂肪移植能促進脂肪成活并提高移植質量。
目的探討血管基質片段（vascular stromal fraction，SVF）輔助游離脂肪移植促進其早期存活的相關機制。 方法取5例行腹部抽脂手術女性患者自愿捐贈的脂肪組織分離、培養SVF。4～6周齡裸鼠24只（體重15～18 g），將裸鼠背部左、右側隨機分為A、B組（n=24），采用Coleman技術分別于A、B組裸鼠背部皮下移植脂肪0.5 mL和含5 × 105個SVF的脂肪0.5 mL。移植后1、3、5、7 d分別取6只裸鼠，取出移植脂肪組織，行大體觀察、CD31免疫組織化學染色及Western blot檢測分析。 結果隨著移植時間增加，A、B組移植脂肪組織濕重均呈上升趨勢，但各時間點A、B組間比較差異均無統計學意義（P gt; 0.05）。移植后1、3 d兩組均未見CD31陽性細胞；5、7 d B組CD31陽性細胞數顯著高于A組（P lt; 0.05），兩組7 d時CD31陽性細胞數顯著高于5 d時（P lt; 0.05）。Western blot檢測示，兩組移植脂肪中VEGF蛋白表達在移植后第3天達峰值，隨后開始下降；1、3、5 d B組VEGF蛋白表達明顯高于A組（P lt; 0.05）。兩組移植脂肪中HGF蛋白表達在移植后前5 d均保持在較高水平，7 d開始下降，B組均明顯高于A組（P lt; 0.05）。 結論在游離脂肪移植早期，SVF通過旁分泌生長因子促進移植脂肪血管生成。
目的探討與聚乳酸聚乙酸共聚物[poly（lactide-co-glycolide），PLGA]支架復合后的成肌細胞體外經軟骨來源形成蛋白2（cartilage-derived morphogenetic protein 2，CDMP-2）聯合TGF-β1誘導后，能否在裸鼠體內異位構建組織工程軟骨。 方法取1歲齡雄性比格犬股直肌肌肉分離培養成肌細胞，取第4代成肌細胞接種于PLGA支架，加入含CDMP-2與TGF-β1的軟骨誘導液體外培養2周。實驗分為4組：A組為經軟骨誘導的成肌細胞-PLGA復合物組，B組為未經軟骨誘導的成肌細胞-PLGA復合物組，C組為經軟骨誘導的單純PLGA支架組，D組為單純PLGA支架組。于24只裸鼠背部皮下兩側制備4個皮下腔隙，分別植入4組材料。術后8、12周處死裸鼠，取材行大體觀察、HE及甲苯胺藍染色、Ⅰ型膠原及Ⅱ型膠原免疫組織化學染色觀察，RT-PCR檢測Ⅰ型膠原、Ⅱ型膠原、蛋白聚糖（Aggrecan）、Sox9 mRNA表達，阿利新藍染色檢測糖胺聚糖（glycosaminoglycans，GAG）含量，生物力學試驗檢測標本壓縮彈性模量。 結果A組標本術后8周呈類軟骨樣，乳白色，表面光潔，有彈性；12周時外觀和彈性與正常軟骨相似。B組術后8周僅殘余少許組織，12周已完全降解；C、D組標本術后8周均降解消失。HE染色示A組8、12周時有成熟軟骨陷窩形成；B組8周時組織內未見軟骨陷窩形成。甲苯胺藍染色示A組8、12周時組織內新生軟骨細胞形成，細胞橢圓，排列整齊，細胞陷窩形成，細胞質和細胞外基質均藍染陽性；B組8周時組織內未見藍染的細胞外基質。Ⅰ、Ⅱ型膠原免疫組織化學染色示A組8、12周時均呈陽性表達；B組8周時呈陰性表達。RT-PCR檢測示術后8、12周A組均可見Ⅰ型膠原、Ⅱ型膠原、Aggrecan和Sox9 mRNA表達，B組均呈陰性。術后12周A組壓縮彈性模量為（90.79 ± 1.78） MPa，GAG含量為（10.20 ± 1.07）μg/mL與正常半月板相比，差異有統計學意義（P lt; 0.05）。 結論體外CDMP-2聯合TGF-β1軟骨誘導的比格犬成肌細胞復合PLGA支架后具備在裸鼠體內異位構建組織工程軟骨的能力。
目的 人Ⅰ型前膠原基因（Col Ⅰ A1）反義寡核苷酸（antisense oligodeoxyneucleotide，ASODN）對體外培養的人增生性瘢痕成纖維細胞有抑制膠原合成作用，擬進一步探討Col Ⅰ A1 ASODN 對裸鼠移植模型體內的人增生性瘢痕的膠原合成作用。 方法 SPF 級BALB/c-nunu 品系6 ～ 8 周齡雌性裸鼠60 只，體重約20 g；取行瘢痕切除手術患者自愿捐贈的瘢痕組織塊去表皮后，移植至裸鼠背部肩胛內側皮下，每只裸鼠移植1 塊，制備人增生性瘢痕裸鼠移植模型。將58 只成功制備模型的裸鼠根據處理方法不同，隨機分成3 組，于瘢痕移植2 周根據分組行經皮穿刺瘢痕內注射。A 組（n=20）：5 μL 濃度為3 mmol/L Col Ⅰ A1 ASODN、3 μL 脂質體、92 μL Opti-MEM Ⅰ減血清培養基；B 組（n=20）： 3 μL 脂 質體、97 μL Opti-MEM Ⅰ減血清培養基；C 組（n=18）：100 μL Opti-MEM Ⅰ減血清培養基。實驗最初2 周每天注射1 次，之后隔天1 次，至實驗取材。注射后2、4、6 周，對存活裸鼠進行瘢痕硬度測量后，處死裸鼠取瘢痕組織行膠原染色組織學觀察以及透射電鏡觀察；提取細胞總RNA 后行RT-PCR 測定Col Ⅰ A1 mRNA 相對含量；ELISA 法行Col Ⅰ A1 蛋白定量分析。 結果 注射后6 周內17 只裸鼠死亡；共41 只裸鼠40 塊瘢痕組織符合實驗標準，納入實驗；A、B、C 組各14、13、14 只。注射后2 周，3 組間瘢痕硬度比較，差異均無統計學意義（P gt; 0.05）；4、6 周時A 組與B、C 組比較， 差異有統計學意義（P lt; 0.05），B、C 組間比較差異無統計學意義（P gt; 0.05）。隨時間延長，組織學觀察示3 組Ⅲ型膠原表達上升，A 組最明顯，Ⅰ型膠原排列規則。透射電鏡觀察示A 組成纖維細胞退化，膠原纖維排列更趨于一致；B、C 組膠原纖維排列也逐漸規則。注射后2、4 周3 組間Col Ⅰ A1 mRNA 和蛋白表達量比較，差異均有統計學意義（P lt; 0.05）；6 周時A 組與B、C 組比較，差異有統計學意義（P lt; 0.05），B、C 組間比較差異無統計學意義（P gt; 0.05）。 結論 在人增生性瘢痕裸鼠移植模型的瘢痕內注射Col Ⅰ A1 ASODN 可抑制Col Ⅰ A1 mRNA 及Ⅰ型膠原表達，促進瘢痕組織成熟、軟化，脂質體可促進該抑制效果。
目的 目前組織工程骨（tissue engineered bone，TEB）缺乏有效可行的儲存、運輸方法。評估TEB 經過凍干處理后其成骨活性變化及其異位成骨能力，探索新的TEB 儲存和運輸策略。 方法 取志愿者捐獻的骨髓和骨組織分別培養hBMSCs 和制備脫鈣骨基質（decalcified bone matrix，DBM），取第3 代hBMSCs 與DBM 復合構建TEB，分別于體外孵育3、5、7、9、12、15 d 經過低溫干燥后得到凍干組織工程骨（freeze-dried tissue engineered bone，FTEB），并將體外培養不同時間點的TEB 和FTEB 行掃描電鏡觀察。Western blot 法檢測TEB 和FTEB 內成骨相關蛋白BMP-2、TGF-β1、IGF-1 的變化。將FTEB、TEB 和DBM 分別移植于30 只6 周齡BALB/C 裸鼠皮下進行異位成骨實驗（n=10），并行X 線片評分、CT 值檢測以及HE 染色觀察。 結果 掃描電鏡觀察示，TEB 中種子細胞保持正常形態，隨著培養時間的延長分泌細胞外基質逐漸增加；FTEB 內的種子細胞脫水皺縮而亡，細胞外基質位于疏松的DBM 支架材料中。Westernblot 檢測示，TEB 和FTEB 內BMP-2、TGF-β1 和IGF-1 表達均為陽性，除體外培養15 d TEB 和FTEB 的TGF-β1 蛋白積分吸光度（IA）比值比較差異有統計學意義（P lt; 0.05）外，其余各時間點各蛋白含量比較差異均無統計學意義（P gt; 0.05）。移植術后4 周各種移植物未見明顯鈣化；術后8、12 周，TEB 和FTEB 移植裸鼠皮下可以實現較好的異位成骨。通過X線片評分、CT 值比較移植物鈣化程度，TEB 和FTEB 差異無統計學意義（P gt; 0.05），而DBM 未見明顯鈣化。HE 染色示TEB 和FTEB 出現鈣化，DBM 降解吸收。 結論 FTEB 與TEB 具有相似的成骨活性，為TEB 的儲存和運輸提供了一種新的策略和方法。
目的 探討小鼠胚胎肝臟間充質干細胞的體外分離培養方法，并觀察其成骨分化潛能及與陶瓷化骨支架材料的復合能力。方法 將小鼠胎肝組織制成單細胞懸液行原代和傳代培養，流式細胞儀檢測其表面標志。用化學成骨誘導體系對純化的胎肝間充質干細胞行成骨誘導，并進行成骨功能檢測。將其與經過Ⅰ型膠原表面改性的陶瓷化骨復合培養，觀察細胞在其上的黏附生長情況。結果 原代培養的胎肝間充質干細胞，具有集落形成能力，為梭形或多角形，易于傳代，傳代細胞與原代細胞大小、形態相似。流式細胞儀檢測表明,傳代后的細胞CD29、CD44陽性，CD34、CD45陰性，表達間充質干細胞的特征標志。成骨誘導7 d后堿性磷酸酶染色可見有較多陽性細胞，Ⅰ型膠原免疫組織化學染色呈強陽性；14 d后，細胞堿性磷酸酶活性定量檢測明顯增高；28 d后，礦化結節染色呈陽性。將細胞與經膠原表面改性后的煅燒陶瓷化骨復合培養，掃描電鏡見載體上有大量細胞黏附于材料表面。結論 小鼠胎肝間充質干細胞易于獲取及傳代；體外成骨誘導后可向成骨細胞方向分化；能在陶瓷化骨支架材料上黏附生長。
摘要:目的:探討表達吲哚胺2,3二氧化酶(IDO)的KC對同種異體小鼠移植皮片存活時間的影響及其機制。方法:構建BABL/c →C57BL/6的皮膚移植模型,分別于移植術后第2、7、14天輸注KC,于移植術后第7天每組各取2只皮瓣行HE染色和TUNEL以檢測淋巴細胞浸潤和凋亡情況。KaplanMeier對數秩檢驗對各組進行生存分析。結果:輸入表達IDO和FasL的KC能明顯延長BABL/c →C57BL/6皮膚移植模型中皮膚移植物的存活時間,1－甲基色氨酸能阻斷此效應。IFNγ組皮瓣浸潤淋巴細胞的凋亡率較高(Plt;0.05)。結論:表達IDO和FasL的KC在體內能明顯延長同種異體小鼠皮片的存活時間,IDO在KC維持外周免疫耐受中發揮重要作用。Abstract: Objective: To investigate kupffer cells(KC) expressing indoleamine 2,3dioxygenase(IDO) on the survival of grafted skin in mouse and its underlying mechanism. Methods: BABL/c skin was transplanted to C57BL/6. Donor KC were injected i.v. at days 2,7, 14 before transplantation. HE and TUNELAP were used to identify infiltrating cells and apoptotic cells in section of skin allografts from 7 days posttransplantation respectively. The survival rate of recipients among groups were analyzed by Logrank test. Results: Injection of KC expressing IDO and FasL from BABL/c mice into C57BL/6 could prolong a skin graft survival from the donor, but 1methyltryptophan could block the effect in vivo. The apoptosis rate of lymphocyte among skin graft in IFNγ group is more than other group(Plt;0.05). Conclusion: IDO and FasLexpressing KC from the donor of mouse can significantly prolong the skin graft survival. IDO may play an important role in KC to induce immune tolerance.
目的 為缺血療法在胰腺癌的臨床應用提供基礎研究資料。方法在建立人胰腺癌細胞株裸小鼠胰腺原位移植瘤模型的基礎上，結扎荷瘤裸鼠胃十二指腸動脈、胰十二指腸下動脈及背胰動脈，誘導胰腺右葉區域性缺血，觀察缺血對裸小鼠胰腺移植癌生長、移植癌及癌周胰腺組織病理形態學的影響。結果 缺血組移植癌生長緩慢，倍增時間延長，移植癌體積、癌細胞增殖指數及蛋白含量在術后第3、7、14天均顯著低于對照組(Ｐ＜0.01)。光鏡下缺血組移植癌呈大片凝固壞死，周圍有漸進性壞死細胞及炎癥細胞浸潤； 癌周胰腺組織腺泡萎縮破壞，可見廣泛纖維化及淋巴細胞浸潤。結論區域性缺血對裸小鼠胰腺移植癌有確切的殺傷和抑制效應，癌周胰腺組織的缺血性改變可能不利于移植癌的生長。