目的探討miRNA219-5P（miR219-5P）調控Smad4在TGF-β1誘導人肌腱成纖維細胞（tendonderived fibroblasts，TDFs）纖維化過程中的作用。 方法取患者自愿捐贈的肌腱組織分離培養TDFs，取第3代細胞進行實驗。化學合成miR219-5P類似物（mimics）、阻遏物（inhibitor）及陰性對照序列，分別轉染TDFs 48 h后，采用實時定量PCR及Western blot法分別檢測miR219-5P基因及Smad4蛋白表達情況；以正常細胞作為空白對照。信息學軟件預測miR219-5P與Smad4基因3’UTR區結合位點，構建Smad4預測基因3’UTR-PGL3重組質粒，構建野生型及突變型報告基因表達載體，并通過熒光素酶報告基因實驗進行靶位驗證。取正常及轉染后TDFs，采用TGF-β1誘導細胞發生纖維化，于培養24、48、72 h采用細胞計數試劑盒8法檢測細胞增殖活性變化，72 h時采用Western blot法檢測纖維化相關蛋白指標。 結果miR219-5P mimics轉染TDFs可明顯上調miR219-5P表達、下調Smad4蛋白表達，而miR219-5P inhibitor抑制細胞內miR219-5P表達、增加Smad4蛋白表達，與空白對照組比較差異均有統計學意義（P<0.05）。熒光素酶實驗顯示，與pGL3-WT-Smad4轉染組比較，pGL3-WT-Smad4+mimics轉染組細胞內熒光素酶活性降低、pGL3-WT-Smad4+inhibitor轉染組活性增強（P<0.05）；而pGL3-MT-Smad4+mimics轉染組、pGL3-MT-Smad4+inhibitor轉染組組間比較無明顯變化（P>0.05）。與空白對照組比較，TGF-β1誘導培養72 h后細胞增殖活性明顯增強（P<0.01），同時上調細胞纖維化相關蛋白指標的表達（P<0.01）；與直接誘導組比較，miR219-5P過表達且誘導組TDFs細胞增殖活性和纖維化蛋白指標升高趨勢得到抑制，而miR219-5P表達抑制且誘導組細胞增殖活性和纖維化蛋白指標則進一步增強，差異有統計學意義（P<0.01）。 結論miR219-5P可通過抑制其靶基因Smad4表達，顯著抑制TGF-β1誘導TDFs纖維化。
目的 探討 miR-34a 調節結腸癌細胞對奧沙利鉑（OXA）的耐藥作用及其機制。 方法 采用實時熒光定量 PCR（qRT-PCR）方法檢測結腸癌組織和細胞系中 miR-34a 的表達水平；采用基因軟件預測、分析及檢測結腸癌細胞中 miR-34a 的下游靶基因；采用細胞計數試劑盒（CCK-8 試劑盒）檢測細胞的生存率；采用流式細胞儀以及 Western blot 方法檢測結腸癌細胞的凋亡和自噬情況。 結果 接受 OXA 化療的結腸癌患者的血清中miR-34a 的表達水平明顯降低，轉化生長因子-β（TGF-β）mRNA 和 Smad4 mRNA 的表達水平均明顯增高。OXA 引起 miR-34a 的表達下調，親代結腸癌細胞和對 OXA 耐藥的結腸癌細胞中 TGF-β 和 Smad4 的表達均上調。自噬的激活增強了結腸癌細胞對 OXA 的耐藥性。在結腸癌組織中，Smad4 mRNA 和 miR-34a 的表達水平間具有負相關性，過表達 miR-34a 通過靶向抑制 Smad4 的表達來抑制自噬的激活并降低耐藥性。 結論 miR-34a 抑制 TGF-β/Smad4 信號通路的激活，抑制自噬降低結腸癌細胞對 OXA 的耐藥性。
目的 構建并驗證一種與臨床散發性結直腸癌類似且同時表達 KrasLSL-G12D/-和 Smad4loxp/loxp的雙轉基因小鼠模型。 方法 將 Krastm4Tyj/J 小鼠與 Smad4tm2.1Cxd/J 小鼠轉換遺傳背景后進行雜交建系，通過聚合酶鏈式反應技術鑒定子代小鼠基因型，獲得基因型為 KrasLSL-G12D/-+Smad4loxp/loxp的雙轉基因小鼠模型。通過向雙轉基因模型小鼠的腸黏膜下注射 LentivirusCre-IRES-Luciferase，在 IVIS 系統下觀察并統計雙轉基因模型小鼠的成瘤情況，對其瘤變組織進行取樣并行蘇木精-伊紅染色法染色，以驗證雙轉基因模型小鼠的成瘤能力。 結果 經培育篩選獲得了能夠同時表達 KrasLSL-G12D/-和 Smad4loxp/loxp的雙轉基因小鼠模型；通過構建的病毒載體利用 Cre 重組酶成功感染并誘導小鼠腸上皮細胞突變而形成癌灶。 結論 本研究構建的 KrasLSL-G12D/-+Smad4loxp/loxp雙轉基因模型小鼠的結腸上皮細胞能在 Cre 重組酶作用下誘導癌變，模擬了人類散發性結直腸癌的病理過程。