為了構建pGenesil-1-Beclin1真核表達載體,并建立Beclin1穩定沉默的人成神經瘤SH-SY5Y細胞系,將合成的shRNA片段連接pGenesil-1質粒,構建成重組質粒pGenesil-1-Beclin1,轉化其至感受態大腸桿菌JM109,挑取陽性克隆進行雙酶切和DNA測序鑒定。常規培養SH-SY5Y細胞,將重組質粒pGenesil-1-Beclin1和空白對照質粒pGenesil-1轉染SH-SY5Y細胞,G418抗性篩選,在熒光顯微鏡下挑取單細胞克隆并擴大培養至穩定細胞株,經RT-PCR和Western blot 檢測Beclin1基因的表達。經酶切和DNA測序鑒定重組真核表達載體構建正確,成功篩選出兩株細胞系。和對照組轉染pGenesil-1的細胞系相比,轉染pGenesil-1-Beclin1 細胞系的Beclin1 mRNA表達下降71.28%±1.45%(P＜0.05),Beclin1蛋白表達下降75.50%±2.63%(P＜0.05)。提示已經成功構建pGenesil-1-Beclin1真核表達載體并建立了Beclin1基因穩定沉默的SH-SY5Y細胞系,為研究Beclin1功能提供了細胞模型。
目的系統評價Beclin1蛋白表達與宮頸癌及其不同臨床病理特征的相關性。 方法計算機檢索The Cochrane Library（2014年第1期）、PubMed、EMbase、Ovid、CNKI、VIP、CBM和WanFang Data，查找國內外公開發表關于Beclin1蛋白表達與宮頸癌及其不同臨床病理特征相關性的病例-對照研究，檢索時限均為從建庫至2014年2月。由2位評價員按照納入與排除標準獨立篩選文獻、提取資料和評價納入研究的方法學質量后，采用RevMan 5.2軟件進行Meta分析。 結果最終納入5個病例-對照研究，共計637例患者，包括宮頸癌組388例，宮頸上皮內瘤樣病變（CIN）組130例，正常宮頸組織組119例。Meta分析結果顯示：① Beclin1在宮頸癌組與正常宮頸組［OR=0.07，95%CI（0.02，0.25），P＜0.000 1］、宮頸癌組與CIN組［OR=0.37，95%CI（0.23，0.59），P＜0.000 1］、CIN組與正常宮頸組［OR=0.23，95%CI（0.06，0.88），P=0.003］的表達差異均有統計學意義。② Beclin1在宮頸癌伴淋巴結轉移組與無淋巴結轉移組［OR=0.29，95%CI（0.17，0.49），P＜0.000 01］的表達差異有統計學意義；然而在宮頸癌中低分化組與高分化組［OR=0.50，95%CI（0.16，1.56），P=0.23］、宮頸癌腫瘤直徑≥?4 cm組與直徑＜4 cm組［OR=0.72，95%CI（0.44，1.18），P=0.20］、宮頸癌肌層浸潤深度≥1/2組與浸潤深度＜1/2組［OR=0.76，95%CI（0.49，1.20），P=0.25］、宮頸癌FIGO臨床分期Ⅱ期組與Ⅰ期組［OR=0.70，95%CI（0.44，1.10），P=0.12］的表達差異均無統計學意義。 結論Beclin1蛋白的表達與宮頸癌有顯著相關性。受納入研究數量和質量限制，上述結論尚待開展更多高質量研究加以驗證。
目的分析核因子 NF-κB（NF-κB）p65 和自噬相關蛋白 Beclin1 及 p62 在甲腺乳頭狀癌（PTC）中的表達及其臨床意義。方法收集 2013 年 3 月至 2015 年 2 月期間筆者所在醫院收治的 160 例經病理學檢查證實為 PTC 患者的腫瘤組織標本及其癌旁組織標本，同時收集上述患者中伴有頸部淋巴結轉移組織標本 90 例。采用免疫組化方法檢測 PTC 組織、癌旁組織和轉移淋巴結組織中 NF-κBp65、Beclin1 及 p62 的表達情況，分析上述指標與 PTC 患者臨床病理特征及預后的關系。結果NF-κBp65 和 p62 在 PTC 組織和轉移淋巴結組織中的表達陽性率均高于癌旁組織（P<0.05），而 Beclin1 在 PTC 組織和轉移淋巴結組織中的表達陽性率均低于癌旁組織（P<0.05）。PTC 組織中 NF-κBp65 的表達與患者的臨床病理特征均無關（P>0.05）；p62 的表達隨腫瘤分化程度升高而降低（P<0.05）；Ⅲ+Ⅳ期和有淋巴結轉移患者中的 Beclin1 表達分別低于Ⅰ+Ⅱ期和無淋巴轉移者（P<0.05），而 p62 的表達與之相反。Spearman 相關分析顯示，PTC 組織中，Beclin1 和 p62 的表達呈負相關關系（r=–0.656，P<0.01），在轉移淋巴結組織中，Beclin1 和 p62 的表達也呈負相關關系（r=–0.562，P<0.01）。PTC 組織中 p62 及 NF-κBp65 表達陽性者 3 年生存率均低于表達陰性者（P<0.05），Beclin1 表達陽性者 3 年生存率則高于表達陰性者（P<0.05）。TNM 分期、淋巴結轉移、NF-κBp65 及 p62 為 PTC 預后的獨立危險因素，而 Beclin1 為保護因素。結論NF-κBp65 和 p62 在 PTC 組織及淋巴結轉移組織中呈高表達，而 Beclin1 呈低表達，三者可作為 PTC 患者預后獨立預測因素；Beclin1 及 p62 與 PTC 生物學行為有關，可能成為 PTC 診斷的潛在指標。