目的 比較擬采用大隱靜脈行冠狀動脈血管旁路移植術（coronary artery bypass graft，CABG）的2 型糖尿病患者與非糖尿病患者大隱靜脈血管結構和氧化應激情況，并探討其作用機制，為完善2 型糖尿病患者CABG 圍手術期大隱靜脈橋血管的保護提供理論依據。 方法 36 例行CABG 的冠心病患者，其中合并2 型糖尿病17 例（實驗組），非糖尿病19 例（對照組）。兩組患者年齡、性別、血清肌酐以及高血壓、高血脂、吸煙、病變冠狀動脈數構成差異均無統計學意義（P gt; 0.05），具有可比性。取每例患者大隱靜脈血管橋遠心端2 cm 長血管環，采用光澤精增強化學發光法檢測血管組織中超氧陰離子水平和還原型煙酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸（nicotinamide adenine dinucleotide phosphate，NADPH）氧化酶活性，HE 染色觀察血管形態學變化。 結 果 實驗組與對照組超氧陰離子水平分別為（1 951.71 ± 355.2） counts/ （min·mg）和（1 230.73 ± 340.5） counts/ （min·mg），NADPH 氧化酶活性分別為（308.8 ± 33.7）counts/μg 和（202.7 ± 29.5）counts/μg；實驗組均明顯高于對照組，差異有統計學意義（P lt; 0.05）。HE 染色觀察示，實驗組可見內皮細胞壞死、脫落，內皮細胞層出現斷層，黏膜下層增厚并有空泡，平滑肌細胞扭曲變形；對照組血管內膜基本完整。 結論 2 型糖尿病加重了患者大隱靜脈橋血管組織的受損程度和氧化應激反應。
目的:應用心肌自發熒光(AF)研究心肌線粒體氧化代謝狀態,監測線粒體功能改變的早期信號。方法:煙酰胺腺嘌呤(磷酸)二核苷酸［NAD(P)H］作為熒光探針,用光譜分辨的時間相關單光子計數(TCSPC)記錄375nm紫外激光激發的心肌AF光譜和熒光壽命,測試影響線粒體呼吸時AF動態衰減。結果:在420~560nm光譜區域,至少需用3個熒光壽命池0.4~0.7ns,1.2~1.9ns和8.0~13.0ns描述細胞AF。線粒體呼吸阻斷劑魚藤酮可顯著增加AF強度,縮短平均熒光壽命。氧化磷酸化解偶聯劑二硝基酚可顯著降低AF強度,在520nm處增寬熒光光譜,延長平均熒光壽命。這些結果和NADH熒光動力學離體實驗(in vitro)有可比性。結論:光譜分辨的熒光壽命技術測定心肌NAD(P)H熒光有很好的重復性,在細胞水平上增加了心肌氧化代謝或線粒體功能障礙的知識,為臨床診斷和治療線粒體功能障礙開拓了新視野。
目的 研究自噬特異性抑制劑3-甲基腺嘌呤（3-MA）對5-氟尿嘧啶（5-FU）誘導肝癌細胞系SMMC7721凋亡的影響，并初步探討其機制。方法 利用單丹（磺）酰戊二胺（MDC）染色技術，在熒光顯微鏡下對細胞自噬進行定性觀察；以CCK8法檢測3-MA抑制細胞自噬前后經5-FU誘導SMMC7721細胞的存活，凋亡以AnnexinⅤ/PI流式細胞分析法檢測；以Western blot法分別檢測自噬特異性蛋白LC3及凋亡蛋白caspase-3活化片段和PARP裂解片段的表達。結果 5-FU處理肝癌SMMC7721細胞48h后，可誘導其發生自噬，細胞存活率為（60.73±2.65）%，凋亡率為（40.42±2.34）%；聯合應用3-MA處理48h后，可使肝癌SMMC7721細胞存活率明顯降低（P＜0.01），為（42.31±1.32）%，而細胞凋亡率顯著增加（P＜0.01），為（60.92±2.99）%，同時引起自噬特異性蛋白LC3-Ⅱ及凋亡蛋白caspase-3活化片段和PARP裂解片段表達增加，其灰度值比較差異均有統計學意義（均P＜0.01）。結論 自噬在5-FU誘導肝癌細胞系SMMC7721凋亡過程中起保護性作用，抑制自噬可提高肝癌SMMC7721細胞對5-FU的敏感性，其可能主要通過激活caspase-3及剪切PARP來實現的。因此，自噬特異性抑制劑3-MA可能為提高肝癌對5-FU的敏感性提供新思路。
目的 觀察阻塞性睡眠呼吸暫停（OSA）患者–A930G、C242T 基因多態性與認知功能障礙的相關性，探討由 CYBA 編碼的 p22phox 等位基因在合并有認知功能障礙的 OSA 患者中的作用。 方法 選擇 2014 年 9 月至 2016 年 11 月于呼吸睡眠科就診的男性非吸煙 OSA 患者，其中認知功能障礙 OSA 患者 157 例，無認知功能障礙 OSA 患者 526 例。對患者進行認知功能評估、多導睡眠監測及遺傳分析，ELISA 法測定還原型煙酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶（NOX）活性和尿 8-羥基脫氧鳥苷（8-OH-dG）水平。 結果 –930G 等位基因攜帶者頻率在兩組受試者中差異無統計學意義（P>0.05）。無認知功能障礙的 OSA 受試者 TT/CT 基因型頻率明顯升高（P<0.05）。認知功能障礙的 OSA 受試者 NOX 活性較高（P<0.01），無等位基因 T 突變的受試者具有更高的 NOX 活性（P<0.05）。認知功能障礙的 OSA 受試者尿 8-OH-dG 水平較高（P<0.05），無等位基因 T 變異的受試者尿8-OH-dG 水平更高（P<0.05）。 結論 p22phox C242T 多態性可能參與了 OSA 合并認知功能障礙氧化應激的發生發展。
目的研究煙酰胺單核苷酸腺苷轉移酶 3（nicotinamide mononucleotide adenylyl transferase 3，NMNAT3）調節煙酰胺腺嘌呤二核苷酸（nicotinamide adenine dinucleotide，NAD+）水平對體外模擬氧化應激狀態下兔 BMSCs 線粒體功能及其抗氧化應激能力的影響。方法取新西蘭大白兔股骨及脛骨骨髓，采用密度梯度離心聯合貼壁培養法體外分離培養 BMSCs 并傳代。取第 3 代細胞經流式細胞儀、多向誘導分化鑒定后，采用增強型綠色熒光蛋白（enhanced green fluorescent protein，EGFP）標記的 NMNAT3 基因過表達慢病毒（Lv-NMNAT3-EGFP）進行轉染（BMSCs/Lv-NMNAT3-EGFP），采用實時熒光定量 PCR（real-time fluorescence quantitative PCR，qRT-PCR）及 Western blot 檢測 BMSCs 內 NMNAT3 基因及蛋白表達情況，細胞計數試劑盒 8（cell counting kit 8，CCK-8）方法檢測細胞增殖能力；以陰性對照慢病毒轉染 BMSCs（BMSCs/Lv-EGFP）以及未轉染 BMSCs 作為對照。另采用 H2O2 模擬氧化應激處理兔 BMSCs，根據處理條件分為 4 組：A 組為正常 BMSCs，不加 H2O2 處理；B、C、D 組分別取未轉染的 BMSCs、BMSCs/Lv-EGFP 和 BMSCs/Lv-NMNAT3-EGFP，采用 H2O2 模擬氧化應激處理。處理 24 h 后檢測 NMNAT3 對氧化應激狀態下 BMSCs 線粒體功能的影響 [線粒體膜電位改變、NAD+及三磷酸腺苷（adenosine triphosphate，ATP）水平]、BMSCs 抗氧化應激能力變化 [活性氧（reactive oxygen species，ROS）水平、丙二醛（malondialdehyde，MDA）及錳超氧化物歧化酶（manganese superoxide dismutase，Mn-SOD）含量、過氧化氫酶（catalase，CAT）活性]、對改善 BMSCs 衰老及凋亡的作用 [衰老相關 β-半乳糖苷酶（senescence associated-β-galactosidase，SA-β-gal）染色及 TUNEL 染色]。結果經鑒定，體外成功分離培養兔 BMSCs；經慢病毒轉染技術獲得高表達 NMNAT3 基因的兔 BMSCs 穩定株，細胞內 NMNAT3 基因及蛋白明顯提高（P<0.05），細胞增殖趨勢與正常 BMSCs 無明顯差異。使用 H2O2 處理后，各組線粒體功能均出現損傷、細胞凋亡增加，但 D 組與 B、C 組比較，線粒體功能改善，膜電位明顯升高，線粒體 NAD+水平及 ATP 合成增加；抗氧化應激能力增強，細胞內 ROS、MDA 含量減少以及抗氧化酶 Mn-SOD、CAT 活性均增加；SA-β-gal 染色陽性細胞比例及細胞凋亡率明顯下降。上述指標差異均有統計學意義（P<0.05）。結論NMNAT3 通過增加線粒體內 NAD+水平可有效改善氧化應激狀態下兔 BMSCs 線粒體功能，并增強其抗氧化應激能力，提高 BMSCs 在應激條件下的存活。
目的通過不同劑量氧嗪酸鉀聯合腺嘌呤誘導大鼠高尿酸血癥，探索大鼠高尿酸血癥模型的最佳條件，為高尿酸血癥的治療研究提供可靠的動物模型。方法將體重 220～240 g 成年雄性 Sprague-Dawley 大鼠 56 只，按照每組 8 只分為正常對照組及不同劑量氧嗪酸鉀（1 000、1 500 mg/kg）聯合腺嘌呤（0、50、100 mg/kg）模型組 6 個，連續灌胃 5 周，每周對大鼠進行尾靜脈采血，檢測血清中血尿酸、血肌酐和血尿素氮水平。6 周后取材，觀察大鼠腎臟的病理改變，腎組織炎癥、纖維化相關因子的 mRNA 及蛋白表達水平變化。結果1 500 mg/kg 氧嗪酸鉀聯合 100 mg/kg 腺嘌呤組大鼠造模 2 周后開始死亡，第 6 周生存率為 62.5%；其余各組大鼠生存率與正常對照組比較，差異無統計學意義（P>0.05）。與正常組相比，造模 1 周后，各模型組大鼠血尿酸水平均有顯著升高（P<0.05），第 6 周停止造模后血尿酸基本恢復到造模前水平；各模型組動物血肌酐、血尿素氮水平在第 5 周均較正常組有所升高；與正常組相比，模型組大鼠腎組織的炎癥和纖維化相關因子 mRNA 和蛋白表達水平均隨氧嗪酸鉀聯合腺嘌呤的劑量增加而增加，其中氧嗪酸鉀 1 000 mg/kg 聯合腺嘌呤 100 mg/kg 組及氧嗪酸鉀 1 500 mg/kg 聯合腺嘌呤 50 mg/kg 組與正常組的差異有統計學意義（P<0.05）。大鼠腎臟解剖及組織學檢測結果顯示，模型組隨著氧嗪酸鉀及腺嘌呤劑量的增加，各組均有不同程度的腎髓質白色沉積，腎小管間質纖維化，小管上皮細胞壞死增加，腎小球萎縮。50 mg/kg 腺嘌呤聯合 1 500 mg/kg 氧嗪酸鉀組大鼠腎組織炎癥與纖維化相關基因和蛋白的表達水平相比正常組有所升高，且可見組織炎性細胞浸潤和纖維化的發生，符合高尿酸血癥所致腎損傷的臨床表現。結論氧嗪酸鉀（1 500 mg/kg）聯合腺嘌呤（50 mg/kg）連續灌胃 5 周能夠建立穩定的大鼠高尿酸腎損傷模型。