糖尿病視網膜病變(DR)神經損傷病理機制的研究顯示高血糖、谷氨酸興奮毒性損傷、氧化應激、神經營養因子缺乏等在損傷中發揮重要作用。多種藥物被用來研究DR的神經保護, 主要包括調控血糖、抑制谷氨酸興奮性毒性損傷、減少氧化應激、補充神經營養因子等機制中的一種或幾種發揮作用。間充質干細胞多向分化潛能、分泌細胞因子功能可為受損視網膜提供保護, 可成為將來研究的熱點。
目的觀察玻璃體腔注射人臍帶間充質干細胞(hUCMSC)體外誘導的神經干細胞(NSC)對糖尿病大鼠視網膜功能及結構的影響。 方法健康雄性Sprague-Dawley大鼠40只,隨機分為正常對照組(A組)、糖尿病組,分別為9、31只。糖尿病組大鼠經腹腔注射鏈脲佐菌素誘導糖尿病模型。成模10周時,將建模成功的27只大鼠隨機分為糖尿病對照組(B組)、玻璃體腔注射磷酸鹽緩沖液組(C組)、玻璃體腔注射NSC組(D組),各組均為9只大鼠。A、B組不進行干預。干預后2、4、6周A～D組大鼠均行閃光視網膜電圖檢查,暗適應條件下記錄暗適應視桿細胞反應(Rod-R)b波潛伏期和振幅以及最大混合反應(Max-R)a、b波潛伏期和振幅、振蕩電位(OPs)總振幅。蘇木精-伊紅染色觀察各組大鼠視網膜形態結構變化。 結果干預后2、4周,A～D組大鼠暗適應Rod-R b波振幅、Max-R a、b波潛伏期及振幅、OPs總振幅比較,差異均有統計學意義(P<0.05);D組暗適應Rod-R b波振幅、Max-R b波振幅、OPs總振幅較B、C組提高,差異均有統計學意義(P<0.05);Max-R b波潛伏期較B、C組下降,差異有統計學意義(P<0.05)。干預后6周,D組暗適應Rod-R b波振幅、Max-R a、b波振幅、OPs總振幅較B、C組提高,差異有統計學意義(P<0.05);D組Rod-R、Max-R b波潛伏期較C組下降,差異有統計學意義(P<0.05)。建模后10周,與A組比較,糖尿病組大鼠視網膜各層細胞排列紊亂。干預后2周,與A組比較,B、C組視網膜各層細胞排列紊亂,內界膜連續性破壞,局部增厚;4周,D組視網膜各層細胞排列紊亂,視網膜神經節細胞數量較B、C組增多,血管擴張不明顯。 結論玻璃體腔注射hUCMSC體外誘導的NSC對糖尿病大鼠視網膜功能及結構均有改善作用。
目的觀察玻璃體腔注射人臍帶間充質干細胞（hUCMSC）誘導分化的神經干細胞（NSC）對糖尿病大鼠視網膜腦源性神經營養因子（BDNF）表達及視網膜神經節細胞計數（RGC）的影響。 方法成年雄性Sprague-Dawley大鼠52只，隨機數字表法將其分為正常對照組（A組）、假干預組（B組）、玻璃體腔注射hUCMSC組（C組）、玻璃體腔注射NSC組（D組），每組13只大鼠。B、C、D組大鼠腹腔注射鏈尿佐菌素建立糖尿病模型；并于建模后1個月，分別對其左眼行玻璃體腔注射無菌磷酸鹽緩沖液、hUCMSC、NSC各2 μl。干預后2、4、6、8周，免疫組織化學染色觀察視網膜BDNF和胸腺肽-1（Thy-1）陽性染色情況，圖像分析軟件分析視網膜染色區BDNF平均累積吸光度（IA）值，并計數Thy-1陽性染色RGC。對比分析視網膜陽性染色區BDNF平均IA值與Thy-1陽性RGC計數的關系。 結果免疫組織化學染色觀察發現，A組大鼠視網膜BDNF和Thy-1呈陽性染色；B組大鼠視網膜BDNF和Thy-1陽性染色隨干預后時間延長而逐漸減少；C、D組大鼠視網膜BDNF和Thy-1陽性染色隨干預后時間延長而逐漸增加，D組表現更為明顯。除干預后2周，B、C組大鼠視網膜染色區BDNF平均IA值、Thy-1陽性RGC計數間差異無統計學意義外（P>0.05）；其余各時間點各組大鼠視網膜染色區BDNF平均IA值、Thy-1陽性RGC計數比較，差異均有統計學意義（P<0.05）。相關性分析結果顯示，糖尿病大鼠視網膜染色區BDNF平均IA值與Thy-1陽性RGC計數呈明顯正相關（r=0.964，P=0.000）。 結論玻璃體腔注射hUCMSC誘導分化的NSC能促進糖尿病大鼠視網膜BDNF表達，提高RGC計數。
目的 構建攜帶色素上皮衍生因子（PEDF）基因的慢病毒（LV）載體并轉染人臍帶間充質干細胞（hUCMSCs），初步探討基因修飾PEDF-間充質干細胞的可行性。 方法 采用基因重組方法構建LV-PEDF載體，測定其LV滴度，以感染復數（MOI）值為10、30、50 的LV體外轉染hUCMSCs，并據此分為相應MOI值實驗組；以不含PEDF基因的相同MOI值的重組LV載體[LV-綠色熒光蛋白（GFP）]轉染hUCMSCs，并據此分為 相應MOI值對照組。熒光顯微鏡觀察兩組細胞轉染效率并計算轉染率。采用細胞免疫熒光法、免疫細胞化學法、實時定量聚合酶鏈反應（RT-PCR）檢測50MOI實驗組、50MOI對照組細胞中PEDF、血管內皮生長因子（VEGF） 表達水平。 結果 經酶切以及基因測序鑒定證明LV載體構建成功。轉染96 h后，50MOI實驗組細胞可見大量GFP表達，轉染效率為72.1%。熒光顯微鏡觀察發現，轉染后96 h，50MOI實驗組細胞胞漿PEDF、VEGF表達增強。光學顯微鏡觀察發現，轉染后96 h，50MOI實驗組細胞胞漿PEDF表達較低，而VEGF表達較強。RT-PCR檢測結果發現，50MOI實驗組、50MOI對照組細胞中PEDF mRNA相對表達量分別為0.170±0.028、0.015±0.007；VEGF mRNA相對表達量分別為0.265±0.022、0.285±0.049。兩組細胞中PEDF mRNA相對表達量比較，差異有統計學意義（F=70.29，P＜0.001）；VEGF mRNA相對表達量比較，差異無統計學意義（F=9.57，P＞0.05）。 結論 成功構建攜帶PEDF基因LV表達載體，并在hUCMSCs中過表達PEDF基因。