目的 探討氨等離子體錨定甘氨酸-精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸-絲氨酸（Gly-Arg-Gly-Asp-Ser，GRGDS）短肽的消旋聚乳酸（poly-D，L-lactide acid，PDLLA）骨支架修復大鼠股骨干缺損的成骨效能。 方法 采用氨等離子體錨定短肽技術，在PDLLA表面以酰胺鍵錨定GRGDS活性短肽，制備錨定短肽PDLLA（peptides anchored aminated-PDLLA，PA/PDLLA）骨支架。取4只4周齡SD大鼠雙側股骨及脛骨骨髓，采用全骨髓貼壁法分離、培養BMSCs，取第3～6代成骨誘導的BMSCs分別接種至PA/PDLLA支架及PDLLA支架。45只成年雄性SD大鼠，體重350～500 g，制備右側股骨干8 mm長骨缺損模型，隨機分為3組（n=15）。骨缺損分別采用BMSCs-PA/PDLLA支架復合物（PA/PDLLA組）、BMSCs-PDLLA支架復合物（PDLLA組）填充修復，空白對照組不作處理。術后觀察大鼠一般情況，4、8、12周分別對骨缺損部位進行大體觀察、X線片檢查、組織學觀察、Micro-CT掃描及實時熒光定量PCR檢測。 結果 術后2只實驗動物死亡，予以補充；其余均存活至實驗完成。術后各時間點大體及X線片觀察示PA/PDLLA組骨缺損部位骨修復重建較PDLLA組快，空白對照組未見骨修復。X線片評分示各時間點PA/PDLLA組評分最高，PDLLA組次之，空白對照組最低；除術后4周空白對照組與PDLLA組比較差異無統計學意義（P gt; 0.05）外，其余各時間點組間比較，差異均有統計學意義（P lt; 0.05）；且隨術后時間延長，PDLLA組及PA/PDLLA組X線片評分均呈增加趨勢（P lt; 0.05）。組織學觀察及Micro-CT檢查示，PA/PDLLA組成骨質量最好，PDLLA組次之，空白對照組最差；骨密度、骨體積與選取感興趣區域體積比值、骨小梁數量、結構模型指數組間比較差異均有統計學意義（P lt; 0.05）。實時熒光定量PCR檢測示PA/PDLLA組成骨相關基因骨鈣素、Ⅰ型膠原、ALP、BMP-2、骨橋蛋白的表達均顯著高于其余兩組（P lt; 0.05）。 結論 氨等離子體錨定GRGDS短肽活性修飾的PDLLA骨支架，能夠加速SD大鼠股骨干缺損模型的骨修復重建過程。
目的 運用氨等離子體輔助接枝技術，在消旋聚乳酸（poly-D，L-lactide acid，PDLLA）表面以酰胺鍵接枝甘氨酸- 精氨酸- 甘氨酸- 天冬氨酸- 絲氨酸（Gly-Arg-Gly-Asp-Ser，GRGDS）短肽，探討制備活性骨替代材料的可行性。 方法 使用溶劑澆鑄/ 顆粒瀝析法制備圓片狀直徑8 mm、厚1 mm 的PDLLA 三維骨支架，行氨等離子體改性處理制備表面氨基化PDLLA（aminated PDLLA，A/PDLLA），測量未改性（0 min 對照組）及改性5、10、20 min 組支架的孔徑、孔隙率和表面水接觸角。以上各組A/PDLLA 放入1 mg/mL FITC 標記的GRGDS 肽溶液[1-（3- 二甲基氨基丙基）-3-乙基碳化二亞胺鹽酸鹽、N- 羥基琥珀酰亞胺、活性肽的摩爾比值為1.5 ∶ 1.5 ∶ 1.0]，室溫下低速震蕩24 h 行表面接枝處理，得到接枝肽處理材料（peptides conjugated A/PDLLA，PA/PDLLA）。對未改性（0 min 對照組）、改性5、10、20 min 及其后接枝肽處理的材料行X 射線光電子能譜（X-ray photoelectron spectroscopy，XPS）儀檢測；對PDLLA 和改性0、5、10、20 min 后接枝肽處理的材料行激光共聚焦顯微鏡觀察及高效液相色譜（high performance liquid chromatography，HPLC）定量分析。全骨髓貼壁法分離、培養SD 大鼠BMSCs，取第3 ～ 6 代細胞接種于以下3 組材料：20 min 氨等離子體改性組（A/PDLLA 組）、20 min 氨等離子體改性后接枝肽組（PA/PDLLA 組）及未經處理的PDLLA 對照組（PDLLA 組）。各組BMSCs- 材料復合物培養16 h 后測定細胞上架數及上架率；培養4、8 d 行掃描電鏡觀察。 結果 PDLLA 孔徑和孔隙率不隨氨等離子體改性時間變化而變化（P gt; 0.05）。隨著氨等離子體改性時間延長，A/PDLLA 支架表面水接觸角逐漸減小，材料親水性能逐步改善，各組間比較差異均有統計學意義（P lt; 0.001）。XPS 檢測示，A/PDLLA 支架表面出現N 元素，且隨改性時間延長，N1s 峰漸趨明顯，N/C 逐漸加大；PA/PDLLA 支架N/C 相應加大，表面出現S2p 峰。激光共聚焦顯微鏡觀察示PA/PDLLA 支架熒光強度隨改性時間延長而明顯增強。HPLC 成功測得經10 min 和20 min 氨等離子體改性后接枝肽處理的PA/PDLLA 接枝肽量，兩者比較差異有統計學意義（P lt; 0.001）；而PDLLA 及經0、5 min 氨等離子體改性后接枝肽處理的PA/PDLLA 接枝肽量未檢出。與BMSCs 復合培養16 h，A/PDLLA 組和PA/PDLLA 組細胞上架數和上架率均高于PDLLA 組，3 組間兩兩比較差異均有統計學意義（P lt; 0.01）。掃描電鏡觀察示，A/PDLLA 組和PA/PDLLA組比PDLLA 組更能促進BMSCs 貼附增殖，尤以PA/PDLLA 組最明顯。 結論 氨等離子體改性能明顯促進PDLLA 表面以酰胺鍵接枝FITC-GRGDS 短肽；此仿生人工骨材料生物活性穩定，能明顯促進BMSCs 貼附和增 殖。
目的 研究骨髓間充質干細胞(marrow mesenchymal stem cells，MSCs) 復合消旋聚乳酸(poly-L-lactic acid, PLLA)/明膠修復兔膝關節全層軟骨缺損的效果。方法 4～6月齡青紫蘭兔36只，體重2.5～3.5 kg，雌雄不拘。體外分離培養MSCs，取第2代MSCs種植于PLLA/明膠支架體外復合培養。將36只青紫蘭兔制備雙側膝關節全層軟骨缺損模型，根據修復方法不同隨機分為A、B、C 3組（n=12）。A組，將MSCs與PLLA/明膠支架材料復合物植入兔雙膝缺損處；B組，將單純PLLA/明膠支架材料植入兔雙膝缺損處；C組，缺損處不作任何處理，作為對照。A、B組在植入時均加入25 μg/L轉化生長因子β1(transforming growth factor β1, TGF-β1) 0.4 ml。分別于術后4、8和12 周，取材行大體、組織學及免疫組織化學染色觀察，并將12周大體及組織學標本按照O’driscoll等評分標準進行評分。結果 大體觀察：術后12周，A組修復組織與正常軟骨結合處完整，表面光滑，界限模糊；B、C組缺損處修復組織呈纖維組織或無修復，表面不平整或呈蟲蝕樣改變。組織學觀察：A組術后4周，細胞數較多，呈梭形、圓形或橢圓形；8周修復組織與周圍軟骨大部分結合，細胞呈圓形，以透明軟骨樣細胞為主，有軟骨陷窩，表層有梭形纖維樣細胞；12周修復組織細胞為透明軟骨樣細胞, 柱狀排列，與周圍軟骨及軟骨下骨整合良好；B組, 術后4～8周細胞數較少，細胞層次排列差；12 周修復組織菲薄，呈纖維軟骨樣，基質染色接近正常；C 組，術后4～8周缺損組織由薄層纖維組織覆蓋；12 周缺損區纖維組織進一步增厚，與周圍軟骨未結合。免疫組織化學染色顯示， A組修復組織Ⅱ型膠原染色呈陽性，B組呈弱陽性，C 組無表達。術后12 周大體觀察總評分，A、B及C組分別為2.75±0.89、4.88±1.25和7.38±1.18，A組優于B、C組, B組優于C組，且差異均有統計學意義 (P＜0.05)；組織學觀察總評分，A、B及C組分別為3.88±1.36、8.38±1.06和1313±1.96，A組與B、C組以及B組與C組差異均有統計學意義 (P＜0.05)。結論 應用軟骨組織工程原理，以PLLA/明膠為支架材料復合自體MSCs移植是一種修復軟骨缺損行之有效的方法。
目的 建立外消旋聚乳酸復合神經生長因子（poly-D，L-lactic acid/nerve growth factor，PDLLA/NGF）可吸收性緩釋導管橋接修復大鼠坐骨神經缺損的動物模型，觀察復合導管對大鼠坐骨神經缺損再生的促進作用。方法 利用溶劑揮發法制備PDLLA單純導管和PDLLA/NGF緩釋導管，每根緩釋導管含NGF 450 U。SD大鼠40只隨機分成4組，每組10只，切除中段坐骨神經10 mm之后分別行自體神經移植（A組）、單純導管橋接（B組）、單純導管加一次性給藥（C組）、PDLLA/NGF緩釋導管橋接（D組）修復坐骨神經，除A組外，均保留10 mm缺損。術后3個月觀察神經再生情況，比較各組光鏡、電鏡及圖像分析等指標。結果 術后3個月導管與周圍組織粘連松，并開始降解，但外形仍保持完整。再生神經均順利通過導管腔，組織學觀察A組和D組內神經纖維數目多，大小均勻，成熟良好；B組和C組纖維結締組織多，神經纖維細小，髓鞘薄。圖像分析顯示除神經纖維計數D組高于A組外，A組和D組在纖維直徑、軸突直徑和髓鞘厚度方面差異均無統計學意義（P＞0.05），并明顯優于B組和C組（P＜0.05)。結論 PDLLA/NGF緩釋導管能夠有效促進大鼠坐骨神經缺損再生，組織學觀察指標接近自體神經移植。
目的 對甲狀腺激素人工神經外消旋聚乳酸-三碘甲狀腺素原氨酸［Poly(dextrogyr-levogyr)lactide acide-triiodothyronine, PDLLA-T3］橋接大鼠坐骨神經缺損的效果進行組織學評價。方法 將90只SD大鼠左側坐骨神經切斷造成1 cm缺損，隨機分為3組，每組30只。A組：自體神經移植組；B組：PDLLA-T3組；C組：不含甲狀腺激素人工神經外消旋聚乳酸（PDLLA）組；橋接坐骨神經缺損。D組：正常對照組（大鼠右側正常坐骨神經）。于術后2周，1、2個月收集標本，行透射電鏡、HE染色、Bielschowsky神經纖維銀染及S-100免疫組織化學染色，觀察再生神經的數量和質量，經圖像處理后進行統計分析。結果 術后2周：組織學觀察顯示B、C組材料尚未完全降解，透射電鏡下神經的髓鞘厚度較薄，約0.5 μm，A、B、C組間差異無統計學意義（Pgt;0.05）； 1個月：組織學觀察見A組再生神經纖維等組織通過遠端吻合口，其間有新生的血管，B、C組材料未完全降解， S-100免疫組織化學及Bielschowsky神經纖維銀染顯示B組PDLLA-T3成功橋接神經缺損，缺損段有再生神經通過，再生神經髓鞘厚度1.81±0.19 μm，優于A、C組，但差異無統計學意義（Pgt;0.05）；2個月：B、C組材料完全降解，B組S-100免疫組織化學染色示神經纖維數110.00±8.75，Bielschowsky神經纖維銀染顯示再生有髓神經纖維數77.00±6.33，兩者均優于C組（Plt;0.05），且與A、D組比較差異有統計學意義(P＜0.05)；髓鞘厚度為2.15±0.27 μm， 優于C組（Plt;0.05），但小于A、D組（Plt;0.05）。結論 PDLLA-T3橋接大鼠坐骨神經缺損，再生神經纖維數量和質量較好，是一種有前途的組織工程人工神經。