隨著分子生物學技術的進步和基因遺傳學的發展，病毒載體系統不斷地得到改良及優化，并以其特有的優勢逐漸成為眼科基因治療的良好載體之一。目前，多種病毒載體已應用于眼科疾病的基因治療研究并取得較好成果。腺病毒載體具有瞬時表達的特點，在減輕角膜移植免疫反應等領域發揮重要作用；慢病毒載體具有穩定高效的特點，在體內可長期緩慢表達，為青光眼治療提供了新的給藥方案；腺相關病毒載體具有免疫原性低，精準持久等特點，可感染多種視網膜細胞，其與成簇規律間隔的短回文重復序列及其相關蛋白9聯合使用，為眼科遺傳疾病的精準治療提供了新的思路。病毒載體的出現大大提高了基因治療的應用潛力，具有傳統療法不可比擬的優勢。相信隨著技術的進步，以病毒為載體的基因轉導技術將會很快進入臨床應用，解決更多的眼科疑難問題。
目的觀察氧誘導視網膜病變（OIR）小鼠視網膜組織中miRNA的表達，篩選與視網膜新生血管（RNV）有關的miRNA。方法80只健康7日齡C57BL/6J小鼠隨機分為對照組和OIR組，每組40只。OIR組小鼠構建OIR模型，對照組小鼠不做任何處理。小鼠17日齡時，做視網膜熒光鋪片，熒光顯微鏡下觀察小鼠RNV發生情況；做視網膜病理切片HE染色，光學顯微鏡下計數突破視網膜內界膜的血管內皮細胞核。取視網膜組織行miRNA芯片分析，檢測對照組與OIR組之間差異表達的miRNA，并行PCR驗證。所得差異miRNA靶基因和表達譜分別進行基于基因注釋（GO）和京都基因與基因組百科全書（KEGG）的富集分析。組間兩兩比較采用獨立樣本t檢驗。結果熒光顯微鏡及光學顯微鏡觀察發現，對照組小鼠視網膜未見無灌注區、新生血管及突破視網膜內界膜的血管內皮細胞核；OIR組小鼠視網膜可見大量無灌注區、新生血管及突破視網膜內界膜的血管內皮細胞核。兩組小鼠突破視網膜內界膜的血管內皮細胞核數量比較，差異有統計學意義（t=9.025，P＜0.05）。miRNA芯片分析結果顯示，與對照組比較，OIR組有54個miRNA發生了具有統計學差異的表達。其中，上調者47個，下調者7個。miRNA差異表達倍數大于1.25倍者23個，小于0.75倍者5個。PCR驗證結果顯示，差異表達倍數最高的5個miRNA表達趨勢與芯片分析結果一致，差異均有統計學意義（P＜0.05）。GO分析共得到1112個差異有統計學意義的條目（P＜0.05）；KEGG分析共得到65個差異有統計學意義的條目（P＜0.05）。結論OIR小鼠視網膜組織中miRNA較正常小鼠視網膜組織有54個表達差異顯著的miRNA；表達差異的miRNA可能不同程度參與了RNV的發生發展。
目的觀察慢病毒介導聚嘧啶束結合蛋白相關剪接因子（PSF）對氧誘導視網膜病變（OIR）小鼠視網膜新生血管的抑制作用。方法5日齡C57BL/6J小鼠112只隨機分為正常對照組、單純OIR模型組、OIR模型+慢病毒空載體處理組（以下簡稱Vec組）及OIR模型+ PSF慢病毒處理組（以下簡稱PSF組），分別為16、32、32、32只。小鼠7日齡時，正常對照組小鼠常規環境飼養；單純OIR模型組、Vec組及PSF組小鼠建立OIR模型。小鼠12日齡時，Vec組、PSF組小鼠玻璃體腔分別注射滴度為1×1011 TU/ml的空載體病毒或PSF慢病毒1 μl。正常對照組和單純OIR模型組小鼠不再做任何處理。小鼠17日齡時，采用HE染色計數突破視網膜內界膜的血管內皮細胞核；作視網膜鋪片，測量各組小鼠視網膜無灌注區相對面積；采用實時定量PCR檢測各組小鼠視網膜中NF-E2相關因子2（Nrf2）和血紅素氧合酶1（HO-1）的mRNA相對表達量；采用Western blot檢測各組小鼠視網膜中Nrf2、HO-1及PSF的蛋白相對表達量。組間比較采用單因素方差分析。結果正常對照組、單純OIR模型組、Vec組、PSF組小鼠突破內界膜的血管內皮細胞核數分別為0.00、14.36±5.50、15.67±4.96、8.13±2.09個；視網膜無灌注區面積分別為0.00%、（35.71±2.81）%、（36.57±4.53）%、（15.33±4.75）%。4組間小鼠突破內界膜的血管內皮細胞核數及視網膜無灌注區面積比較，差異均有統計學意義（F=24.87、165.70，P＜0.05）。組間兩兩比較，單純OIR模型組、Vec組較正常對照組突破內界膜的血管內皮細胞核數增多，視網膜無灌注區面積增大；PSF組較單純OIR模型組、Vec組突破內界膜的血管內皮細胞核數減少，視網膜無灌注區面積減小，差異均有統計學意義（P＜0.05）。實時定量PCR及Western blot檢測結果顯示，4組間小鼠視網膜Nrf2、PSF mRNA相對表達量（F=53.66、83.54）以及Nrf2、HO-1、PSF蛋白相對表達量（F=58.38、52.69、24.79）比較，差異均有統計學意義（P＜0.05）。組間兩兩比較，單純OIR模型組、Vec組小鼠視網膜Nrf2、PSF mRNA相對表達量及Nrf2、HO-1、PSF蛋白相對表達量較正常對照組明顯降低，PSF組小鼠視網膜Nrf2、PSF mRNA相對表達量及Nrf2、HO-1、PSF蛋白相對表達量較單純OIR模型組、Vec組明顯增加，差異均有統計學意義（P＜0.05）。結論慢病毒介導的PSF可通過上調Nrf2及HO-1的表達抑制OIR小鼠視網膜新生血管形成。
目的觀察多聚嘧啶序列結合蛋白相關剪接因子（PSF）對缺氧誘導的人視網膜微血管內皮細胞（hRMECs）功能的影響。方法采用三質粒系統構建慢病毒顆粒（LV）-PSF。LV-PSF體外感染hRMECs后通過流式細胞計數法測定其感染效率。應用實時定量PCR（RT-PCR）檢測經LV-PSF感染的hRMECs中PSF mRNA表達水平。將實驗分為體內和體外兩部分。體內實驗：7日齡健康C57B/L6小鼠20只，采用隨機數字表法分為正常組、氧誘導視網膜病變（OIR）組、OIR+LV-空載體（Vec）組和OIR+LV-PSF組，每組5只。除正常組外，其余3組構建OIR模型。OIR組除缺氧刺激外，不做其余處理。OIR+LV-Vec組和OIR+LV-PSF組小鼠分別玻璃體腔注射LV-Vec或LV-PSF。觀察LV-PSF對視網膜新生血管（RNV）形成的影響。體外實驗：將hRMECs分為正常組、缺氧組、空載組、PSF高表達組。正常組為正常體外培養的hRMECs；缺氧組為缺氧刺激3 h恢復正常培養條件24 h的hRMECs；空載組、PSF高表達組分別為用LV-Vec、LV-PSF感染48 h，再用缺氧刺激3 h恢復正常培養條件24 h的hRMECs。采用MTT比色法觀察PSF對細胞增生能力的影響。采用細胞劃痕實驗和Transwell遷移實驗觀察PSF對缺氧刺激下細胞遷移能力的影響。采用RT-PCR觀察各組細胞中HIF-1α、VEGF及PSF的mRNA表達。結果成功構建可穩定高表達PSF的LV-PSF，流式細胞儀測定其感染效率為97%，RT-PCR測得經LV-PSF感染的hRMECs中PSF mRNA水平明顯上調。體內實驗：OIR組、OIR+LV-Vec組小鼠RNV面積較正常組明顯增加（t=18.31、43.71），OIR+LV-PSF組小鼠RNV面積較OIR組（t=11.30）、OIR+LV-Vec組（t=15.47）明顯減小，差異均有統計學意義（P＜0.05）。體外實驗：MTT比色法檢測結果顯示，缺氧組hRMECs增生能力較正常組明顯增強（t=2.57），PSF高表達組hRMECs增生能力較正常組、缺氧組、空載組明顯降低（t=5.26、5.46、3.73），差異均有統計學意義（P＜0.05）。細胞劃痕實驗結果顯示，缺氧刺激3 h恢復正常條件24 h或48 h均可刺激缺氧組與空載組細胞明顯遷移（t=8.35、13.84，P＜0.05）；而與缺氧組與空載組比較，PSF高表達組細胞遷移不明顯（t=10.99、18.27、9.75、8.93、26.94、7.01，P＜0.05）。Transwell小室實驗結果顯示，正常組和空載組微孔膜上染色的細胞數較多，而PSF高表達組微孔膜上染色的細胞數明顯減少（t=9.33、6.15，P＜0.05）。RT-PCR檢測結果顯示，與正常組比較，缺氧組、空載組hRMECs中HIF-1α、VEGF的mRNA表達明顯增加（t=15.23、21.09，P＜0.05），PSF mRNA表達無明顯變化（t=0.12、2.15， P＜0.05）；與缺氧組、空載組比較，PSF高表達組hRMECs中HIF-1α、VEGF的mRNA表達明顯下降（t=10.18、13.10，P＜0.05），PSF mRNA表達明顯增加（t=65.00、85.79，P＜0.05）。結論PSF可減少OIR模型小鼠RNV面積。PSF可能通過HIF-1α/VEGF信號通路抑制缺氧誘導的hRMECs增生和遷移。