目的 研究致死型盲腸結扎穿孔術( CLP) 后早期, 外源性泛素對小鼠肺部損傷和血清一氧化氮( NO) 水平的影響。方法 77 只小鼠隨機分為三組, 分別為CLP 組28 只、假手術組( SHAM 組) 28 只和CLP + 泛素組( UB組) 21 只。術后6 h, CLP組和SHAM 組分別隨機處死7 只小鼠進行標本采集; UB組全部小鼠則按10 mg/ kg 尾靜脈注射泛素。術后7、8 及9 h, 三組分別于每個時間點隨機選擇7 只小鼠處死并采集標本。測定肺含水量和血清NO 代謝產物NO2 /NO3 水平, 并觀察比較各組肺組織病理改變。結果 UB 組術后7、8 和9 h的肺含水量均低于CLP 組, 其中9 h的肺含水量差異存在統計學意義, 病理表現為術后7 h的肺間質充血、炎性滲出明顯減少; 但術后8 和9 h,UB組和 CLP 組肺病理損傷程度相似。CLP 組血清NO2 /NO3 水平術后6 和8 h 顯著高于SHAM 組( P lt; 0. 05) , UB 組在7 h顯著高于SHAM組( P lt;0. 05) ; CLP 組與UB 組血清NO2 /NO3 水平在術后各時間點差異均無統計學意義。結論 CLP 術后早期, 單次靜脈給予泛素可顯著減輕小鼠肺毛細血管通透性的增高, 并可一過性地減輕肺損傷, 但對CLP 術造成的血清NO2 /NO3 水平變化無明顯影響。
目的 研究COPD 大鼠骨骼肌蛋白酶體C2 亞基的表達, 以及TNF-α對其表達的影響, 探討COPD 大鼠骨骼肌蛋白高分解代謝的機制。方法 SD 大鼠隨機分為對照組、COPD 組及COPD + TNF-α組, 每組15 只。COPD 組和COPD + TNF-α組大鼠用單純熏香煙法制成COPD 大鼠動物模型, 分離其伸趾長肌, 分別給予不含和含TNF-α( 10 μg/L) 的孵育液進行離體有氧孵育。利用實時定量 PCR 和Western blot 技術檢測C2 亞基在轉錄和蛋白水平的變化。結果 COPD 組和COPD + TNF-α 組C2 亞基mRNA 表達為對照組的1. 74 倍和1. 95 倍( P 均lt; 0. 01) , 其中COPD + TNF-α組顯著高于 COPD 組( P lt;0. 01) 。COPD 組和COPD + TNF-α組C2 亞基蛋白表達也顯著高于對照組( 1. 04 ±0. 15 和1. 23 ±0. 16 比0. 71 ±0. 12, P lt;0. 05 和P lt; 0. 01) , COPD組和COPD + TNF-α組表達無顯著差異 ( P gt;0. 05) 。結論 COPD 時骨骼肌蛋白降解增加可能是經由TNF-α激活泛素-蛋白酶體途徑所致。
目的 研究COPD 大鼠膈肌組織內蛋白降解途徑之一的泛素-蛋白酶體系統組成成分的變化及意義。方法 采用單純熏香煙法復制COPD 大鼠動物模型。蛋白免疫印記( Western blot)方法測定大鼠膈肌內E2-14k、蛋白酶體C8 亞基的蛋白表達; 逆轉錄-聚合酶鏈式反應( RT-PCR) 技術檢測膈肌內泛素和蛋白酶體C2 亞基的mRNA 表達。結果 Western blot 分析結果顯示, COPD 大鼠膈肌組織中E2-14k 的蛋白表達較正常對照組顯著增強( 0. 81 ±0. 28 比0. 50 ±0. 25, P lt;0. 05) , 蛋白酶體C8 亞基的蛋白表達變化不明顯( P gt;0. 05) ; RT-PCR 分析結果顯示, 膈肌組織中泛素的mRNA 表達( IOD值) 較對照組顯著增加( 0. 89 ±0. 20 比0. 50 ±0. 15, P lt;0. 05) , 蛋白酶體C2 亞基的mRNA 表達與正常對照組比較無明顯差異( P gt;0. 05) 。結論 COPD 大鼠膈肌組織內泛素-蛋白酶體降解途徑被激活, 可能是引起蛋白降解的重要因素之一。
目的 探討大鼠低氧性肺動脈高壓( HPH) 形成過程中小泛素蛋白樣修飾蛋白1( SUMO-1) 在肺內表達的動態變化規律及在HPH 發病機制中的作用。方法 40 只Wistar 大鼠隨機分為常氧對照組、低氧3 d 組、低氧7 d組、低氧14 d 組及低氧21 d 組, 每組8 只。常壓間斷低氧暴露復制HPH大鼠模型。檢測各組大鼠的平均肺動脈壓( mPAP) 、右心室肥大指數( RVHI) 、血管形態學指標[ 管壁面積/ 管總面積( WA%) ] ; 原位雜交、RT-PCR 檢測肺內SUMO-1 mRNA 表達, 免疫組化、Western blot 檢測其蛋白表達水平。結果 低氧7 d至21 d, 大鼠肺小動脈開始出現明顯血管重塑并逐漸加重, 低氧7 d 時WA% 和mPAP 顯著高于對照組; 低氧14 d 時WA% 、mPAP 較7 d 時進一步增加, RVHI顯著高于對照組; 低氧21 d 時WA% 、RVHI 較14 d 時進一步增加。SUMO-1 mRNA 和蛋白在對照組肺小動脈壁呈弱陽性表達; 低氧3 d 后顯著增高; 低氧14 d 達高峰; 低氧21 d 后mRNA 表達減弱但仍然高于對照組, 蛋白表達繼續保持高水平。SUMO-1 mRNA 和蛋白表達與mPAP、WA% 、RVHI 均呈正相關( P 均lt;0. 01) 。結論 慢性低氧誘導肺內SUMO-1 表達增加在HPH 的發病過程中發揮一定的作用。
一直以來β2 受體激動劑在支氣管哮喘的防治領域起著非常突出的作用, 但是由于長期重復使用后可致β2 腎上腺素能受體( β2 -adrenergic receptor, β2 AR) 減敏, 導致臨床使用受到很大的限制。雖然現在已經開發出了長效的β2 受體激動劑, 但是也可因同樣的原因需同時使用糖皮質激素以避免其可能的減敏 , 因此探討β2 AR 減敏的機制就顯得尤為必要。泛素系統包括泛素、多種酶、26S 蛋白酶體等, 細胞內許多蛋白都通過泛素化參與生命活動。有研究顯示β2 AR 的泛素化與其內化和降解有關。本文就β2 AR 減敏的可能機制作一綜述。
目的 研究慢性阻塞性肺疾病（COPD）大鼠膈肌萎縮信號通路——泛素-蛋白酶體通路中E2-14K、MAFbx和MuRF-1蛋白表達及核轉錄因子κB（NF-κB）p50表達情況，以及前炎癥因子白細胞介素17（IL-17）在大鼠血清及膈肌中的表達，探討膈肌萎縮的可能調控機制。方法 采用氣管內滴入脂多糖+反復熏香煙法復制COPD大鼠動物模型。Western blot法測定大鼠膈肌內E2-14K、MAFbx、MuRF-1及NF-κB p50表達，ELISA法測定大鼠血清及膈肌中IL-17的表達。結果 Western blot結果顯示COPD大鼠膈肌中E2-14K、MAFbx、MuRF-1及NF-κB p50蛋白的表達均較對照組明顯升高（0.96±0.12比0.53±0.09，0.99±0.10比0.53±0.08，0.95±0.08比0.51±0.16，1.11±0.10比0.64±0.50，P均lt;0.01）。ELISA結果顯示IL-17在血清及膈肌中的表達均升高（Plt;均0.01）。NF-κB p50與E2-14K、MAFbx、MuRF-1水平呈顯著正相關（r值分別為0.82、0.92、0.86，P均lt;0.01）；血清IL-17與中性粒細胞百分比、NF-κB p50、E2-14K、MAFbx、MuRF-1呈顯著正相關（r值分別為0.94、0.90、0.85、0.84及0.79，P均lt;0.01）；膈肌IL-17與中性粒細胞百分比、NF-κB p50、E2-14K、MAFbx、MuRF-1呈顯著正相關（r值分別為0.82、0.92、0.86，P均lt;0.01）；血清IL-17與中性粒細胞百分比、NF-κB p50、E2-14K、MAFbx、MuRF-1呈顯著正相關（r值分別為0.94、0.90、0.85、0.84及0.79，P均lt;0.01）；膈肌IL-17與中性粒細胞百分比、NF-κB p50、E2-14K、MAFbx、MuRF-1呈顯著正相關（r值分別為0.88、0.90、0.72、0.86及0.80，P均lt;0.01）；血清IL-17與膈肌IL-17呈顯著正相關（r=0.84，Plt;0.01）。結論 COPD大鼠膈肌中泛素-蛋白酶體通路與NF-κB通路表達上調可能是導致膈肌萎縮的主要原因之一，IL-17可能參與了膈肌萎縮的調控。
目的 觀察肌肉游離移植后泛素連接酶（MAFbx）mRNA 和蛋白表達的變化，以及肌肉萎縮和肌肉功能的動態恢復情況，并探討三者之間的關系。 方法 雌性SPF 級SD 大鼠36 只，體重（250 ± 25）g。隨機選取一側行股薄肌原位游離移植手術，作為實驗側；另一側不行手術作為對照側。術后觀察大鼠一般情況，于術后1、2、4、10、15 和30周，分別取6 只大鼠測量實驗側和對照側股薄肌肌肉收縮能力、肌濕重維持率，HE 染色觀察肌纖維橫截面積，實時定量PCR 檢測MAFbx/Atrogin-1 mRNA 相對表達量，Western blot 檢測MAFbx 蛋白表達。 結果 36 只大鼠全部成活，切口愈合好，實驗側肢體功能無障礙。實驗側肌纖維橫截面積、肌肉濕重維持率、肌肉最大單收縮力維持率和肌肉強直收縮力維持率均呈先降低（術后1 ～ 4 周）后增加（術后4 ～ 30 周）的趨勢。MAFbx mRNA 相對表達量術后2 周最高，為對照側7 倍；術后15 ～ 30 周逐漸下降，為對照側1.1 ～ 1.5 倍；各時間點實驗側與對照側比較，差異均有統計學意義（P lt; 0.05）。Western blot 檢測結果顯示術后1 ～ 15 周，實驗側肌肉內MAFbx 蛋白相對表達量與對照側相比，差異均有統計學意義（P lt; 0.05）；術后30 周差異無統計學意義（P gt; 0.05）。肌濕重維持率、肌纖維橫截面積恢復率分別與最大單收縮力維持率和最大強直收縮力維持率的相關系數為0.95、0.75 和0.93、0.68（P lt; 0.05）。MAFbx mRNA 及蛋白相對表達量分別與肌肉濕重維持率、肌纖維橫截面積恢復率、最大單收縮力維持率、最大強直收縮力維持率的相關系數為— 0.62（P lt; 0.05）、— 0.45（P gt; 0.05）、— 0.72（P lt; 0.05）、— 0.78（P lt; 0.05）和— 0.95（P lt; 0.05）、— 0.82（P lt; 0.05）、— 0.89（P lt; 0.05）、— 0.54（P gt; 0.05）。 結論 移植肌肉功能降低與肌肉萎縮密切相關。MAFbx mRNA 和蛋白表達增高，尤其在獲得神經支配后4 ～ 15周仍持續升高，可能是肌肉萎縮引起肌肉功能降低的一個聯系點。
目的 觀察泛素蛋白酶體抑制劑對早期糖尿病性視網膜病變(DR)中激活核轉錄因子（NF-kappa;B）和其抑制性信號蛋白Ikappa;B激酶的降解調控作用，及其對視網膜神經節細胞(RGC)凋亡的影響。方法 健康成年雄性Wistar大鼠40只，用數字隨機法隨機分為正常對照組（A組）、DR安慰劑組（B組）、DR+蛋白酶體抑制劑（MG132）低濃度干預組（C組），DR+MG132高濃度干預組（D組），每組10只大鼠。給藥后6、8周，檢測每組大鼠體重、血糖，并制備視網膜石蠟切片，采用免疫組織化學法分析NF-kappa;B及其抑制性信號蛋白Ikappa;B在大鼠視網膜中的表達。采用原位凋亡檢測（TUNEL）法分析RGC的凋亡情況。結果 NF-kappa;B在B組表達較A組明顯增強，D組表達強度較B組減弱；Ikappa;B在B組表達較A組明顯減少，D組表達強度較B組增強；RGC凋亡在B組的表達較A組明顯增多，D組表達強度較B組減少；差異均有統計學意義(P＜0.01)。C組NF-kappa;B和Ikappa;B的表達強度及RGC凋亡與B組相比，差異均無統計學意義(P＜0.05)。結論 泛素蛋白酶體抑制劑MG132通過抑制 Ikappa;B泛素化降解，阻斷NF-kappa;B激活，抑制RGC的凋亡。
目的 通過檢測人睪丸生殖細胞腫瘤中的Skp2蛋白質異常表達,探討相關意義。 方法 應用S-P免疫組織化學法檢測睪丸生殖細胞腫瘤，正常睪丸組織和慢性睪丸炎組織中Skp2的表達。 結果 睪丸生殖細胞腫瘤中Skp2陽性表達率為74.5%，正常睪丸組織中Skp2陽性表達率為20.0%，在慢性睪丸炎組織中Skp2陽性表達率為40.0%，在3種不同睪丸組織中表達差異有統計學意義（P＜0.05）；Skp2表達與不同組織學類型的睪丸生殖細胞腫瘤無相關性（P＞0.05）；隨著臨床分期的增高，睪丸生殖細胞腫瘤中的Skp2表達增多，差異無統計學意義（P＞0.05）。 結論 在人睪丸生殖細胞腫瘤中的Skp2高表達，提示細胞周期的異常調控在睪丸生殖細胞腫瘤的發生、分化中起著重要的作用。
【摘要】目的 研究小分子泛素樣修飾體-1(small ubiquitin-like modifier-1，SUMO-1)在野生型p53基因誘導HepG2細胞凋亡中的作用。方法 用含人野生型p53基因質粒pcDNA3-wtp53(pwtp53)、含人雙微粒體基因2〔（human double minute gene 2 (HDM2)； 鼠同源基因為MDM2〕質粒pCMV-HDM1B(pMDM2)、含人SUMO-1基因質粒pcDNA3-His6-SUMO-1(pSUMO-1)和空質粒pcDNA3分別或同時轉染HepG2細胞，獲得各轉染細胞系，應用Western blot檢測轉染后細胞中質粒蛋白的表達及流式細胞技術檢測細胞凋亡比例。結果 轉染pwtp53和pMDM2質粒的HepG2細胞均可見p53及MDM2蛋白條帶，同時轉染pSUMO-1質粒的細胞分別可見被SUMO-1修飾的相對分子量較大的p53和MDM2蛋白條帶，在未轉染任何質粒、僅轉染空質粒和pSUMO1質粒的細胞中只檢測到少量p53蛋白表達。轉染pwtp53及pwtp53+pSUMO-1質粒的HepG2細胞凋亡比例分別為(16.79±1.62)%和(18.15±1.36)%，轉染pwtp53+pMDM2+pSUMO-1質粒的細胞凋亡比例為(14.06±1.84)%，轉染pwtp53+pMDM2質粒的細胞凋亡比例則下降至(5.17±1.23)%，與前三者比較差異有顯著性意義(PH＜0.01)； 其他轉染系細胞中的細胞凋亡比例均≤2%，差異無顯著性意義。結論 SUMO-1通過與p53蛋白的結合或翻譯后修飾，抑制MDM2等癌基因蛋白對p53蛋白的降解，可增強p53抑癌基因誘導的細胞凋亡。