目的? 對毛囊干細胞增殖與分化相關信號通路的研究現狀與應用前景進行綜述。? 方法? 查閱近年國內外關于毛囊干細胞增殖與分化相關信號通路的研究文獻，并進行回顧及綜合分析。? 結果? 調節毛囊干細胞增殖與分化的多條信號通路，包括 BMP /TGF-β、Wnt、Notch、外胚層發育不全基因等，在皮膚組織的發育、更新及修復過程中發揮著重要調控作用。? 結論? 毛囊干細胞可作為皮膚創面修復的一種重要細胞學治療方法。
目的 毛乳頭細胞被廣泛用于組織工程毛囊和皮膚構建。探討用含血清的角質形成細胞培養基（keratinocyte medium，KM）和普通培養基（normal medium，NM）培養毛乳頭細胞的生物學特性差異，以及KM 培養的毛乳頭細胞是否可用于組織工程毛囊研究。 方法 采用兩步酶消化法從除皺術時切下的頭皮標本中分離培養毛乳頭，接種后分別采用KM 和NM 培養毛乳頭細胞并傳代。記錄毛乳頭最早貼壁時間及細胞遷出時間，接種5 d 時統計毛乳頭貼壁率。倒置顯微鏡下觀察兩組細胞形態學變化，計數第3 代細胞每皿聚集體個數；記錄細胞最大傳代次數；細胞融合成膜后對消化的細胞膜片行HE 染色觀察。取第3 代細胞行MTT 法檢測細胞增殖；免疫熒光染色和ALP 染色觀察α- 平滑肌肌動蛋白（α-smooth muscle actin，α-SMA）和ALP 在兩組細胞中的表達，并統計ALP 藍色陽性區域面積。 結果 KM組毛乳頭最早貼壁時間及細胞遷出時間分別為24 h 及64 h，早于NM 組的48 h 及80 h。5 d 時KM 組及NM 組毛乳頭貼壁率分別為54.17% 及36.78%。NM 組細胞體積較KM 組大。NM 組第3 代細胞每皿形成（3.06 ± 1.12）個聚集體，KM組每皿形成（9.25 ± 1.73）個聚集體，兩組比較差異有統計學意義（P lt; 0.05）。KM 組細胞融合后細胞膜片行HE 染色可見細胞呈多層性；NM 組細胞不能多層性生長，未行HE 染色觀察。NM 組細胞最多可傳7 代；KM 組最多可傳15 代。MTT檢測顯示KM 組細胞增殖迅速，7 d 后KM 組吸光度值明顯高于NM 組，差異有統計學意義（P lt; 0.05）。免疫熒光染色顯示，兩組第3 代細胞α-SMA 均為陽性。ALP 染色顯示，NM 組第6 代細胞中僅少量細胞表達ALP，陽性區域面積為（987 ±146）μm2；KM 組第14 代細胞ALP 染色仍為陽性，陽性區域面積為（8 757 ± 558）μm2；兩組比較差異有統計學意義（P lt;0.05）。 結論 毛乳頭細胞在含血清的KM 中增殖迅速，聚集生長明顯，傳代次數增多；用含血清KM 培養毛乳頭細胞用于組織工程毛囊構建是可行的。
【摘 要】 目的 探討從人毛囊隆突區細胞（bulge cells，BCs）獲取高純度有活性的人毛囊干細胞（hair folliclestem cells，HFSCs）的方法及條件。 方法 取自愿捐獻的成人頭皮標本，顯微分離培養獲得BCs，應用免疫磁珠純化BCs 中CD200 陽性的HFSCs。苔盼藍染色比較純化前后細胞活性；流式細胞儀檢測細胞純化效率；免疫熒光檢測純化前后細胞CD200 的表達情況。 結果 顯微分離培養獲得的人毛囊BCs，培養6 d 后細胞生長融合，呈鋪路石樣。所得細胞角蛋白19 組織化學染色陽性。CD200 免疫磁珠分選法純化細胞后，苔盼藍染色顯示純化前細胞活力為95.0% ± 0.6%，純化后為94.2% ± 1.0%，差異無統計學意義（P gt; 0.05）。流式細胞儀及免疫熒光檢測顯示純化前CD200 陽性細胞的純度為8.31%，純化后CD200 陽性細胞純度為82.31%，純化后CD200 陽性細胞回收率為65.39％。 結論 聯用顯微分離培養與免疫磁珠法，可獲得高純度HFSCs，且細胞活性不受影響。
目的 對毛囊干細胞(hair follicle stem cell，FSC)參與創面修復過程及相關信號轉導通路的研究進展進行綜述。 方法 廣泛查閱近年國內外相關文獻，對FSC定位、細胞表面標記物、與創面修復的關系及相關信號轉導通路研究進展進行回顧總結與分析。 結果 FSC在維持毛囊循環和創面修復中具有重要作用。已知參與調控這一過程的信號轉導通路有 Wnt、骨形成蛋白/轉化生長因子β、Notch、Shh和成纖維細胞生長因子等。 結論 FSC在創面修復等再生醫學中有廣闊的應用前景，有關其增殖分化調控的研究將成為創面修復及組織工程等領域內新的研究熱點。
目的 建立利用毛囊干細胞和成纖維細胞進行全層皮膚重建的實驗方法。 方法 取美容手術切取的頭皮組織，K19免疫熒光染色定位毛囊干細胞，消化、分離、體外培養，以膠原成纖維細胞聚合物為基質，采用氣-液界面對第2代毛囊干細胞立體培養14 d ，建立全層皮膚培養模型，并行組織學及K1免疫熒光染色觀察。 結果 K19免疫熒光染色定位毛囊干細胞存在于毛囊外根鞘處，與成纖維細胞聯合體外氣液界面立體培養14 d，獲得的皮膚類似物，可見真皮基底膜形成，表皮多層上皮有序、多角形排列，上層細胞出現角化，真皮部成纖維細胞均勻分布于膠原基質中，角質細胞形成分化特異標志物K1染色陽性。 結論 毛囊外根鞘處的毛囊干細胞具有高增殖能力并向表皮細胞分化，可成功利用毛囊干細胞和成纖維細胞進行皮膚重建，為臨床應用奠定基礎。
目的 探討培養的毛乳頭細胞在體內外條件下誘導毛囊形成的可能性。方法 采用酶消化法獲得毛乳頭細胞、真皮鞘細胞、毛囊上、下段及球部細胞 ,進行毛囊組織工程重建 ,或用游離細胞混合移植于裸鼠 ,組織學觀察毛囊形成情況。 結果 毛囊間表皮細胞、毛囊上段上皮細胞、下段上皮細胞和球部細胞在間質細胞凝膠上均可形成雙層結構的組織工程皮膚 ,在真皮鞘細胞膠原凝膠上毛囊的上、下段上皮細胞形成了毛囊結構 ,移植于裸鼠后 8周毛乳頭細胞膠原凝膠誘導毛囊上、下段細胞形成了毛囊。低代毛乳頭細胞與毛囊上皮細胞混合移植形成了數量較多、結構典型的毛囊 ,并有肉眼可見的毛發纖維產生。結論 毛囊的真皮成分細胞即毛乳頭細胞、真皮鞘細胞在體內、外均具有誘導毛囊形成的能力 ,通過與毛囊上皮細胞之間的相互作用 ,可誘導毛囊形成。
目的為獲得持續高表達VEGF165的大鼠毛囊干細胞（rat hair follicle stem cells，rHFSCs），觀察慢病毒載體介導VEGF165基因對rHFSCs的轉染及其表達情況。 方法切取1周齡SD大鼠觸須部皮膚，Dispase酶和Ⅳ型膠原酶混合消化，顯微鏡下分離毛囊隆突部，組織塊培養rHFSCs；經Ⅳ型膠原差速貼壁純化后，分別取不同代次rHFSCs繪制細胞生長曲線；聯合應用免疫熒光染色及實時熒光定量PCR（real time quantitative PCR，RT-qPCR）檢測相關基因鑒定細胞。鈣轉法包裝pLV-內部核糖體進入位點（internal ribosome entry site，IRES）-VEGF165-增強型綠色熒光蛋白（enhanced green fluorescent protein，EGFP）（實驗組）和pLV-IRES-EGFP空載體（對照組）慢病毒，用兩組慢病毒轉染rHFSCs。倒置熒光顯微鏡下觀察實驗組綠色熒光表達情況，RT-PCR和Western blot法分別檢測VEGF165 mRNA和蛋白表達情況。 結果分離、培養、純化的rHFSCs呈典型“鋪路石”狀，貼壁較牢，克隆形成能力強；純化后細胞培養1～2 d處于生長潛伏期，5～6 d處于對數生長期；細胞免疫熒光染色可見毛囊干細胞標志物角蛋白15（cytokeratin 15，CK15）、整合素α6和整合素β1表達呈陽性；RT-qPCR檢測可見干細胞標志物CK15、CK19、整合素α6和整合素β1表達量高，而表皮干細胞標志物CD34和角質形成細胞標志物CK10表達量均較低。倒置熒光顯微鏡觀察示，實驗組慢病毒介導VEGF165基因轉染14 d后轉染效率可達85.76%±1.91%；RT-PCR和Western blot檢測示，實驗組VEGF165 mRNA和蛋白表達均呈陽性，對照組均呈陰性。 結論經顯微鏡聯合組織塊分離培養、Ⅳ型膠原差速貼壁篩選后，可得到高純度rHFSCs，細胞增殖能力強。慢病毒介導的VEGF165基因修飾方法可成功轉染并得到高表達VEGF165 mRNA和蛋白的rHFSCs，可為組織工程構建人工毛囊、血管及皮膚等提供良好的種子細胞。
目的探討綠色熒光蛋白（green fluorescent protein，GFP）標記的C57小鼠皮膚表皮和真皮細胞共移植誘導裸鼠毛囊重建的實驗研究。 方法取C57-GFP新生及成年小鼠分離表皮與真皮，分別制備成年小鼠原代真皮-表皮混合細胞（按1∶1比例混合）、成年小鼠原代真皮細胞、新生小鼠第3代真皮細胞，熒光顯微鏡觀察細胞激發綠色熒光情況，免疫細胞化學檢測培養的新生小鼠第3代真皮細胞毛囊干細胞標志。取Balb/c裸鼠，分別將成年小鼠原代真皮-表皮混合細胞（A組）、成年小鼠原代真皮細胞（B組）、新生小鼠第3代真皮細胞（C組）及生理鹽水（D組）移植至裸鼠皮下，術后4、5、6周行大體觀察，6周時取移植部位皮膚行GFP免疫組織化學染色觀察各組毛囊形成情況。 結果熒光顯微鏡觀察示，分離、培養的C57-GFP新生及成年小鼠表皮及真皮細胞均能激發綠色熒光；免疫細胞化學檢測培養的第3代真皮細胞中毛囊干細胞標志，顯示波形蛋白、α-平滑肌肌動蛋白強陽性，表明細胞多為真皮鞘細胞；部分細胞表達毛乳頭細胞標志CD133、多能聚糖及毛囊隆突部標志角蛋白15。裸鼠皮下移植實驗：大體觀察示A組可見接種部位皮下呈灰黑色，但未見毛發穿出皮膚表面；B、C、D組裸鼠皮膚均無著色。免疫組織化學染色示，A組形成新的、完整的毛囊結構或參與形成毛囊；B組GFP陽性細胞多表達于毛囊真皮鞘、外根鞘；C組GFP陽性細胞主要分布于毛囊真皮鞘、外根鞘、毛乳頭，在汗腺中也有表達；D組GFP染色呈陰性。 結論小鼠皮膚的表皮和真皮細胞在裸鼠體內相互作用可形成完整的毛囊結構，而僅移植新鮮分離或培養的真皮細胞則主要參與毛囊形成，無法形成完整的毛囊結構。
目的綜述近年來創傷性毛囊新生（wound-induced hair follicle neogenesis，WIHN）細胞來源及相關信號通路的研究進展。方法廣泛查閱近年與 WIHN 相關的文獻，從細胞來源、分子機制等方面進行總結討論。結果WIHN 是一種罕見的成年哺乳動物毛囊再生現象，新生毛囊細胞來源豐富，既有創面周圍來源的毛囊干細胞，也有上皮來源的干細胞。WIHN 分子機制復雜，是一種多種信號通路調控的再生過程，與免疫系統密切相關，免疫細胞及其產生的各種免疫因子為這一過程提供了適宜的條件。結論WIHN 的細胞來源及分子機制等方面仍有許多未解決的問題，加強機制研究將加深對成年哺乳動物毛囊再生的了解，為皮膚功能性愈合提供新思路。