目的 毛乳頭細胞被廣泛用于組織工程毛囊和皮膚構建。探討用含血清的角質形成細胞培養基（keratinocyte medium，KM）和普通培養基（normal medium，NM）培養毛乳頭細胞的生物學特性差異，以及KM 培養的毛乳頭細胞是否可用于組織工程毛囊研究。 方法 采用兩步酶消化法從除皺術時切下的頭皮標本中分離培養毛乳頭，接種后分別采用KM 和NM 培養毛乳頭細胞并傳代。記錄毛乳頭最早貼壁時間及細胞遷出時間，接種5 d 時統計毛乳頭貼壁率。倒置顯微鏡下觀察兩組細胞形態學變化，計數第3 代細胞每皿聚集體個數；記錄細胞最大傳代次數；細胞融合成膜后對消化的細胞膜片行HE 染色觀察。取第3 代細胞行MTT 法檢測細胞增殖；免疫熒光染色和ALP 染色觀察α- 平滑肌肌動蛋白（α-smooth muscle actin，α-SMA）和ALP 在兩組細胞中的表達，并統計ALP 藍色陽性區域面積。 結果 KM組毛乳頭最早貼壁時間及細胞遷出時間分別為24 h 及64 h，早于NM 組的48 h 及80 h。5 d 時KM 組及NM 組毛乳頭貼壁率分別為54.17% 及36.78%。NM 組細胞體積較KM 組大。NM 組第3 代細胞每皿形成（3.06 ± 1.12）個聚集體，KM組每皿形成（9.25 ± 1.73）個聚集體，兩組比較差異有統計學意義（P lt; 0.05）。KM 組細胞融合后細胞膜片行HE 染色可見細胞呈多層性；NM 組細胞不能多層性生長，未行HE 染色觀察。NM 組細胞最多可傳7 代；KM 組最多可傳15 代。MTT檢測顯示KM 組細胞增殖迅速，7 d 后KM 組吸光度值明顯高于NM 組，差異有統計學意義（P lt; 0.05）。免疫熒光染色顯示，兩組第3 代細胞α-SMA 均為陽性。ALP 染色顯示，NM 組第6 代細胞中僅少量細胞表達ALP，陽性區域面積為（987 ±146）μm2；KM 組第14 代細胞ALP 染色仍為陽性，陽性區域面積為（8 757 ± 558）μm2；兩組比較差異有統計學意義（P lt;0.05）。 結論 毛乳頭細胞在含血清的KM 中增殖迅速，聚集生長明顯，傳代次數增多；用含血清KM 培養毛乳頭細胞用于組織工程毛囊構建是可行的。
引用本文： 焦虎,范金財,劉立強,康寧,田佳,甘承,馮蘇云,嚴笠,谷聰敏. 角質形成細胞培養基培養毛乳頭細胞的實驗研究. 中國修復重建外科雜志, 2010, 24(2): 138-142. doi: 復制