目的研究反復凍融結合核酸酶處理小牛肌腱脫細胞效果以及對肌腱組織形態、結構、生化成分和力學特性的影響。 方法取新鮮1日齡西門塔爾小牛跟腱48根,隨機分為3組(n=16):A組為正常對照組,B組采用液氮冷凍/37℃復溫反復凍融5次,C組在反復凍融基礎上結合核酸酶處理24 h。每組取2根跟腱用于掃描電鏡觀察,3根用于、組織學及免疫組織化學染色觀察,3根用于DNA殘留量檢測,8根用于生物力學檢測。 結果掃描電鏡觀察示A、B組膠原纖維排列致密有序,形態完整,未見斷裂;C組膠原纖維排列松散,幾乎無斷裂。阿利新藍、天狼星紅染色及免疫組織化學染色示C組糖胺聚糖、Ⅰ型膠原、Ⅲ型膠原、纖維連接蛋白大部分被保留;HE染色和DAPI染色示A、B組膠原纖維間可見較多完整的細胞核,而C組膠原纖維之間未見完整細胞核,但腱內膜上仍有部分細胞核殘留。A、B、C組的DNA殘留量分別為(0.24 ± 0.12)、(0.16 ± 0.07)、(0.05 ± 0.02)μg/mg,C組顯著低于A、B組(P lt; 0.05);A、B組間差異無統計學意義(P gt; 0.05)。 生物力學檢測顯示,A、B、C組間拉伸強度、斷裂應變、剛度和彈性模量差異均無統計學意義(P gt; 0.05)。 結論反復凍融結合核酸酶處理小牛肌腱,可有效去除細胞成分,同時基本保留肌腱原始膠原纖維結構、形態、大部分細胞外基質成分和力學特性。
目的 研究胸腰椎爆裂骨折兩種方法植骨后傷椎椎體的植骨量、骨缺損空隙殘存率及生物力學穩定性。 方法 取18個4~6月齡新鮮小牛脊柱腰段(L1~5)離體標本,制備L3椎體爆裂骨折模型,模擬胸腰椎爆裂骨折行傷椎撐開復位、椎弓根螺釘內固定。將18個標本隨機分為3組,每組6個,A組傷椎椎體內不植骨,B組行經雙側椎弓根傷椎椎體內植骨,C組行經單側椎管傷椎椎體內植骨。記錄B、C組植骨量;將3組標本行DR片及CT觀察傷椎椎體骨缺損空隙大體情況;經CT掃描后采用數格子法計算傷椎椎體骨缺損空隙殘存率;應用ElectreForce-3510高精度生物材料試驗機測試標本壓縮剛度。 結果 B、C組植骨量分別為(4.58 ± 0.66)g和(5.72 ± 0.78)g,比較差異有統計學意義(t=2.707,P=0.022)。DR片及CT觀察示: A組標本傷椎椎體內見較大骨缺損空隙;B組傷椎椎體的“蛋殼樣”空隙內可見骨粒填充,多集中于傷椎椎體后半部,椎體前部填充不足;C組傷椎椎體內較多骨粒填充,分布均勻。A、B、C組標本骨缺損空隙殘存率分別為52.0% ± 5.5%、39.7% ± 2.5%、19.5% ± 2.5%,C組顯著低于A、B組,B組顯著低于A組,差異均有統計學意義(P lt; 0.05)。前屈壓縮剛度C組顯著高于A、B組(P lt; 0.05),A、B組間比較差異無統計學意義(P gt; 0.05);后伸壓縮剛度C組顯著高于A組(P lt; 0.05),但A、B組間及B、C組間差異均無統計學意義(P gt; 0.05);左側彎及右側彎壓縮剛度3組間比較差異均無統計學意義(P gt; 0.05)。 結論 胸腰椎爆裂骨折椎弓根釘棒系統固定結合經單側椎管傷椎椎體內植骨較經雙側椎弓根傷椎椎體內植骨植入骨量更多,更充分,術后骨缺損空隙殘存率更小,對恢復脊柱前屈-壓縮剛度更好。
目的 前交叉韌帶(anterior cruciate ligament,ACL)重建術腱- 骨愈合情況是手術成敗的關鍵因素。將不同濃度富血小板血漿(platelet-rich plasma,PRP)/ 異種小牛脫蛋白骨(deproteinized bone,DPB)凝膠復合物作為骨隧道填充物,觀察ACL 重建后腱- 骨愈合的組織學變化,探討該復合物對腱- 骨愈合的促進作用,并確定PRP 的最佳濃度。 方法 取新西蘭大白兔耳中央動脈血8 mL,采用Landesberg 方法制備PRP,并將上清液作為稀釋劑,制備濃度分別為30%、60%、100% 的PRP。取新鮮新生小牛股骨骺端松質骨,經30% H2O2、乙醚交替浸泡24 h,連續6 次,制備DPB。將DPB 浸泡于不同濃度PRP 中并加入激活劑制備PRP/DPB 凝膠復合物。取54 只8 ~ 12 月齡新西蘭大白兔,體重(2.5 ± 0.4)kg,隨機分成3 組(n=18),分別為30%PRP/DPB 凝膠復合物組(A 組)、60%PRP/DPB 凝膠復合物組(B 組)、100%PRP/DPB 凝膠復合物組(C 組)。實驗動物制備雙側ACL 缺損模型。隨機取一側下肢以對應濃度的PRP/DPB 凝膠復合物作為骨隧道填充物,以自體半腱肌肌腱重建ACL,作為實驗側;另一側行自體半腱肌肌腱重建ACL,作為對照側。術后觀察各組動物一般情況,于術后3、6、12 周取材行大體觀察及HE 染色,光鏡下觀察腱- 骨愈合情況,并參照Demirag等標準對腱- 骨界面愈合情況進行Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ級半定量評價。 結果 大體觀察:術后3 周各組關節滑液稍增多,股骨隧道內未見骨樣組織;6 周時各組無關節積液,隧道內口見瘢痕組織增生;12 周時各組移植肌腱與骨隧道壁纖維組織連接致密。組織學觀察:A 組實驗側術后3 周,腱- 骨界面間形成新生肉芽組織界面;6 周時腱- 骨界面間出現寬度不一的Sharpey 樣纖維;12 周時腱- 骨界面Sharpey 樣纖維排列有序,形成不規則、模糊的“潮線”。B 組實驗側在各時間點腱-骨界面膠原纖維連接均優于其他各組;術后3 周腱- 骨界面發現排列較規整的類軟骨細胞;6 周時腱- 骨界面骨隧道類軟骨細胞單位面積數量明顯多于其他組;12 周時腱- 骨界面可見移植物類軟骨細胞增生,分化成熟,Sharpey 樣纖維連接致密有序。C 組實驗側3 周時腱- 骨界面膠原纖維連接與A 組實驗側及對照側相似,6、12 周相對成熟的致密結締組織分化較差。參照Demirag 等標準對腱- 骨界面愈合進行分級,術后3、6 周B 組實驗側和對照側、術后12 周B 組實驗側與C組實驗側,比較差異均有統計學意義(P lt; 0.05);其余各組實驗側之間以及同組實驗側與對照側比較,差異均無統計學意義(P gt; 0.05)。 結論 PRP 濃度為60% 時,其與DPB 的復合物形成凝膠后具有良好的生物相容性和骨誘導作用,可提高兔ACL 重建術后腱- 骨愈合。
目的系統評價小牛血清去蛋白提取物(DCBE)治療干眼的有效性和安全性。方法計算機檢索PubMed、EMbase、The Cochrane Library、CNKI、WanFang Data、CBM和VIP數據庫,搜集有關DCBE治療干眼有效性和安全性的研究,檢索時限均為建庫至2021年8月31日。由2名研究者獨立篩選文獻、提取資料并評價納入研究的偏倚風險后,采用RevMan 5.3軟件進行Meta分析。結果共納入59個研究。Meta分析結果顯示:DCBE治療干眼的總有效率優于空白對照[RR=1.20,95%CI(1.12,1.29),P<0.000 01]、玻璃酸鈉滴眼液[RR=1.22,95%CI(1.16,1.28),P<0.000 01]和羥糖甘滴眼液[RR=1.15,95%CI(1.04,1.27),P=0.006]。DCBE的藥物不良事件發生率與空白對照、玻璃酸鈉滴眼液的差異均無統計學意義。結論現有證據表明,DCBE治療干眼具有較好的療效和安全性。受納入研究數量和質量的限制,上述結論尚待更多高質量研究予以驗證。
目的系統評價小牛血清去蛋白提取物(DCBE)治療糖尿病并發癥的有效性和安全性。方法計算機檢索PubMed、EMbase、The Cochrane Library、CNKI、WanFang Data、CBM和VIP數據庫,搜集DCBE治療糖尿病并發癥有效性和安全性的臨床研究,檢索時限均為建庫至2020年7月8日。由2名研究者獨立篩選文獻、提取資料并評價納入研究的偏倚風險后,采用RevMan 5.3軟件進行Meta分析。結果共納入69個研究。Meta分析結果顯示:對于糖尿病神經病變,DCBE的總有效率優于空白對照、甲鈷胺、維生素B12、維生素B1+維生素B12、維生素B2等;對于糖尿病足,DCBE的總有效率優于空白對照、敏感抗菌素和復方丹參注射液;對于糖尿病性視網膜病變,DCBE的總有效率優于空白對照。DCBE不良事件發生率為4.59%,但差異與各對照組無統計學意義。結論現有證據顯示,DCBE治療糖尿病神經病變、糖尿病足、糖尿病性干眼癥、糖尿病性視網膜病變等均具有較好的有效性和安全性。受納入研究數量和質量的限制,上述結論尚待更多高質量研究予以驗證。