目的探討培養液中不同濃度FBS對成骨生長肽(osteogenic growth peptide,OGP)促進BMSCs增殖和分化的影響。 方法取8只5周齡SD大鼠四肢骨，貼壁法分離純化BMSCs并傳代，倒置相差顯微鏡下觀察細胞形態。取第3代BMSCs分組培養：分別采用濃度為1×10-10、1×10-9和1×10-8 mol/L的OGP進行培養，以正常培養細胞作為對照組；同時每組設FBS濃度為0、2%、5%、8%和10% 5個梯度。培養后1、3、5、7、9、12 d采用MTT法檢測細胞增殖，9 d時采用對硝基苯磷酸二鈉法測定早期分化指標細胞內ALP活性。 結果倒置相差顯微鏡下觀察BMSCs貼壁生長，增殖迅速，呈纖維狀渦旋生長，形態典型。MTT檢測示，FBS低于5%時各組細胞不能持續增殖，當FBS濃度為8%以上時細胞可持續增殖；OGP 1×10-8 mol/L和1×10-9 mol/L組在FBS各濃度中促增殖效果均大于對照組（P＜0.05）；FBS濃度低于10%時，OGP 1×10-8 mol/L組促增殖效果顯著優于其余OGP濃度組（P＜0.05），但FBS濃度為10%時OGP 1×10-8 mol/L組無促增殖優勢。ALP檢測示，各組組內隨FBS濃度增加，ALP活性增加（P＜0.05）；當FBS濃度為5%、8%時，各OGP濃度組ALP活性均大于對照組（P＜0.05），且OGP 1×10-8mol/L組最高（P＜0.05）；當FBS濃度為10%時，各OGP組ALP活性仍大于對照組（P＜0.05），但OGP 1×10-8 mol/L組與OGP 1×10-9 mol/L組差異無統計學意義(P＞0.05)。 結論8%FBS濃度為OGP促進BMSCs增殖分化的最佳血清濃度，且OGP促進BMSCs增殖分化的最適濃度為1×10-8 mol/L。
目的 比較大鼠骨髓來源與前交叉韌帶（anterior cruciate ligament，ACL）來源的 MSCs 體外增殖及成骨、成軟骨、成脂分化潛能的差異。 方法 取 SPF 級 6 周齡雄性 BN 大鼠 10 只，體質量 200～220 g，無菌條件下分別取大鼠骨髓及 ACL，貼壁法培養獲取 BMSCs 與 ACL 來源 MSCs 并進行傳代，倒置相差顯微鏡下觀察細胞形態變化。取生長良好的第 3 代細胞，流式細胞儀檢測細胞免疫表型 CD34、CD45、CD90 和 CD29 表達；細胞計數試劑盒 8（cell counting kit 8，CCK-8）法檢測細胞體外增殖能力，克隆形成實驗檢測細胞體外克隆形成能力；行成骨、成軟骨及成脂體外誘導多向分化能力檢測；實時熒光定量 PCR 檢測成骨[ALP、骨鈣蛋白、RUNX2、BMP-2、分泌性磷蛋白 1（secreted phosphoprotein 1，Spp1）]、成軟骨[Ⅱ 型膠原 α1（collagen type Ⅱ α1，Col2α1）、軟骨聚糖蛋白（Aggrecan，Acan）、Sox9]及成脂[過氧化物酶體增殖物激活受體 γ2（peroxisome proliferator activated receptor γ2，PPARγ2）、CCAAT/增強子結合蛋白 α]相關基因 mRNA 相對表達量。 結果 第 3 代 ACL 來源 MSCs 與 BMSCs 形態相似，均表現為貼壁生長的長梭形細胞。流式細胞儀檢測示，兩種細胞均表達 CD29、CD90，基本不表達 CD45 及 CD34。CCK-8 法檢測示，ACL 來源 MSCs 的吸光度（A）值（1.11±0.08）顯著高于 BMSCs（0.78±0.05），差異有統計學意義（t=3.599，P=0.023）；ACL 來源 MSCs 的細胞集落數[（53.00±5.51）個/孔]亦明顯多于 BMSCs[（30.67±4.84）個/孔]（t=3.045，P=0.038）。經成骨、成軟骨、成脂體外誘導培養 21 d 后，BMSCs 及 ACL 來源 MSCs 均表現為茜素紅、甲苯胺藍及油紅 O 染色陽性。實時熒光定量 PCR 檢測示，ACL 來源 MSCs 的 BMP-2、Spp1、Col2α1、Acan、Sox9 及 PPARγ2 mRNA 相對表達量顯著高于 BMSCs，差異均有統計學意義（P<0.01）。 結論 ACL 來源 MSCs 比 BMSCs 具有更強的體外增殖能力，在相同體外條件下更易向軟骨分化，是一種有潛力的促進腱骨愈合的種子細胞。
目的 通過將 BMP-2 和地塞米松分別及聯合作用于體外培養的人牙髓細胞，探討兩者對牙髓細胞增殖和分化能力的影響。 方法 取 25 歲以下患者因正畸原因拔出的無病變牙牙髓組織，采用組織塊法體外培養人牙髓細胞并傳至第3代，行波形蛋白和角蛋白免疫細胞化學染色鑒定。取生長狀況良好的第 3～5 代牙髓細胞分為 4 組，A、B、C 組分別加入 100 ng/mL BMP-2、1×10–8 mol/L 地塞米松、100 ng/mL BMP-2 以及 1×10–8 mol/L 地塞米松，D 組不添加誘導劑作為對照組。培養 1、3、5、7 d 繪制細胞生長曲線；培養 5、7 d 行 RT-PCR 檢測成牙本質細胞形成標記基因表達情況，包括牙本質涎磷蛋白（dentin sialophoshoprotein，DSPP）、牙本質基質蛋白 1（dentin matrix protein 1，DMP-1）、ALP；培養 14 d 行 ALP 染色并計算陽性染色面積占總面積比值；培養 21 d 行茜素紅染色并測定 562 nm 波長處吸光度（A）值。 結果 成功分離培養呈長梭形的人牙髓細胞，經波形蛋白和角蛋白免疫細胞化學染色鑒定顯示符合牙髓細胞的生物學特征。隨培養時間延長，各組細胞均逐漸增加，5 d 時達峰值，7 d 時降至 3 d 水平。培養 5 d，A、B、C 組細胞顯著多于 D 組，C 組多于 A 組，A 組多于 B 組，比較差異均有統計學意義（P<0.05）。RT-PCR 檢測示，培養 5 d，A、B、C 組 ALP、DSPP、DMP-1 mRNA 相對表達量均顯著高于 D 組，C 組顯著高于 A、B 組，差異均有統計學意義（P<0.05）；A、B 組間比較差異無統計學意義（P>0.05）。培養 7 d，除 A、B、C 組 DSPP mRNA 相對表達量顯著高于 D 組（P<0.05）外，其余各組間各基因相對表達量比較差異均無統計學意義（P>0.05）。培養 14 d ALP 染色示，各組可見紫黑色沉淀，其中 C 組著色程度最深；經半定量測定，C 組陽性染色面積占總面積比值顯著高于 A、B、D 組，A、B 組高于 D 組，差異均有統計學意義（P<0.05）；A、B 組間差異無統計學意義（P>0.05）。培養 21 d 茜素紅染色示，C 組礦化結節呈片狀大面積分布，A、B 組呈散在分布，D 組無礦化結節形成；各組間A 值比較差異均有統計學意義（P<0.05）。 結論 BMP-2 對牙髓細胞的增殖作用比地塞米松更明顯，兩者對牙髓細胞分化作用差異不明顯；但與單獨應用相比，兩者聯合應用對牙髓細胞的增殖和分化有明顯促進作用。