目的 建立恒河猴外周血CD4+CD25+調節性T淋巴細胞（regulatory T cells，Tregs）快速有效的分離純化方法。 方法4～5歲健康恒河猴10只，雌性4只，雄性6只，體重5～8 kg；于大隱靜脈抽取外周血，每只抽取8 mL。密度梯度離心法分離外周血單個核細胞（peripheral blood mononuclear cell，PBMC），分別采用非人靈長類Tregs分離試劑盒的生物素標記的混合抗體和磁珠標記的抗生物素抗體陰性分選，以及大鼠抗人CD4-活化蛋白C（activated protein C，APC）和抗APC多選試劑盒中的磁珠標記的抗APC抗體陽性分選出 CD4+ T淋巴細胞，比較兩種方法獲得細胞的得率、活性及純度；選擇得率、活性和純度較高的分選方法獲得的CD4+ T淋巴細胞，用磁珠標記的抗人CD25抗體進行陽性分選，獲得 CD4+CD25+ Tregs，流式細胞儀檢測純度、活性及FoxP3表達水平，以及Tregs對刀豆蛋白（concanavalin A，ConA）刺激的自體CD4+CD25-效應性T淋巴細胞（effective T cells，Teffs）增殖的抑制功能。 結果CD4+ T淋巴細胞陽性分選和陰性分選后，細胞活性均達95%左右，差異無統計學意義（P gt; 0.05），但陽性分選后CD4+ T淋巴細胞得率和純度均顯著高于陰性分選（P lt; 0.05）。后續CD4+CD25+ Tregs分選采用陽性分選法獲得的CD4+ T淋巴細胞。經雙陽性分選收集的目的細胞中CD4+CD25+ Tregs占76.2% ± 8.6%，活細胞比例為93.3% ± 4.7%，FoxP3陽性細胞比例為74.2% ± 6.9%。混合培養后Tregs均對ConA刺激的Teffs的增殖有抑制作用。 結論免疫磁珠雙陽性分選法能有效分選出恒河猴外周血中有功能的CD4+CD25+ Tregs。
【摘 要】 目的 探討從人毛囊隆突區細胞（bulge cells，BCs）獲取高純度有活性的人毛囊干細胞（hair folliclestem cells，HFSCs）的方法及條件。 方法 取自愿捐獻的成人頭皮標本，顯微分離培養獲得BCs，應用免疫磁珠純化BCs 中CD200 陽性的HFSCs。苔盼藍染色比較純化前后細胞活性；流式細胞儀檢測細胞純化效率；免疫熒光檢測純化前后細胞CD200 的表達情況。 結果 顯微分離培養獲得的人毛囊BCs，培養6 d 后細胞生長融合，呈鋪路石樣。所得細胞角蛋白19 組織化學染色陽性。CD200 免疫磁珠分選法純化細胞后，苔盼藍染色顯示純化前細胞活力為95.0% ± 0.6%，純化后為94.2% ± 1.0%，差異無統計學意義（P gt; 0.05）。流式細胞儀及免疫熒光檢測顯示純化前CD200 陽性細胞的純度為8.31%，純化后CD200 陽性細胞純度為82.31%，純化后CD200 陽性細胞回收率為65.39％。 結論 聯用顯微分離培養與免疫磁珠法，可獲得高純度HFSCs，且細胞活性不受影響。
腫瘤干細胞是腫瘤治療新理論，近年來受到廣泛關注，也備受爭議。該理論認為腫瘤干細胞是腫瘤細胞的來源，是腫瘤發生耐藥、復發、轉移的根本原因。目前通過懸浮細胞培養法、流式細胞分選法、免疫磁珠分選法等多種方法，已從多種實體瘤細胞系或組織中分離和鑒定出腫瘤干細胞，包括乳腺癌、腦腫瘤、結腸癌、胰腺癌、卵巢癌等，研究其生物學特性、特異性標志物及調控機制，有望為腫瘤治療提供新的思路和策略。研究腫瘤干細胞，首先要對其分離和培養，現就目前腫瘤干細胞的分離方法研究進展予以綜述。
目的觀察胃癌患者外周血循環腫瘤細胞（CTCs）的檢出情況，探討其與胃癌臨床病理特征的關系。 方法選取2011年9月至2013年9月期間在筆者所在醫院經病理學檢查證實的60例胃癌患者為研究對象，并與同期40例胃良性疾病對照；采集其靜脈血，經CellTracks AutoPrep系統檢測其CTCs陽性率，并分析CTCs與胃癌臨床病理特征的關系。 結果胃癌組CTCs檢出率為 70.0%（42/60），對照組CTCs檢出率為7.5%（3/40），胃癌患者外周血組CTCs檢出率顯著高于胃良性疾病者（P<0.05）。胃癌患者外周血CTCs檢出率與患者性別、年齡、 N分期、遠處轉移、腫瘤大小及脈管侵犯均無關（P>0.05），而與腫瘤TNM分期及分化程度有關（P<0.05）。外周血CTCs檢測陰性的胃癌患者，其術后12個月及18個月的累積生存率均高于CTCs檢測陽性者（P<0.05）。 結論CTCs檢測方便，胃癌患者外周血中CTCs檢出率較高，其外周血CTCs的檢出情況可以反應胃癌的進展程度，可作為其預后判斷的指標。
目的 評估免疫磁珠分選技術分選肝癌干細胞的效率。 方法 ① CD90 的表達檢測：采用免疫組織化學染色 SP 法檢測 8 例正常肝組織、58 例肝癌及其癌旁組織中 CD90 的表達。② 細胞系篩選：將 Huh-7、MHCC97-H、SMMC-7721 及 Bel7402 細胞系分為空白對照組和實驗組（細胞數量均為 5.5×105 個，均為 1 孔），實驗組細胞中加入 5 μL CD90–PE 抗體，空白對照組加入 5 μL CD90– 無熒光抗體。采用流式細胞術檢測 4 種細胞系空白對照組和實驗組的 CD90+ 細胞比例，以篩選細胞。③ 免疫磁珠分選：將 Huh-7 和 MHCC97-H 細胞系分別進行磁珠標記后進行磁珠分選。收集流經磁珠分選柱（MS）后的細胞懸液 1 mL，作為 CD90– 組；將 MS 移出磁場區域，加入 1 mL PBS 緩沖液快速沖洗至離心管中，標記為 CD90+ 組；以未分選細胞作為空白對照組（加入 CD90– 無熒光抗體）和未分選實驗組（加入 CD90–PE 抗體）。對 Huh-7 細胞系進行二次分選。采用流式細胞儀檢測 4 組細胞中的 CD90+ 細胞比例。④ 無血清培養和含血清培養：將 Huh-7 細胞接種到無血清培養基專用 6 孔板中進行培養（無血清和含血清懸浮培養均為 1 孔），1 周后采用流式細胞儀檢測無血清培養和含血清培養后細胞中的 CD90+ 細胞比例。 結果 ① 正常肝組織中 CD90 的表達陽性率為 0（0/8），肝癌組織為 65.5%（38/58），癌旁組織為 20.7%（12/58）。肝癌組織中 CD90 的表達陽性率較正常肝組織（χ2=6.78，P<0.05）和癌旁組織高（χ2=20.83，P<0.05）。② Huh-7、MHCC97-H、SMMC-7721 及 Bel7402 細胞系中實驗組的 CD90+細胞比例分別為 0.851%、1.090%、2.710% 及 4.050%，空白對照組分別為 0.241%、0.688%、1.890% 及 2.080%，故選擇 Huh-7 和 MHCC97-H 細胞系進行下一步的免疫磁珠分選。③ Huh-7 細胞經一次分選后：未分選空白對照組的 CD90+ 細胞比例為 0.241%，未分選實驗組為 0.851%，CD90– 組為 0.574%，CD90+ 組為 1.100%；二次分選后：未分選空白對照組的 CD90+ 細胞比例為 0.032%，未分選實驗組為 0.961%，CD90– 組為 0.426%，CD90+ 組為 9.700%。 結論 正常肝組織實質細胞不表達 CD90，肝癌組織高表達 CD90。肝癌細胞系 Huh-7 和 MHCC97-H 中存在少量的 CD90+ 細胞，免疫磁珠分選法能明顯提高 CD90+ 細胞比例，但作用十分有限。無血清懸浮培養法對富集 CD90+ 細胞無明顯作用。