目的 將間充質干細胞( MSCs) 作為基因載體, 利用基因轉染技術構建高表達促血管生成素1( Ang1) 基因的MSCs, 回輸體內治療炎癥性肺損傷模型, 觀察其肺內定位和修復作用。方法 分離、培養和擴增MSCs 至第四代, 經流式細胞儀鑒定, 得到純度較高的MSCs。同時以三質粒共轉染法在293T 細胞中制備病毒顆粒Lenti-GFP-Ang1, 并轉染MSCs, 通過實驗確定轉染的最佳MOI 和最佳時間, 通過RT-PCR 檢測轉染后MSCs 中Ang1 的基因表達, 確定轉染成功。以脂多糖霧化吸入的方式誘導小鼠炎癥性肺損傷模型, 設未處理組為對照, 設三組干預組, 包括攜帶Ang1 的MSCs 組( MSC-Ang1 組) 、單純Ang1 組( Ang1 組) 和單純MSCs 組( MSCs 組) 。觀察并記錄各組生存天數, 計算生存率并進行生存分析; 免疫組化確定外源MSCs 源性細胞在肺部的表現。結果 經多重純化后,流式細胞儀鑒定獲得的干細胞為CD44( + ) 、Sca-1( + ) 、CD31( - ) 和CD45( - ) 的MSCs, 并具有分化潛能。病毒載體構建亦通過鑒定成功。MSCs 株經轉染后高表達Ang1 基因, 當MOI = 20 時, MSCs 的細胞活性及轉染達到最佳效果, 經熒光檢測在第5 d 達表達高峰。生存率分析顯示MSC-Ang1 組生存率稍高于對照組, 但差異無統計學意義( P = 0. 066) 。移植后受損肺組織內可見表達綠色熒光蛋白的肺泡上皮樣細胞和肺血管內皮樣細胞。結論 高表達目的基因Ang1 的MSCs 可通過基因技術有效構建, 移植體內后, 可在肺內檢測到MSCs 的轉化修復。MSCs 可作為治療肺部疾病的基因運載工具
目的 探討促血管生成素與胃癌微血管生成的關系,以及與胃癌微循環中存在的各種血管生長因子間的相互調控作用。方法 采用文獻回顧的方法,對有關促血管生成素和胃癌血管生成的關系進行綜述。結果 促血管生成素在胃癌微循環中的表達與胃癌的血管生成有關系,但與各種血管生成因子之間的相互調控作用仍存在爭議。結論 促血管生成素在胃癌微小血管的萌芽、發展、凋亡等一系列過程中扮演著重要的角色。
目的觀察攜帶促血管生成素(angiopoietin)基因的肝癌細胞系SMMC7721對血管內皮細胞的趨化作用,為進一步研究促血管生成素在肝癌血管生成中的作用奠定基礎。方法通過脂質體介導的基因轉染方法將促血管生成素基因導入SMMC7721肝癌細胞系,采用小孔趨化分析實驗觀察肝癌細胞系對臍靜脈血管內皮細胞(采用原代培養2~3代之細胞)的趨化作用。結果促血管生成素1(Ang-1)基因轉染前、后SMMC7721肝癌細胞使臍靜脈血管內皮細胞遷移數分別為(21±2)個/HPF和(62±3)個/HPF,差異有統計學意義(Plt;0.05)。促血管生成素2 (Ang-2)基因轉染后與轉染前相比差異無統計學意義 (Pgt;0.05)。 這種趨化作用可以被相應抗體所阻斷。 結論Ang-1對血管內皮細胞具有明顯的趨化作用,是新生血管形成的促進因子; Ang-2對血管內皮細胞沒有明顯的趨化作用。
目的 研究環氧合酶-2(cyclooxygenase-2,Cox-2)及血管生成素-2 (angiopoietin-2,Ang-2)在大腸癌組織、癌旁組織及正常大腸組織中的表達及其與大腸癌臨床病理特征之間的關系。方法 采用免疫組化SP法檢測45例大腸癌組織、45例癌旁組織及15例正常大腸組織中Cox-2和Ang-2的表達情況。 結果 大腸癌組織中的Cox-2和 Ang-2的表達陽性率(80.0%,66.7%)均分別高于癌旁組織(35.6%,11.1%)及正常大腸組織(0,0),P均<0.01。在大腸癌組織中Cox-2和Ang-2蛋白表達與淋巴結轉移及Dukes分期有關(P<0.05),且二者的表達具有相關性(P<0.01)。結論 Cox-2和Ang-2在大腸癌發生、發展中起重要作用,二者在表達上密切相關。
目的探討兔橈骨骨缺損處局部注射促血管生成素 2(angiopoietin 2,Ang-2),通過調控自噬促進組織工程人工骨早期血管化和骨缺損修復的機制。方法取 48 只新西蘭大白兔,構建單側 1.5 cm 長橈骨缺損模型,于骨缺損處植入羥基磷灰石/膠原支架后,隨機分為兩組,對照組(A 組)和 Ang-2 組(B 組)分別于術后 2 周內每日于骨缺損處注射 1 mL 生理鹽水和 1 mL 溶于生理鹽水的 400 ng/mL Ang-2。采用 Western blot 檢測骨痂區自噬相關蛋白微管相關蛋白 1 輕鏈 3(microtubule associated protein 1 lightchain 3,LC3)和 Beclin-1,血管生成相關蛋白 VEGF 及自噬降解底物蛋白 SQSTMl/p62 的表達。術后 4、8、12 周行 X 線片檢查,采用 Lane-Sandhu X 線評分法對骨缺損修復情況進行評分;術后 12 周處死動物取標本行大體觀察,采用 HE 染色觀察骨缺損區血管生成情況。結果Western blot 檢測示,B 組 LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ、Beclin-1 及 VEGF 相對表達量高于 A 組,SQSTMl/p62 相對表達量低于 A 組,差異均有統計學意義(P<0.05)。影像學及標本大體觀察示 A 組僅有少量骨痂生成,但骨缺損未修復;B 組新生骨痂較多,骨缺損處完全修復。術后 4、8、12 周 B 組 Lane-Sandhu 評分均顯著高于 A 組(P<0.05)。HE 染色示 B 組哈佛管排列整齊,新生血管顯著多于 A 組,差異有統計學意義(t=–11.879,P=0.000)。結論局部注射適宜濃度 Ang-2 可能通過增強自噬促進兔體內組織工程人工骨早期血管化和骨缺損修復。