徐金富 1 , 瞿介明 2 , 宋琳 3 , 何禮賢 3 , 賽音 4 , 余龍 4 , 李惠萍 1
  • 1 同濟大學附屬上海市肺科醫院呼吸科（上海 200433）;;
  • 2 復旦大學附屬華東醫院呼吸科（上海 200040）;;
  • 3 復旦大學附屬中山醫院呼吸科（上海 200032）;;
  • 4 復旦大學遺傳工程國家重點實驗室（上海 200433）;
間充質干細胞 促血管生成素1 載體 基因治療 肺損傷
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摘要 全文 圖表 參考文獻 施引文獻 補充材料

目的  將間充質干細胞( MSCs) 作為基因載體, 利用基因轉染技術構建高表達促血管生成素1( Ang1) 基因的MSCs, 回輸體內治療炎癥性肺損傷模型, 觀察其肺內定位和修復作用。方法  分離、培養和擴增MSCs 至第四代, 經流式細胞儀鑒定, 得到純度較高的MSCs。同時以三質粒共轉染法在293T 細胞中制備病毒顆粒Lenti-GFP-Ang1, 并轉染MSCs, 通過實驗確定轉染的最佳MOI 和最佳時間, 通過RT-PCR 檢測轉染后MSCs 中Ang1 的基因表達, 確定轉染成功。以脂多糖霧化吸入的方式誘導小鼠炎癥性肺損傷模型, 設未處理組為對照, 設三組干預組, 包括攜帶Ang1 的MSCs 組( MSC-Ang1 組) 、單純Ang1 組( Ang1 組) 和單純MSCs 組( MSCs 組) 。觀察并記錄各組生存天數, 計算生存率并進行生存分析; 免疫組化確定外源MSCs 源性細胞在肺部的表現。結果  經多重純化后,流式細胞儀鑒定獲得的干細胞為CD44( + ) 、Sca-1( + ) 、CD31( - ) 和CD45( - ) 的MSCs, 并具有分化潛能。病毒載體構建亦通過鑒定成功。MSCs 株經轉染后高表達Ang1 基因, 當MOI = 20 時, MSCs 的細胞活性及轉染達到最佳效果, 經熒光檢測在第5 d 達表達高峰。生存率分析顯示MSC-Ang1 組生存率稍高于對照組, 但差異無統計學意義( P = 0. 066) 。移植后受損肺組織內可見表達綠色熒光蛋白的肺泡上皮樣細胞和肺血管內皮樣細胞。結論  高表達目的基因Ang1 的MSCs 可通過基因技術有效構建, 移植體內后, 可在肺內檢測到MSCs 的轉化修復。MSCs 可作為治療肺部疾病的基因運載工具

引用本文： 徐金富 ,瞿介明,宋琳,何禮賢,賽音,余龍,李惠萍. 高表達促血管生成素1 間充質干細胞的構建及其在肺損傷中的應用. 中國呼吸與危重監護雜志, 2009, 09(6): 575-579. doi: 復制

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