目的 用脫細胞脫鈣骨基質和脫細胞髓核基質構建新型一體化纖維環-髓核雙相支架，并進行理化檢測，探討其作為組織工程椎間盤支架的可行性。 方法 取豬股骨近端松質骨，塑形成外徑10 mm、內徑5 mm、厚3 mm的骨環，經脫脂、脫鈣、脫細胞處理制備成纖維環相支架；取豬尾髓核組織，Triton X-100和脫氧膽酸聯合脫細胞后粉碎、離心，制備脫細胞髓核基質；將制備的脫細胞髓核基質注入纖維環相支架中央，冷凍干燥，聯合應用紫外照射和碳化二亞胺進行交聯，制備一體化纖維環-髓核雙相支架。通過大體觀察、HE染色、掃描電鏡觀察支架結構；測定支架的孔隙率、吸水率、壓縮彈性模量；MTT法檢測25%、50%、100%支架浸提液對新西蘭大白兔脂肪來源干細胞（adipose-derived stem cells，ADSCs）增殖的影響；將ADSCs接種到支架上，活/死細胞染色觀察細胞在支架上的活性。 結果 大體觀察支架呈乳白色；HE染色可見支架均質紅染，無細胞成分殘留；掃描電鏡可見外層纖維環相支架孔徑大小均勻一致，孔隙相互貫通，中央脫細胞髓核基質微絲相互連接，形成均勻網狀結構，交界處連接緊密。纖維環相支架孔徑為（343.00± 88.25）μm，一體化纖維環-髓核雙相支架孔隙率為82.98% ± 7.02%、吸水率為621.53% ± 53.31%，壓縮彈性模量為（89.07± 8.73）kPa。經MTT測定支架浸提液對ADSCs增殖無影響；活/死細胞染色可見細胞在支架上生長良好，無死細胞。 結論 用脫細胞脫鈣骨基質和脫細胞髓核基質構建的一體化纖維環-髓核雙相支架具有合適的孔徑和孔隙率且無毒，力學性能與人正常椎間盤接近，是構建組織工程椎間盤的理想支架載體。
目的體外評估PKH26標記對山羊髓核細胞生物學功能的影響，并結合活體熒光成像系統評價種子細胞在裸鼠體內的生物學行為。 方法取1歲齡山羊椎間盤分離髓核組織，通過酶消化法獲取原代細胞，倒置相差顯微鏡下觀察，傳代獲取第1代髓核細胞，行PKH26熒光標記，熒光顯微鏡下觀察標記后的細胞熒光強度，并行甲苯胺藍和Ⅱ型膠原免疫細胞化學染色觀察，錐蟲藍染色比較標記前后細胞活性，MTT法檢測標記前后細胞增殖特性，實時熒光定量PCR檢測細胞Ⅰ、Ⅱ型膠原及蛋白聚糖基因表達。將標記后的髓核細胞接種至一體化纖維化-髓核支架的髓核部分，纖維環部分作為陰性對照，體外培養3 d后植入5只6周齡雄性裸鼠體內，培養6周后活體成像技術檢測髓核細胞-支架復合物在體內的熒光強度及范圍。結果 倒置相差顯微鏡觀察示原代髓核細胞簇狀生長，呈卵圓形，第1代髓核細胞呈類軟骨樣細胞形態；標記后的第1代髓核細胞甲苯胺藍染色和Ⅱ型膠原免疫細胞化學染色均呈陽性；標記后熒光強度均勻，標記前后細胞活性均在95%以上；標記前后細胞生長曲線比較差異無統計學意義（P gt; 0.05）；實時熒光定量PCR檢測示標記前后細胞Ⅰ、Ⅱ型膠原和蛋白聚糖基因相對表達量差異均無統計學意義（P gt; 0.05）。活體成像技術顯示體內髓核支架有強烈熒光，纖維環支架未見熒光。結論 PKH26標記對髓核細胞的活性、增殖及細胞表型的表達無明顯影響，結合體內活體熒光成像系統可以追蹤細胞在體內的生物學行為。
目的利用軟骨細胞與脂肪來源干細胞（adipose-derived stem cells，ADSCs）共培養，觀察ADSCs是否能向軟骨細胞定向分化。 方法4月齡健康新西蘭大白兔8只，雌雄不限，體重2.2～2.7 kg，分離、培養兔軟骨細胞和ADSCs，取第2代細胞用于實驗。將實驗分為兩組，實驗組各取將1 mL細胞密度為2 × 104個/mL的軟骨細胞和ADSCs分別接種至Transwell小室6孔板上、下層共同培養，對照組單獨培養ADSCs。倒置相差顯微鏡觀察兩組ADSCs形態變化；培養14 d后行甲苯胺藍染色、Ⅱ型膠原免疫組織化學染色，實時熒光定量PCR檢測兩組ADSCs Ⅱ型膠原、蛋白聚糖、SOX9 mRNA表達。 結果倒置相差顯微鏡觀察示，隨培養時間延長，實驗組ADSCs逐漸變為軟骨樣細胞形態，呈圓形；對照組ADSCs仍以梭形為主，呈束狀或漩渦狀生長。培養14 d，實驗組甲苯胺藍染色、Ⅱ型膠原免疫組織化學染色均為陽性；對照組均為陰性；實時熒光定量PCR檢測示，實驗組Ⅱ型膠原、蛋白聚糖、SOX9 mRNA相對表達量分別為1.43 ± 0.07、2.13 ± 0.08、1.08 ± 0.08，顯著高于對照組（0.04 ± 0.03、0.13 ± 0.04、0.10 ± 0.02），差異均有統計學意義（P lt; 0.05）。 結論通過與軟骨細胞共同培養，ADSCs可定向分化為軟骨細胞。
目的制備并評價載有BMP-7功能片段的新型功能化自組裝多肽納米纖維水凝膠支架材料RADKPS的生物相容性，為其在退變髓核再生領域中的體內研究提供實驗依據。 方法以自組裝多肽RADA16-Ⅰ為原料，通過化學鍵鏈接BMP-7功能片段構建功能化自組裝多肽RADA-KPSS，再與RADA16-Ⅰ等比例混合制備新型功能化自組裝多肽RADKPS。通過大體觀察、原子力顯微鏡評估RADKPS支架材料的結構特點。分離培養3月齡新西蘭大白兔BMSCs，取第3代BMSCs與RADKPS復合培養7 d，通過掃描電鏡、細胞熒光素二乙酸鹽/碘化丙啶活性染色、MTT法檢測RADKPS的細胞相容性；于6月齡新西蘭大白兔離體椎間盤內注射1% RADKPS后培養并觀察其髓核內細胞活性。采用溶血實驗檢測RADKPS的血液相容性。將RADKPS植入6～8周齡昆明小鼠皮下28 d，行大體觀察及HE染色觀察RADKPS組織相容性。 結果RADKPS在L-DMEM中成膠后呈均勻透明水凝膠狀；原子力學顯微鏡示納米纖維相互連接呈三維網狀結構，纖維直徑（25.68±4.62）nm，纖維長度（512.42±32.22）nm。RADKPS支架復合BMSCs 7 d后，掃描電鏡示細胞在支架上黏附良好，細胞活性維持在90%以上；MTT檢測示0.1%、0.05%、0.025% RADKPS溶液均不同程度促進新西蘭大白兔BMSCs增殖。溶血實驗結果示，不同濃度RADKPS溶液相對溶血率均＜5%，符合醫用生物材料的溶血實驗要求。小鼠皮下注射實驗結果示，28 d后注射局部皮膚無水皰、紅斑及焦痂形成；HE染色示淋巴細胞等炎性細胞浸潤，大量纖維組織取代水凝膠支架，材料組織相容性良好。 結論新型功能化自組裝多肽納米纖維水凝膠支架材料RADKPS具有良好的生物相容性和安全性，適合于髓核的組織工程修復與再生研究。
目的對新型脫細胞骨基質材料（acellular bone matrix，ACBM）的組織學結構及細胞相容性進行觀察，探討其作為組織工程骨支架的可行性。 方法取健康18～24月齡雄性雜種犬股骨頭負重區骨柱，高壓水槍沖洗、脫脂，Trixon X-100、脫氧膽酸鈉等進行脫細胞等理化處理，制備新型ACBM支架；對其行掃描電鏡觀察，HE染色、天狼星紅染色及Hoechst 33258染色，評估其脫細胞程度及結構。采用密度梯度離心法分離培養犬BMSCs，取第3代BMSCs種植至ACBM支架上，MTT法分析支架浸提液毒性；復合培養3 d行倒置顯微鏡、掃描電鏡、活/死細胞熒光染色、組織學等觀察細胞在支架的生長、分化情況。 結果HE染色示ACBM支架去細胞徹底，無細胞碎片殘留；天狼星紅染色示支架呈深紅及黃紅相間染色；Hoechst 33258染色未見細胞殘留。掃描電鏡觀察示ACBM支架內孔洞相互貫通，具有天然骨的孔徑和孔隙率。MTT法檢測示，培養1～6 d不同濃度（25%、50%、100%）支架浸提液與對照H-DMEM培養液吸光度（A）值比較差異均無統計學意義（P gt; 0.05）。倒置顯微鏡、掃描電鏡、組織學觀察結果均顯示細胞在支架上黏附良好，增殖顯著，細胞基質分泌增加；活/死細胞染色示ACBM支架內細胞均呈綠色。 結論ACBM支架去細胞徹底，具備良好的孔徑和孔隙率，無毒，細胞相容性良好，可作為良好的支架載體用于組織工程骨的構建。