PKH26標記結合活體熒光成像技術在椎間盤組織工程研究中的應用_《中國修復重建外科雜志》

作者：

伍耀宏 ¹ , 徐寶山 ¹ , 楊強 ¹ , 李秀蘭 ² , 張楊馬信龍 ²¹ , 夏群 ¹ , 張春秋 ³ , 許海委 ¹ , 曾超 ¹

天津醫院（天津，300211）1脊柱外科，2骨科研究所細胞工程室;;
3天津理工大學機械工程學院;

關鍵詞：

椎間盤組織工程 PKH26 活體熒光成像技術山羊

DOI：

10.7507/1002-1892.20130045

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目的體外評估PKH26標記對山羊髓核細胞生物學功能的影響，并結合活體熒光成像系統評價種子細胞在裸鼠體內的生物學行為。方法取1歲齡山羊椎間盤分離髓核組織，通過酶消化法獲取原代細胞，倒置相差顯微鏡下觀察，傳代獲取第1代髓核細胞，行PKH26熒光標記，熒光顯微鏡下觀察標記后的細胞熒光強度，并行甲苯胺藍和Ⅱ型膠原免疫細胞化學染色觀察，錐蟲藍染色比較標記前后細胞活性，MTT法檢測標記前后細胞增殖特性，實時熒光定量PCR檢測細胞Ⅰ、Ⅱ型膠原及蛋白聚糖基因表達。將標記后的髓核細胞接種至一體化纖維化-髓核支架的髓核部分，纖維環部分作為陰性對照，體外培養3 d后植入5只6周齡雄性裸鼠體內，培養6周后活體成像技術檢測髓核細胞-支架復合物在體內的熒光強度及范圍。結果倒置相差顯微鏡觀察示原代髓核細胞簇狀生長，呈卵圓形，第1代髓核細胞呈類軟骨樣細胞形態；標記后的第1代髓核細胞甲苯胺藍染色和Ⅱ型膠原免疫細胞化學染色均呈陽性；標記后熒光強度均勻，標記前后細胞活性均在95%以上；標記前后細胞生長曲線比較差異無統計學意義（P gt; 0.05）；實時熒光定量PCR檢測示標記前后細胞Ⅰ、Ⅱ型膠原和蛋白聚糖基因相對表達量差異均無統計學意義（P gt; 0.05）。活體成像技術顯示體內髓核支架有強烈熒光，纖維環支架未見熒光。結論 PKH26標記對髓核細胞的活性、增殖及細胞表型的表達無明顯影響，結合體內活體熒光成像系統可以追蹤細胞在體內的生物學行為。

引用本文： 伍耀宏,徐寶山,楊強,李秀蘭,張楊馬信龍,夏群,張春秋,許海委,曾超. PKH26標記結合活體熒光成像技術在椎間盤組織工程研究中的應用. 中國修復重建外科雜志, 2013, 27(2): 207-211. doi: 10.7507/1002-1892.20130045 復制

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