【摘要】 目的 探討葡萄糖轉運蛋白Ⅰ型（glucose transporter 1，GLUT1）和腫瘤增殖細胞核抗原Ki-67在卵巢上皮性腫瘤組織中的表達及其臨床意義。 方法 收集2000年1月-2008年6月不同卵巢上皮性腫瘤病變患者119例的組織標本，采用免疫組織化學SP二步法檢測腫瘤組織中GLUT1和Ki-67的表達情況。 結果 卵巢交界性、惡性上皮性腫瘤灶性或廣泛高表達GLUT1和Ki-67，其表達強度有差異。卵巢良性上皮性腫瘤不表達GLUT1和Ki-67。在卵巢癌中GLUT1及Ki-67的表達強度與病理分級、臨床分期、預后有關。GLUT1表達強度與病理分型無關，Ki-67表達強度與病理分型有關。 結論 卵巢上皮性腫瘤組織中GLUT1和Ki-67的表達具有相關性，其表達強度與腫瘤的良惡性質和增殖狀態有關，二者同時檢測可以全面了解卵巢上皮性腫瘤的性質、卵巢癌惡性程度和生物學行為，對于判斷腫瘤的性質和預后有一定價值。【Abstract】 Objective To investigate the expression and clinical significance of glucose transporter-1 (GLUT1) and tumor proliferating karyon antigen Ki-67 in epithelial ovarian tumor tissue. Methods Immunohistochemistry SP method was used to detect the expression of GLUT1 and Ki-67 protein in epithelial ovarian tumor tissues from 119 patients diagnosed in our hospital from January 2000 to June 2008. Results The expressions of GLUT1 and Ki-67 had local or abroad higher expressions in the borderline and malignant epithelial ovarian tumor, and the expressive intensity was different. In benign tumors, the expression was negative. The expressive intensity of GLUT1 and Ki-67 had correlation with the grade, stage, and prognosis in malignant tumors. The expressive intensity of GLUT1 had no correlation with the type of malignant tumors, while Ki-67 related to the pathological types. Conclusion The expressions of GLUT1 and Ki-67 have relativity. The expressive intensity of GLUT1 and Ki-67 relates to the character and proliferation of epithelial ovarian tumors. The combined detection GLUT1 and Ki-67 is helpful to know the character of epithelial ovarian tumors, the malignant degree and biologic behavior of ovarian carcinoma, which is useful in estimating the character and prognosis of epithelial ovarian tumors.
目的探討胰腺癌細胞在二維平面培養和三維培養（Ⅰ型膠原和細胞外基質膠）中的生長特性。方法將3株胰腺癌細胞株SW1990、PCT和ASPC1分別采用上述3種培養方式進行培養，觀察細胞生長形態。采用CCK8法測定細胞生長曲線，采用乙醇固定碘化丙錠染色法檢測細胞周期分布。結果 細胞在二維平面培養系統中呈單層貼壁生長; 在Ⅰ型膠原和細胞外基質膠中細胞形成多細胞球樣體（multicellular spheroid，MCS），其生長速度較二維平面培養中的細胞慢。在二維平面培養中生長的SW1990、PCT和ASPC1細胞的S期細胞的比例分別為(29.6±3.0)%、(33.6±2.1)%和(33.1±1.8)%，明顯高于在Ⅰ型膠原中培養4 d和8 d形成的MCS的S期細胞比例〔(18.2±5.1)%、(14.5±3.2)%和(24.7±2.6)%〕，Plt;0.05，而G2/M期的細胞比例差異沒有統計學意義（Pgt;0.05）。在Ⅰ型膠原中培養4 d和8 d的SW1990和PCT細胞以及培養8 d的ASPC1細胞的G0/G1期細胞比例明顯高于其在二維平面培養中的細胞比例（Plt;0.05）。在Ⅰ型膠原中培養4 d的ASPC1細胞和SW1990細胞的S期細胞比例明顯高于其培養8 d的細胞比例（Plt;0.05）。結論不同的培養方式、培養介質對胰腺癌細胞的生長具有較大的影響。MCS三維培養系統能更好地模擬體內腫瘤細胞的生長狀況。
目的探討角質形成細胞（keratinocytes，KC）熱損傷后對真皮成纖維細胞（fibroblasts，Fb）Ⅰ、Ⅲ型膠原及基質金屬蛋白酶1（matrix metalloproteinase 1，MMP-1）表達的影響。 方法分離培養人正常Fb及KC，分別建立KC、Fb熱損傷模型；收集正常及熱損傷12 h后細胞培養上清，并配制成濃度為50%的細胞條件培養液。根據培養液不同將第3～5代Fb分為3組，分別采用含50%熱損傷KC培養上清（A組）、含50%正常KC培養上清（B組）的條件培養液及單純DMEM（C組）培養，24 h后收集3組細胞；另于培養0、1、2、6、12、24、48 h分別收集A組細胞。采用含50%熱損傷Fb培養上清的條件培養液培養Fb，于0、1、2、6、12、24、48 h收集細胞。采用實時熒光定量PCR檢測各時間點KC熱損傷條件培養上清對 Fb Ⅰ、Ⅲ型膠原及MMP-1 mRNA表達影響，以及Fb熱損傷條件培養上清對Fb MMP-1 mRNA表達影響。 結果KC熱損傷條件培養上清培養24 h，A組Ⅰ、Ⅲ型膠原及MMP-1 mRNA相對表達量均顯著高于B、C組，差異有統計學意義（P lt; 0.05）。培養2、6、12、24、48 h，A組Ⅰ、Ⅲ型膠原及MMP-1 mRNA相對表達量均高于0 h（P lt; 0.05），1 h與0 h差異無統計學意義（P gt; 0.05）；隨培養時間延長相對表達量逐漸增高，2 h后各時間點間比較差異均有統計學意義（P lt; 0.05）。Fb熱損傷條件培養上清培養1、2、6、12、24、48 h，MMP-1 mRNA相對表達量與0 h比較，差異均有統計學意義（P lt; 0.05）；培養2 h后相對表達量逐漸降低，各時間點間差異均有統計學意義（P lt; 0.05）。 結論熱損傷后KC培養上清對Fb Ⅰ、Ⅲ型膠原及MMP-1的表達具有調控作用。
目的 探討Ⅰ型膠原濃度對膠原水凝膠理化性能的影響，以及在體外組織工程模型中不同濃度的Ⅰ型膠原水凝膠對軟骨細胞表型和基因表達的影響。 方法制備Ⅰ型膠原濃度為12、8、6 mg/mL的3種膠原水凝膠，記為C12、C8、C6。掃描電鏡觀察形貌，并通過溶脹性能和抗壓性能測試表征其理化性能。取2只新生7日齡新西蘭大白兔的關節軟骨，酶消化法分離、培養軟骨細胞。取第2代軟骨細胞與3種膠原水凝膠復合體外培養（C12組、C8組及C6組），1 d后采用二乙酸熒光素（fluorescein diacetate，FDA）/碘化丙啶（propidium iodide，PI）染色，激光共聚焦顯微鏡觀察細胞活性，體外培養14 d后行HE和甲苯胺藍染色觀察組織學形態，實時熒光定量PCR測定軟骨細胞相關基因，即Ⅱ型膠原、蛋白聚糖（Aggrecan）、Ⅰ型膠原、Ⅹ型膠原、Sox9 mRNA表達。 結果隨著Ⅰ型膠原濃度從6 mg/mL提高到12 mg/ mL，膠原水凝膠的理化性質出現明顯變化，掃描電鏡下纖維網絡變得致密； 192 h時C6、C8、C12溶脹率依次增大，分別為0.260 ± 0.055、0.358 ± 0.072、0.539 ± 0.033，比較差異均有統計學意義（P lt; 0.05）；壓縮模量逐漸增加，分別為（4.86 ± 0.96）、（7.09 ± 2.33）、（11.08 ± 3.18）kPa，比較差異均有統計學意義（P lt; 0.05）。體外培養1 d，3組凝膠中軟骨細胞經FDA/PI染色后，絕大部分被染成綠色，僅有少數被染成紅色。14 d后組織學觀察示：C12組軟骨細胞在組織中聚集明顯，并出現明顯的甲苯胺藍異染為紫紅色的現象；C8組中也有部分增殖聚集的區域，細胞周圍有較明顯的甲苯胺藍異染現象；C6組細胞分布較為均勻，也有較明顯的甲苯胺藍異染現象。實時熒光定量PCR檢測顯示，3組Ⅱ型膠原mRNA和Aggrecan mRNA表達水平相近；Ⅰ型膠原、Sox9和X型膠原mRNA表達水平C12組最高，C6組最低，C8組介于二者之間，組間差異均有統計學意義（P lt; 0.05）。 結論提高Ⅰ型膠原濃度至12 mg/mL后，膠原水凝膠具有更好的理化性質，但軟骨細胞纖維化和肥大相關基因表達也有所上調。
目的 富血小板血漿（platelet-rich plasma，PRP）具有促進損傷組織修復作用。通過觀察PRP 局部注射對大鼠跟腱斷裂早期愈合的影響，為臨床應用提供實驗依據。 方法 SPF 級SD 大鼠46 只，雌雄不限，體重190 ～ 240 g。取10 只大鼠心臟動脈血制備PRP 及貧血小板血漿（platelet-poor plasma，PPP）；其余36 只隨機分為3 組（n=12），分別為空白對照組、PPP 組及PRP 組。大鼠制備雙側跟腱斷裂模型后，PPP 組和PRP 組跟腱周圍局部對應注射PPP 及PRP，每側100 μL，每周1 次至處死；空白對照組不作處理。術后觀察大鼠一般情況，于1、2、3、4 周取雙側跟腱，行大體、組織學及免疫組織化學染色觀察，測量新生跟腱Ⅰ型膠原纖維含量；并于4 周行生物力學測試。 結果 大鼠均存活至實驗完成。隨著時間延長，各組大鼠跟腱水腫逐漸減退，滑動性逐漸改善；術后3 周內各組跟腱粘連逐漸加重，4 周時減輕，1、4 周時各組跟腱粘連程度分級差異均無統計學意義（P gt; 0.05）。術后1 周PRP 組炎性細胞浸潤、毛細血管及膠原纖維增殖較空白對照組、PPP 組明顯，之后炎性反應及毛細血管生成逐漸減少。各時間點各組均可見Ⅰ型膠原纖維陽性表達，術后1、2、3 周PRP 組Ⅰ型膠原纖維陽性密度值多于空白對照組和PPP 組（P lt; 0.05），4 周時3 組差異無統計學意義（P gt; 0.05）。生物力學測試：術后4 周3 組跟腱最大滑動距離比較，差異均無統計學意義（P gt; 0.05）；PRP 組跟腱彈性模量及最大抗拉力明顯高于空白對照組及PPP 組（P lt; 0.05）。 結論 大鼠跟腱斷裂早期于斷端周圍注射PRP 能促進跟腱愈合。
目的? 比較單純閉合復位、閉合復位后擇期骨塊切除以及急診切開骨塊切除復位 3 種方法治療 PipkinⅠ型股骨頭骨折伴髖關節后脫位的療效。? 方法 ? 2002 年 1 月－ 2008 年 1?月，收治 24 例 Pipkin Ⅰ型股骨頭骨折伴髖關節后脫位患者，分別采用單純閉合復位 8 例（閉合復位組）、閉合復位后擇期采用 Smith-Petersen 入路骨塊切除 8 例（擇期手術組）、急診 Smith-Petersen 入路骨塊切除復位 8 例（急診手術組）治療。閉合復位組：男 6 例，女 2 例；年齡 19 ～ 56歲，平均 37.6 歲。交通事故傷 6 例，高處墜落傷 1 例，重物壓傷 1 例。受傷至入院時間 1.0 ～ 7.5?h，平均 3.1?h。受傷至成功復位時間為（4.00?±?2.14）h。擇期手術組：男 7 例，女 1 例；年齡 21 ～ 59 歲，平均 37.3 歲。交通事故傷 7 例，高處墜落傷 1 例。受傷至入院時間 1.0 ～ 6.0?h，平均 3.2?h。受傷至成功復位時間為（3.90?±?1.47） h。急診手術組：男 5? 例， ?女 ?3? 例；年齡 20 ～ 58 歲，平均 35.5 歲。交通事故傷 5 例，高處墜落傷 1 例，重物壓傷 2 例。受傷至入院時間 1.5 ～ 6.5?h，平均3.3?h。受傷至成功復位時間為（5.10?±?2.04）h。3 組患者性別、年齡、病程、受傷至成功復位時間等一般資料比較，差異均無統計學意義（P?gt;?0.05），具有可比性。? 結果? 擇期手術組及急診手術組患者術后切口均Ⅰ期愈合。3 組患者均獲隨訪，隨訪時間 24 ～ 58 個月，平均 38.7 個月。術后 24 個月按 Thompson-Epstein 評分標準進行功能評定，閉合復位組優良率為 50.0%（4/8），擇期手術組為 87.5%（7/8），急診手術組為 87.5%（7/8）， 3 組優良率比較差異有統計學意義（χ2=9.803，P=0.020）。術后 24 個月，閉合復位組 1 例發生異位骨化（12.5%），擇期手術組 4 例（50.0%），急診手術組 4 例（50.0%）；閉合復位組發生股骨頭缺血性壞死 2 例（25.0%），其余兩組均未見； 3 組間各種并發癥發生率比較差異均無統計學意義（P?gt;?0.05）。? 結論? 采用 Smith-Petersen 入路擇期與急診行骨塊切除治療 Pipkin Ⅰ型股骨頭骨折伴髖關節后脫位的療效優于單純閉合復位；而擇期手術與急診手術療效相似。
目的 人Ⅰ型前膠原基因（Col Ⅰ A1）反義寡核苷酸（antisense oligodeoxyneucleotide，ASODN）對體外培養的人增生性瘢痕成纖維細胞有抑制膠原合成作用，擬進一步探討Col Ⅰ A1 ASODN 對裸鼠移植模型體內的人增生性瘢痕的膠原合成作用。 方法 SPF 級BALB/c-nunu 品系6 ～ 8 周齡雌性裸鼠60 只，體重約20 g；取行瘢痕切除手術患者自愿捐贈的瘢痕組織塊去表皮后，移植至裸鼠背部肩胛內側皮下，每只裸鼠移植1 塊，制備人增生性瘢痕裸鼠移植模型。將58 只成功制備模型的裸鼠根據處理方法不同，隨機分成3 組，于瘢痕移植2 周根據分組行經皮穿刺瘢痕內注射。A 組（n=20）：5 μL 濃度為3 mmol/L Col Ⅰ A1 ASODN、3 μL 脂質體、92 μL Opti-MEM Ⅰ減血清培養基；B 組（n=20）： 3 μL 脂 質體、97 μL Opti-MEM Ⅰ減血清培養基；C 組（n=18）：100 μL Opti-MEM Ⅰ減血清培養基。實驗最初2 周每天注射1 次，之后隔天1 次，至實驗取材。注射后2、4、6 周，對存活裸鼠進行瘢痕硬度測量后，處死裸鼠取瘢痕組織行膠原染色組織學觀察以及透射電鏡觀察；提取細胞總RNA 后行RT-PCR 測定Col Ⅰ A1 mRNA 相對含量；ELISA 法行Col Ⅰ A1 蛋白定量分析。 結果 注射后6 周內17 只裸鼠死亡；共41 只裸鼠40 塊瘢痕組織符合實驗標準，納入實驗；A、B、C 組各14、13、14 只。注射后2 周，3 組間瘢痕硬度比較，差異均無統計學意義（P gt; 0.05）；4、6 周時A 組與B、C 組比較， 差異有統計學意義（P lt; 0.05），B、C 組間比較差異無統計學意義（P gt; 0.05）。隨時間延長，組織學觀察示3 組Ⅲ型膠原表達上升，A 組最明顯，Ⅰ型膠原排列規則。透射電鏡觀察示A 組成纖維細胞退化，膠原纖維排列更趨于一致；B、C 組膠原纖維排列也逐漸規則。注射后2、4 周3 組間Col Ⅰ A1 mRNA 和蛋白表達量比較，差異均有統計學意義（P lt; 0.05）；6 周時A 組與B、C 組比較，差異有統計學意義（P lt; 0.05），B、C 組間比較差異無統計學意義（P gt; 0.05）。 結論 在人增生性瘢痕裸鼠移植模型的瘢痕內注射Col Ⅰ A1 ASODN 可抑制Col Ⅰ A1 mRNA 及Ⅰ型膠原表達，促進瘢痕組織成熟、軟化，脂質體可促進該抑制效果。
目的 總結新改良LeFort Ⅰ型截骨線在鼻旁凹陷畸形矯治中的應用。 方法 2008 年4 月－2009 年9 月，采用新改良LeFort Ⅰ型截骨線矯治3 例面中部發育不良鼻旁凹陷畸形女性患者。年齡18 ～ 26 歲。均表現為上頜后縮伴明顯鼻旁區凹陷及下頜前凸，為Angle Ⅲ類錯頜畸形。術前經正畸治療后，修正SNA 平均為73.6°，SNB 平均為82.7°。 結果 術中出血量400 ～ 600 mL，平均350 mL。術后切口均Ⅰ期愈合，無骨塊壞死等并發癥發生。3 例均獲隨訪，隨訪時間6 ～ 23 個月，平均15 個月。畸形無復發，面型穩定無變化，咬調整為Angle Ⅰ類咬。 結論 采用新改良LeFort Ⅰ型截骨線矯治鼻旁凹陷畸形效果理想。
探討陽離子脂質體介導Ⅰ 型前膠原基因（Col Ⅰ A1）反義寡核苷酸（antisense oligodeoxyneucleotide，ASODN）轉染對人增生性瘢痕成纖維細胞Col Ⅰ A1 表達的影響。 方法 取患者自愿捐贈瘢痕組織，采用組織塊法培養人增生性瘢痕成纖維細胞并傳代。于6 孔板內按32.25 × 104 個/ 孔的密度接種第4 代細胞，根據轉染液不同分為4 組：A 組為脂質體加Col Ⅰ A1 ASODN，B 組為Col Ⅰ A1 ASODN，C 組為脂質體，D 組為空白對照。轉染后8 h，1、2、3、4 d 分別提取細胞總RNA，行RT-PCR 后測定Col Ⅰ A1 mRNA 表達量；胃酶消化法提取ECM 中Col Ⅰ A1 蛋白，ELISA 測定其濃度。 結果 擴增產物經瓊脂糖凝膠電泳檢測顯示條帶清晰，無雜帶、明顯的引物二聚體及拖尾現象。Col Ⅰ A1 mRNA 相對表達量：轉染后8 h，A 組小于B、C、D 組，B、C 組小于D 組，比較差異均有統計學意義（P lt; 0.05）；B、C 組間比較差異無統計學意義（P gt; 0.05）；轉染后1 d，A、B 組小于C、D 組（P lt; 0.05），A、B 組間和C、D 組間比較差異無統計學意義（P gt; 0.05） ；轉染后2 d，各組間比較差異均有統計學意義（P lt; 0.05）；轉染后3、4 d，A 組小于B、C、D 組，B 組小于C、D 組（P lt; 0.05），C、D 組間差異無統計學意義（P gt; 0.05）。Col Ⅰ蛋白濃度：轉染后8 h，A組小于B、C、D 組，B、C 組小于D 組，比較差異均有統計學意義（P lt; 0.05），B、C 組間差異無統計學意義（PP gt; 0.05）；轉染后1 d，各組間比較差異均有統計學意義（P lt; 0.05）；轉染后2、3、4 d，A、B 組小于C、D 組，C 組小于D 組（P lt; 0.05），A、B 組間差異無統計學意義（P gt; 0.05）。 結論 Col Ⅰ A1 ASODN 抑制Col Ⅰ A1 mRNA 和蛋白表達；陽離子脂質體作為載體有增強效果，促進ASODN 進入細胞并在核內分布。
【摘 要】 目的 通過體外培養犬BMSCs，以膠原海綿作為支架材料，體外三維復合培養后，觀察向軟骨細胞定向誘導的可行性。 方法 健康家犬10 只，體重10 ～ 15 kg，雌雄不拘。抽取骨髓，體外培養BMSCs，傳至第3 代，倒置相差顯微鏡觀察細胞形態。實驗組將第3 代BMSCs 以1×106/mL 密度接種于膠原海綿支架材料，體外培養48 h 后，將細胞材料復合物以軟骨細胞定向誘導培養基進行誘導，每隔2 天換液；對照組將第3 代BMSCs 以相同密度接種于膠原海綿支架材料，每隔2 天以DMEM 換液。培養后14 d, 將細胞材料復合物行HE 染色和免疫組織化學染色觀察。 結果 倒置相差顯微鏡下第3 代BMSCs 與第2 代BMSCs 形態基本一致，傳代初期細胞伸出偽足，呈梭形或三角形，7 d 后逐漸以梭形為主，胞體飽滿，細胞傳代后增長速度明顯加快。組織學觀察：實驗組細胞廣泛分布于支架材料孔隙內，多數細胞呈多角形或者不規則形，少數呈短梭形，細胞周圍間隙可見基質成分；對照組細胞分布于支架材料孔隙內，呈梭形或圓形，核呈圓形或橢圓形，胞體較大，胞質透亮均勻，細胞核輪廓清楚，呈藍色。免疫組織化學染色顯示，實驗組支架材料孔隙內的細胞胞漿可見棕黃色顆粒，細胞周圍出現黃染區；對照組無表達。 結論 BMSCs 接種于膠原海綿材料后，經定向軟骨誘導后，可向軟骨組織方向分化。