目的擬用單體大黃素建立小鼠瀉劑結腸模型,觀察瀉劑結腸形成過程中Cajal間質細胞(interstitial cells of cajal,ICC)數目、干細胞因子(stem cell factor,SCF)及c-Kit蛋白的動態變化情況。 方法選取健康、雄性昆明(KM)小鼠72只,隨機均分為空白對照組和持續用藥組。觀察小鼠結腸的大體形態變化;冰凍切片免疫熒光標記觀察ICC數量;采用ELISA法測定小鼠血清SCF濃度;用Western blot法檢測結腸組織中c-Kit的含量。結果造模完成后小鼠體質量減輕,全結腸長度及管徑較空白對照組縮短和減小。與空白對照組比較,持續用藥組的ICC數量在開始應用大黃素第6周出現下降,至第10~12周顯著下降;血清SCF水平于第4周開始下降,第6周顯著下降,第8周后持續處于較低水平;結腸組織中c-Kit蛋白于第4周開始下降,第8周后明顯降低。 結論利用單體大黃素成功建立了小鼠瀉劑結腸模型;大黃素致瀉劑結腸過程中ICC的數量在造模后12周前呈緩慢下降趨勢,而至12周則顯著下降;同時SCF及c-Kit也存在動態變化,且SCF稍早于ICC出現變化;ICC的變化趨勢與SCF及c-Kit的變化可能有一定關系。
目的探討microRNA-199b-5p(miR-199b-5p)在尤文肉瘤細胞系中的功能,分析其作用機制,以期為臨床生物學治療提供理論依據。 方法取人尤文肉瘤細胞系A673、TC252,分別以miR-199b-5p寡核苷酸片段(mimic)及其陰性對照(mimic control)轉染,作為實驗組及對照組。實時熒光定量PCR檢測miR-199b-5p mRNA相對表達量,并與MSCs比較;細胞計數試劑盒8法檢測miR-199b-5p對細胞增殖的影響;流式細胞術法檢測對細胞周期及凋亡的影響。雙熒光報告基因實驗初步檢測miR-199b-5p可能作用的靶基因,Western blot驗證靶基因。 結果實時熒光定量PCR檢測示,對照組A673細胞及TC252細胞中的miR-199b-5p mRNA相對表達量與MSCs相比均顯著下降(P<0.05),與實驗組對應細胞相比亦顯著下降(P<0.05)。與對照組對應細胞相比,實驗組處于G1期細胞明顯增多,S期細胞明顯減少,比較差異均有統計學意義(P<0.05);而兩組G2/M期細胞無明顯差異(P>0.05)。實驗組細胞凋亡率與對照組對應細胞相比顯著增高(P<0.05)。雙熒光報告基因實驗檢測miR-199b-5p可能作用的靶基因是細胞周期調節蛋白1(cyclin-L1,CCNL1)和c-Kit。Western blot檢測顯示,與對照組對應細胞相比,實驗組CCNL1和c-Kit蛋白相對表達量明顯下調,差異均有統計學意義(P<0.05)。 結論miR-199b-5p能抑制尤文肉瘤細胞增殖,阻滯細胞周期轉換,促進細胞凋亡,其抑制作用是通過靶向CCNL1和c-Kit實現的。