中性粒細胞釋放的胞外誘捕網（NETs）是一把雙刃劍，了解NETs的形成機制對疾病治療具有重要意義。然而，壽命短、個體差異大以及無法進行基因編輯使得中性粒細胞難以被用來破譯NETs的形成。因此，尋找模式細胞替代中性粒細胞來研究NETs的形成機制是非常有必要的。在本研究中，我們使用不同濃度（0、0.1、1和10 μmol/L）的全反式維甲酸（ATRA）對HL-60細胞進行不同天數的分化（1、3、5和7天）。通過檢測細胞活力和細胞核形態，我們證實HL-60細胞經ATRA處理5天后可以分化為中性粒細胞樣細胞（dHL-60）。使用免疫熒光染色檢測NETs的形成，結果表明1 μmol/L的ATRA分化5天得到的dHL-60細胞在佛波酯（PMA）刺激下產生的NETs與中性粒細胞產生的相當，且都不伴隨組蛋白H3瓜氨酸化。此外，dHL-60 細胞形成的NETs依賴于NADPH而不依賴于PAD4，這與中性粒細胞一致。這些結果表明，經1 μmol/L ATRA分化5天的dHL-60細胞可作為中性粒細胞的模式細胞，用于NETs形成機制的研究。
【摘要】 目的 探討鐵螯合劑去鐵胺（DFO）對誘導白血病細胞HL-60的分子機制。 方法 2003年7-12月用鈣黃綠素（calcein）檢測HL-60細胞LIP。臺盼藍活細胞拒染實驗進行活細胞計數及細胞存活率測定；光鏡形態學觀察及流式細胞儀（FCM）等方法檢測HL-60細胞凋亡；比色法檢測caspase-3（基于pNA標記底物的比色法）活性。 結果 ①不同濃度的DFO作用于HL-60細胞后，隨培養時間延長及DFO濃度的增加，動態鐵池降低，細胞生存率逐漸下降，凋亡率增加，顯示一定的時間劑量依賴性。②HL-60細胞在不同濃度的DFO作用下，caspase-3的活性逐漸升高。50、100 μmol/L DFO作用于HL-60細胞24 h，caspase-3酶活性升高明顯，與對照組相比，有統計學意義（Plt;0.001）；相關分析結果顯示，HL-60細胞LIP的改變與caspase-3活性變化呈負相關系（r=-0.887，Plt;0.05）。 結論 DFO誘導白血病細胞凋亡的作用可能與螯合細胞內鐵，降低細胞LIP，激活caspase-3，最終實施細胞凋亡密切相關。【Abstract】 Objective To observe the changes of caspase-3 activity during apoptosis of HL-60 cells induced by an iron deferoxamine (DFO). Methods Exponentially growing HL-60 cells (1×106/mL) were used in this experiment from July 2003 to December 2003. The study groups were divided as follows: DFO group, iron+DFO group and control group. The viability was detected by typanblue, apoptosis was assessed by morphological study and flow cytometry (FCM) assay, and the caspase-3 activity was detected by melorimetry. The intracellular label iron pool (LIP) was measured with a fluorimetric assay using the metalsensitive probe calcein-AM. Results ①When HL-60 cells were incubated with different concentrations of DFO, viability assay was lower than that in the control group at the 12th, 24th and 48th hour (Plt;0.05). ② The cells incubated with different concentrations of DFO showed dose-time dependence and was much higher than that in the control group (Plt;0.01). ③The caspase-3 activity was significantly higher in the apoptotic cells than that in the control cells. Conclusions The apoptosis of HL-60 cells induced by DFO may be correlated with the decrease of cellular LIP and activity of caspase-3.